HIV转录阻遏物及其方法技术

本发明专利技术涉及抑制获得性免疫缺陷综合症（艾滋病）病毒基因组（ＲＮＡ）产生的阻遏物以及抑制其转录的方法。更具体的，本发明专利技术涉及抑制艾滋病病毒基因组（ＲＮＡ）的、由选自包括强有力抑制蛋白例如Ｓｐｌ、ＮＦ－ｋＢ的活性的蛋白、通过强有力浓缩染色质抑制转录活动的蛋白、以及能够在艾滋病病毒启动子附近结合的蛋白的组的蛋白与识别短ＲＮＡ链（ＴＡＲ）的蛋白（例如Ｔａｔ或Ｔａｔ衍生物）构成的融合蛋白，以及利用他们抑制转录的方法。所说的融合蛋白利用识别短ＲＮＡ链的蛋白作为载体，通过释放阻遏蛋白如Ｓｐｌ、ＮＦ－ｋＢ到ＨＩＶ－１ＬＴＲ表现出显著的抑制ＨＩＶ－１基因组（ＲＮＡ）产生的效果。本发明专利技术通过靶向转录－抑制融合蛋白到ＨＩＶ　　ＬＴＲ而表现出对ＨＩＶ的转录抑制效果。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)病毒基因组(RNA)自前病毒或长末端重复序列(LTR)启动子产生的阻遏物。更具体的，本专利技术涉及抑制艾滋病病毒基因组(RNA)转录的融合蛋白，包含选自下列组的多肽序列强有力抑制蛋白活性的蛋白例如Sp1或NF-kB；通过强有力浓缩染色质抑制转录的蛋白；能够结合艾滋病病毒启动子的蛋白例如锌指蛋白；以及识别短RNA链(HIV短转录本)的多肽序列(如Tat蛋白或Tat衍生物)。当强有力抑制蛋白活性的蛋白例如Sp1或NF-kB以及通过强有力浓缩染色质抑制转录的蛋白作为发射物通过短RNA链识别蛋白(如Tat蛋白和其突变体)被靶向到HIV-1 LTR启动子表达调控区附近的时候，该融合蛋白对抑制人免疫缺陷病毒(HIV)-1 RNA的产生具有显著的效果。
技术介绍
一般而言，HIV入侵公知需要病毒包膜蛋白(GP120)和细胞膜表面受体的结合。在结合之后，病毒与细胞融合并将其病毒物质注入细胞。融合后，病毒基因组(RNA)通过反转录酶转变为DNA。另外，通过整合酶，DNA类型的病毒基因组随之整合到宿主细胞的DNA中，在那里它作为“前病毒”存在于细胞的一生中。前病毒HIV基因组利用宿主细胞的表达系统产生基因组RNA(转录步骤)，并利用病毒基因组大量产生在胞质中增殖(翻译以及蛋白剪切、蛋白酶功能)所必需的成分(蛋白、衣壳)。在装配步骤后，HIV基因组随之从宿主细胞释放并增殖。如果超过临界点，平均每天有100亿新的HIV增殖。因此，感染后爱滋病是无法治愈的。已研发了许多抑制上述步骤的抗体(疫苗)或化合物抗爱滋病药物。广泛应用的抗爱滋病药物是反转录步骤和蛋白酶的抑制剂。尽管研发了抑制识别宿主细胞步骤的疫苗，但由于病毒包膜蛋白的迅速变异，他们很难抑制HIV。另外，HIV反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂通常也有作用。HIV抑制物、以及多种反转录酶抑制剂或蛋白酶抑制剂已被研发并在许多制药公司销售。他们具有抑制早期HIV生长的效果，但是其存在一些问题例如毒性和快速的抗性。此外，关于HIV注入宿主细胞或治疗制剂对该步骤的作用机制的研究还不完善。归因于对基因治疗爱滋病的兴趣，反义基因治疗和核酶基因治疗自1997年建立起来。从1997年起就进行了第一阶段的临床实验，但是这种治疗就获得病毒抗性而言具有根深蒂固的问题。关于病毒RNA生长的表达调控机制的许多研究证明在特定宿主细胞中的转录调控蛋白对于RNA的表达很重要。最近，研究表明与TAK(Tat相关激酶或PTEF)作用的Tat对RNA合成酶的活性具有重大影响。因此，最近的研究焦点集中于抑制Tat或TAK作用的RNA生产抑制剂(例如Tat类似物蛋白片段，TAR类似物RNA片段，TAK抑制剂)。上文提及的治疗制剂通过减缓疾病的进程能在一定程度上延长生命，但是由于迅速抗性的病毒的产生而失效。那些治疗制剂具有的基本问题是表达的可能性，存在于宿主细胞中的病毒DNA基因组(前病毒)有可能表达成为病毒RNA，因为不管是否有上述的制剂、疫苗和基因治疗，前病毒基因组都能够存在。因此，克服现存制剂的问题的最好的方式是抑制前病毒LTR表达为基因组RNA的转录步骤。本专利技术提供了融合蛋白用于抑制HIV转录、调控爱滋病病毒RNA的表达。换言之，本专利技术的融合蛋白阻止宿主细胞中的病毒DNA基因组表达为病毒RNA基因组，并随之阻断病毒增殖所必需的成分的产生(RNA基因组、蛋白、衣壳)，从而基本上抑制病毒的增殖和抗性病毒的产生。因此，本专利技术克服了常规制剂的问题并提供了一种创新的爱滋病治疗制剂。
