一种烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法技术

本发明专利技术公开一种烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法，所述烟蒂包括滤嘴和残留烟丝，所述杀菌剂为多菌灵、霜霉威、稻瘟灵、三唑醇和三唑酮中的一种或多种，包括以下步骤：选取样品烟支,收集抽吸卷烟后的滤嘴；将烟蒂中的滤嘴和烟丝进行拆分,分别提取；经过涡漩振荡冷冻后的第一旋盖离心管和第二旋盖离心管中分别依次加入无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，第三次涡旋振荡后离心，离心完成后冷冻保存；再经过N‑丙基乙二胺纯化：最后使用LC‑MS/MS分析测定。本发明专利技术既保留了较好的提取效果，又不会将滤嘴中聚丙烯纤维或醋酸纤维溶解，从而降低了从提取溶剂中提取所述杀菌剂的难度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农药残留检测领域，涉及烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法。
技术介绍
叶斑病和黑茎病是烟草中最为常见的细菌性病害，对烟草的产量和治疗影响很大。霜霉威、多菌灵、稻瘟灵、三唑醇和三唑酮都是烤烟生产中常用杀菌剂，能防治烟草叶斑病和黑胫病，具有高效、低毒等特点。除多菌灵外，其它四个指标均被列入《中国烟叶公司2015年度烟草上推荐使用农药名单》，在各烟区均有施用，由于其施用广泛，这几种杀菌剂为烟叶高残留指标，经常在烤后烟叶中检出。烟叶中杀菌剂的残留会对吸烟者产生健康风险，其中多菌灵还被列入国际烟草科学研究合作中心(CORESTA)2013年的烟草农药指导性残留限量名单，指导限量为2.00mg/kg。烟草中杀菌剂残留量的分析方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-串联质谱法(GC–MS/MS)和液相色谱–串联质谱法(LC–MS/MS)，而烟气及滤嘴中杀菌剂的检测方法相对报道较少。由于卷烟烟气直接进入吸烟者体内，转移到烟气中的杀菌剂会对吸烟者产生较大的健康风险，因此，准确定量分析烟蒂中五种常用杀菌剂并研究烟蒂截留率具有较为重要的意义。研究截留率主要手段是测定烟蒂对五种杀菌剂的截留量，通过计算即可得到截留率。前期有研究者较为关注有机磷、菊酯和氨基甲酸酯类农药的烟气及滤嘴中转移行为，而这些农药大部分为禁用或烟草中不推荐施用农药，在烟草中检出率较低。另外有研究者关注烟用抑芽剂马来酰肼的烟气、烟灰和滤嘴转移行为，此研究通过成品卷烟加标的方式研究其转移行为，而部分农药为内吸型农药，这可能与实际吸烟过程中农药的转移过程存在较大的差异。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术目的在于提供一种准确定量检测五种常用杀菌剂的方法，特别是测定烟蒂中五种常用杀菌剂的方法，这五种常用杀菌剂分别为多菌灵、霜霉威、稻瘟灵、三唑醇和三唑酮。专利技术人通过长期的探索和尝试，以及多次的实验和努力，不断的改革创新，为解决以上技术问题，本专利技术提供的技术方案是，提供一种烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法，所述烟蒂包括滤嘴和残留烟丝，所述杀菌剂为多菌灵、霜霉威、稻瘟灵、三唑醇和三唑酮中的一种或多种，包括以下步骤：步骤a)根据ISO8243:2006来选取样品烟支,按照ISO3402:1999来平衡烟支；采用ISO标准抽吸模式(ISO3308:2000)来抽吸5支卷烟，收集抽吸卷烟后的滤嘴；步骤b)将烟蒂中的滤嘴和烟丝进行拆分,分别提取；将卷烟烟丝合并放入第一旋盖离心管中，加入超纯水，静置充分浸润，向第一离心管中加入乙腈和内标，第一涡旋震荡，完成后冷冻保存；将滤嘴分为多瓣，合并放入第二旋盖离心管中，向离心管中加入甲醇，振荡到样品被甲醇充分浸润，静置，向第二离心管中加入内标，第二涡漩振荡，完成后冷冻保存；步骤c)经过涡漩振荡冷冻后的第一旋盖离心管和第二旋盖离心管中分别依次加入无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，第三次涡旋振荡后离心，离心完成后冷冻保存；步骤d)N-丙基乙二胺(PSA)纯化：在第一旋盖离心管中移取其上清液于第三旋盖离心管中，在第二旋盖离心管中移取其上清液于第四旋盖离心管中，分别向第三旋盖离心管和第四旋盖离心管中加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，第四次漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用超纯水稀释定容后待测；步骤e)配制标准溶液分别准确称取杀菌剂标准品,精确至0.0001g，用乙腈溶解定容，制得单一标准储备液；用乙腈准确配制混合标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；稀释混合标准储备液得到混合标准工作液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；准确配置TPP内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存；取一定量的内标标准储备液，用乙腈稀释定容，制得内标工作液；所有的冷冻的储备液使用前将其恢复到室温；步骤f)LC-MS/MS分析测定色谱条件：AtiantisUPLCHSST3(100mm×2.1mm，1.8μm)；流动相A：体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.1％的甲酸甲醇溶液；流速0.4mL/min；柱温35°C；进样量2μL；梯度洗脱条件：0～2min，90％A～50％A；2～2.4min，50％A～30％A；2.4～4.0min，30％A～20％A；4.0～6.0min，20％A～5％A；6.0～9.8min，5％A～5％A；9.8～10.0min，5％A～90％A；10.0～12.0min，90％A～90％A；质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，喷雾电压(IS)：2.6kV；离子化温度350℃；雾化气流量：1000L/Hr；锥孔气(cone)流量50L/Hr；碰撞气流量为0.15ml/min；碰撞气为氩气，其余气体为氮气；驻留时间为30msec，正离子MRM模式采集。