一种酸碱法提取熊果酸的方法，其特征在于该方法包括下列步骤： （１）水煮：将粉碎的枇杷叶用１∶８－１０倍Ｖ／Ｖ水煮沸，除去水溶性杂质； （２）醇提：水煮后残渣经烘干后，用８５－９５％乙醇１∶１０－１５倍Ｖ／Ｖ回流提取１－２小时； （３）脱色：醇提液加０．１－１．０％活性炭，搅拌吸附３０－６０分钟，以脱色； （４）调碱：脱色醇提液用苛性钠或苛性钾调ｐＨ至１０～１４，静置后使杂质沉淀，除去； （５）酸析：碱性醇提液用ＨＣＬ或Ｈ↓［２］ＳＯ↓［４］调ｐＨ１～３，减压浓缩后使熊果酸从酸醇中析出，而其它植物色素、黄酮和甾体类杂质仍留存于酸醇液中； （６）水洗：将酸析出物分别用酸性、碱性和中性水洗涤，得水不溶物； （７）析晶：根据水不溶物中的熊果酸含量，按６－１０ｍｇ／ｍｌ浓度，将水不溶物加热溶于８５～１００％乙醇中，冷却后即可析出熊果酸晶体。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然药物
具体涉及一种酸碱法制备熊果酸的方法。
技术介绍
熊果酸(Ursolic acid)又名乌索酸，系五环三萜类化合物。分子式C30H48O3，分子量456，广泛存在于山茱萸、山楂、车前草、夏枯草、女贞子、冬凌草、白花蛇舌草等植物中。 式I 式II熊果酸(式I)及其同分异构体——齐墩果酸(Oleanolic acid，式II)熊果酸具多种生理活性，除有抗炎、抗癌、抗病毒及抗皱等活性外(孙文基、张全房天然活性成分简明手册P579-580，中国医药科技出版社，1998)，近年又发现熊果酸具有抗肥胖(WO2003 011267)、抗动脉粥样硬化(J.Ethnopharmacology 84(2-3)2003)、诱导癌细胞凋亡(Anticancer Res 21(5)2001)、逆转肿瘤细胞为正常细胞(J.Cancer Res Clin.Oncol 1994)等功能。目前熊果酸都从植物中提取、分离而得。常用材料为香茶菜(陈德昌中药化学对照品，中国医药科技出版社，2000)、车前草(孙文基天然药物成分提取分离与制备，中国医药科技出版社，1999)、夏枯草(中国中药杂志18(11)，1993)、长春花(CN1365978A)、女贞叶(CN1358733A)和女贞子(药物分析杂志13(5)，1993)等。在这些植物中，有的如车前草、夏枯草等含熊果酸不多，含量不及生药的0.5％；有的如香茶菜、女贞子则在含熊果酸的同时另含大量其它萜类化合物，同类杂质多，给提取、纯化带来困难。已知香茶菜中含有的萜类化合物，仅二萜类就多达五百余种(孙汉董、许云龙、姜北香茶菜属植物二萜化合物，科学出版社，2001)。本专利技术人经研究比较分析了十种资源植物中的熊果酸及其同分异构体——齐墩果酸的含量，发现枇杷叶中的熊果酸在所测植物中含量最高，约是女贞叶的1.9倍，金钱草的2.5倍，白花蛇舌草的2.9倍，夏枯草的3.5倍，车前草的3.7倍，山茱萸的4.3倍。另外，枇杷叶中的齐墩果酸类杂质，亦远比女贞子等为低，枇杷叶所含的齐墩果酸量不到其熊果酸量的1/4，而女贞子中所含的齐墩果酸量比熊果酸多2.9倍(见表1)。表1十种资源植物中的熊果酸(UA)和齐墩果酸(OA)含量比较*资源植物 UA量(％) UA相对含量 OA量(％) UA∶OA枇杷叶0.803100.00.163100∶20.3山楂肉0.80099.7 0.124100∶15.5女贞子0.62077.3 1.795100∶289.5连翘果0.60174.8 0.506100∶84.2女贞叶0.42853.3 0.104100∶24.3金钱草0.31739.5 0.057100∶18.0白花蛇舌草0.27834.7 0.061100∶21.9夏枯草0.22828.5 0.050100∶21.9车前草0.21627.0 0.066100∶30.6山茱萸0.18823.4 0.048100∶25.5*样品处理各取干燥粉碎的资源植物2g于30ml石油醚中，脱脂30分钟，然后分别加乙醚30ml，超声提取10分钟，各取乙醚提取液2ml，水浴蒸干，各用甲醇溶解并分别定容至5ml，供HPLC测定。测定条件固定相为Beckman Ultrasphere C18反相柱(4.6×250mm，加4.6×50mm保护柱)；流动相为甲醇∶磷酸缓冲液(89∶11)，流量1ml/min，进样量20μl，检测波长215nm。