技术实现思路
根据本专利技术，本专利技术的一个目的是提供一种新的生物治疗制剂，基本上抑制爱滋病增生所必需的病毒基因组(RNA)并克服病毒抗性，以及一种抑制HIV转录以治疗爱滋病的方法。为了实现上文提及的目的，本专利技术提供了一种抑制HIV转录的融合蛋白，包括一种选自由a)强有力的抑制转录因子例如Sp1或NF-KB的活性；b)通过浓缩染色质抑制转录活动；和c)能结合启动子区(例如，锌指蛋白)组成的组的多肽或化合物；以及一种识别表达调控区附近的RNA链或者病毒启动子顺式作用区的多肽或化合物。在本专利技术的融合蛋白中，化合物是通过酶学或化学方法连接于蛋白的识别特定核酸序列的化合物。化合物可以是小分子、核酸类似物或寡聚多糖。在本专利技术的融合蛋白中，强有力抑制转录因子例如Sp1或NF-KB的活性、或者通过浓缩染色质抑制转录活动、或者能够结合转录调控启动子的多肽或化合物优选是选自由a)POZ-结构域蛋白；b)HDAC或其激活转录抑制的区域；c)MeCP2或类似物MBP-型蛋白；d)选自由polycom家族蛋白、mSin3A、SMRT和N-CoR组成的组的辅阻遏蛋白；e)Sp1，Sp2，Sp3，Sp4或NF-KB的DNA结合区域多肽；以及f)能在HIV启动子附近结合的蛋白(例如，锌指蛋白)组成的组的多肽或化合物。识别表达调控区附近的短转录本或者病毒启动子顺式作用区的多肽或化合物优选是SEQ ID NO1或2中所示的Tat蛋白、它衍生的多肽片段或其突变体。更优选本专利技术的融合蛋白是选自由SEQ ID NO3～10中所示的蛋白组成的组的一个或多个融合蛋白。本专利技术还提供了分别编码SEQ ID NO3～10中所示的多肽的碱基序列SEQ ID NO11-18。本专利技术的一种融合蛋白，SEQ ID NO1-2中所示的多肽分别是包括73和72个氨基酸的Tat蛋白突变体，SEQ ID NO3是MeCP2-TatdMT(73aa)融合蛋白的氨基酸序列，SEQ ID NO4是HDAC 1-TatdMt(73aa)融合蛋白的氨基酸序列，SEQ ID NO5是POZ-TatdMt(73aa)融合蛋白的氨基酸序列，SEQ ID NO6是FBI-1-TatdMt(73aa)融合蛋白的氨基酸序列，SEQ ID NO7是TatdMt(72aa)-MeCP2融合蛋白的氨基酸序列，SEQ ID NO8是TatdMt(72aa)-HDAC1融合蛋白的氨基酸序列，SEQ ID NO9是TatdMt(72aa)-POZ融合蛋白的氨基酸序列，而SEQ ID NO10是TatdMt(72aa)-FBI-1融合蛋白的氨基酸序列。本专利技术还提供了SEQ ID NO11中所示的编码融合蛋白MeCP2-TatdMt(73aa)的碱基序列，SEQ ID NO12是编码HDAC1-TatdMt(73aa)的碱基序列，SEQ ID NO13是编码POZ TatdMt(73aa)的碱基序列，SEQ ID NO14是编码FBI-1-TatdMt(73aa)的碱基序列，SEQ ID NO15是编码TatdMt(72aa)-MeCP2的碱基序列，SEQ ID NO16是编码TatdMt(72aa)-HDAc1的碱基序列，SEQ ID NO17是编码TatdMt(72aa)-POZ的碱基序列，而SEQ IDNO18是编码TatdMt(72aa)-FBI-1的碱基序列。本专利技术提供了抑制HIV增殖的、包括部分或全部这些融合蛋白的组合物。本专利技术提供了选自由pcDNA3.0-TatWt、pcDNA3.0-TatMt、pcDNA3.0-FBI-1、pcDNA3.0-MeCP2-TatWt、pcDNA3.0HD本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制ＨＩＶ转录的融合蛋白，包含：一种选自由强有力地抑制转录因子Ｓｐｌ或ＮＦ－ＫＢ活性的多肽，通过浓缩染色质抑制转录活性的多肽，以及具有启动子结合活性的多肽所组成的组的转录抑制多肽或其化合物；一种识别表达调控区附近的ＲＮＡ 链或病毒ＬＴＲ启动子顺式作用元件的多肽或其化合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：许晚旭，郑得林，
申请(专利权)人：延世大学校，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]