由此可见，枇杷叶确是制备熊果酸的好资源。熊果酸的分离目前常用柱层析法，见林克勤等，中草药26(8)1995；樊明文等CN1358733A，2002；Kim SH et alPhytotherapyresearch VoL12.553-556，1998，尽管柱层析法能很好地分离熊果酸和近似杂质，但该法上样量小，收得率低，同时洗脱剂需用石油醚、苯、氯仿、甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂，成本大，亦不利于生产安全。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服上述方法的不足之处，研究设计一种成本低、安全性好的简易制备熊果酸的方法。本专利技术提供了一种酸碱法制备熊果酸的方法，该方法包括下列步骤一、水煮将枇杷叶加水(1∶8～10v/v)煮沸，弃水煮液，以除去枇杷叶中所含有机酸、糖类、鞣质等水溶性杂质；二、醇提用回流提取法使枇杷叶中的熊果酸溶于85～95％1∶10～15倍v/v乙醇中，回流提取1～2小时；三、脱色用0.1-1.0％活性炭搅拌吸附，30～60分钟以除去叶绿素、叶黄素等杂质；四、调碱将枇杷叶的醇提液用苛性钾或苛性钠调pH至10～14，静置过夜后过滤，除去杂质；五、酸析将碱性醇提液用HCl调pH至1～3，减压浓缩，熊果酸即可从酸醇溶液中析出，而黄酮、甾醇类杂质仍留酸醇中；六、水洗将酸醇析出物分别用酸性、碱性和中性蒸溜水洗涤，用量1∶100-200v/v，可进一步去除生物碱、盐和水溶性色素等杂质；七、析晶将上述水洗后的水不溶物，于85-100％乙醇中加热溶解，使呈过饱和状态，按水不溶物中的实测熊果酸量计，使浓度达6-10mg/ml，冷却后即有熊果酸结晶析出。上述水煮、醇提、脱色、调碱、酸析、水洗、析晶各步骤可重复2-3次，以充分提取和去杂，其顺序也可适当颠倒或删减。按本法从枇杷叶中制备的熊果酸，经紫外光谱、红外光谱、质谱、核磁共振谱、薄层和高效液相色谱及差示扫描量热法测定，均与熊果酸标准品相一致。用本工艺制备熊果酸收得率可达0.8-1.2％，通过反复结晶，熊果酸纯度可大于90％。本工艺除适用枇杷叶制备熊果酸外，亦适用于从女贞叶、金钱草、女贞子、山楂、连翘、小蔓长春花、山茱萸、白花蛇舌草、夏枯草、车前草植物中制备熊果酸。用酸碱法制备熊果酸，主要是利用熊果酸不溶于水，易溶于热乙醇，在酸性条件下易析出，在过饱和醇液中易结晶的特性设计的。本专利技术提出用酸碱法制备熊果酸，除应用水和乙醇外，毋需其它有机溶剂，设备投资小，简便易行，得率高，产品纯。附图说明图1、熊果酸标准品的HPLC图谱图2、枇杷叶熊果酸的HPLC图谱图3、枇杷叶熊果酸和熊果酸标准品的HPLC分析，显示枇杷叶熊果酸和熊果酸标准品的HPLC吸收峰相重叠。图4、枇杷叶熊果酸的热分析图谱图5、熊果酸标准品的热分析图谱从图4、5显示两者的外推始点均为286℃，顶峰温度均为289℃。具体实施例方式实施例1取市售枇杷叶(青)10kg，粉碎后，加水100kg，浸润30分钟后煮沸1小时，过滤，弃煮水液，滤渣再加60kg水，煮沸1小时，取滤渣、烘干、粉碎；取水煮后枇杷叶渣(干)1份，加85-95％乙醇10份(g/v)，于中药提取器中回流浸取2小时，过滤后收集醇提液(1)，残渣再用90-95％乙醇(1∶8，g/v)回流提取2小时，得醇提液(2)；合并(1)(2)醇提液； 在醇提液中加入0.3％活性炭(g/v)，搅拌吸附60分钟，过滤、除残渣，得枇杷叶脱色醇提液；将上述脱色醇提液用1mol/L NaOH调pH至11，静置过夜，离心或抽滤，除沉淀杂质，得碱性醇提物；碱性醇提物用6mol/L HCl调pH至3，经减压浓缩，抽滤得枇杷叶酸醇析出物。在枇杷叶酸醇析出物中，加100倍(v/v)pH3酸性蒸馏水，搅拌溶洗15分钟，倾去水层后继用100倍(v/v本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨庆尧，冯慧琴，糜可，杨晓彤，于晓明，周韵丽，
申请(专利权)人：杨庆尧，周文轩，
类型：发明
国别省市：
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