根据本专利技术烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法的一个具体实施方式，所述冷冻温度为-20℃。根据本专利技术烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法的一个具体实施方式，所述单一标准储备液的浓度为1.0mg/mL；所述混合标准储备液中，霜霉威：0.20mg/mL、多菌灵和稻瘟灵：0.04mg/mL、三唑醇和三唑酮：0.10mg/mL；所述混合标准工作液中，霜霉威：0.020mg/mL；多菌灵和稻瘟灵：0.004mg/mL；三唑醇和三唑酮：0.010mg/mL。根据本专利技术烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法的一个具体实施方式，所述内标标准储备液为0.99mg/mLTPP。根据本专利技术烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法的一个具体实施方式，所述第一旋盖离心管的容积为50mL；所述第二旋盖离心管的容积为50mL；所述第三旋盖离心管的容积为1.8mL，所述第四旋盖离心管的容积为1.8mL。根据本专利技术烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法的一个具体实施方式，所述第一旋盖离心管中加入超纯水的体积为10mL，静置浸润的时间为10min；加入乙腈和内标的体积分别为10mL和100μL；所述第二离心管中加入甲醇和内标的体积分别为20mL和200μL；所述内标浓度为10μg/mL。根据本专利技术烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法的一个具体实施方式，所述第一涡旋震荡速率为2000r/m，时间为2min；所述第二涡旋震荡速率为2000r/m，时间为5min；所述第三涡旋震荡速率为2000r/m，时间为2min；所述第四涡旋震荡速率为2000r/m，时间为2min。根据本专利技术烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法的一个具体实施方式，步骤(c)中，依次加入的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法，所述烟蒂包括滤嘴和残留烟丝，所述杀菌剂为多菌灵、霜霉威、稻瘟灵、三唑醇和三唑酮中的一种或多种，其特征在于，包括以下步骤：步骤a)根据ISO 8243:2006来选取样品烟支,按照ISO 3402:1999来平衡烟支；采用ISO标准抽吸模式(ISO 3308:2000)来抽吸5支卷烟，收集抽吸卷烟后的烟蒂；步骤b)将烟蒂中的滤嘴和烟丝进行拆分,分别提取；将卷烟烟丝合并放入第一旋盖离心管中，加入超纯水，静置充分浸润，向第一离心管中加入乙腈和内标，第一涡旋震荡，完成后冷冻保存；将滤嘴分为多瓣，合并放入第二旋盖离心管中，向离心管中加入甲醇，振荡到样品被甲醇充分浸润，静置，向第二离心管中加入内标，第二涡漩振荡，完成后冷冻保存；步骤c)经过涡漩振荡冷冻后的第一旋盖离心管和第二旋盖离心管中分别依次加入无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，第三次涡旋振荡后离心，离心完成后冷冻保存；步骤d)N‑丙基乙二胺(PSA)纯化：在第一旋盖离心管中移取其上清液于第三旋盖离心管中，在第二旋盖离心管中移取其上清液于第四旋盖离心管中，分别向第三旋盖离心管和第四旋盖离心管中加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，第四次漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用超纯水稀释定容后待测；步骤e)配制标准溶液分别准确称取杀菌剂标准品,精确至0.0001g，用乙腈溶解定容，制得单一标准储备液；用乙腈准确配制混合标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；稀释混合标准储备液得到混合标准工作液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；准确配置TPP内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存；取一定量的内标标准储备液，用乙腈稀释定容，制得内标工作液；所有的冷冻的储备液使用前将其恢复到室温；步骤f)LC‑MS/MS分析测定色谱条件：Atiantis UPLC HSS T3(100mm×2.1mm，1.8μm)；流动相A：体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.1％的甲酸甲醇溶液；流速0.4mL/min；柱温35℃；进样量2μL；梯度洗脱条件：0～2min，90％A～50％A；2～2.4min，50％A～30％A；2.4～4.0min，30％A～20％A；4.0～6.0min，20％A～5％A；6.0～9.8min，5％A～5％A；9.8～10.0min，5％A～90％A；10.0～12.0min，90％A～90％A；质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，喷雾电压(IS)：2.6kV；离子化温度350℃；雾化气流量：1000L/Hr；锥孔气(cone)流量50L/Hr；碰撞气流量为0.15ml/min；碰撞气为氩气，其余气体为氮气；驻留时间为30msec，正离子MRM模式采集。...

【技术特征摘要】
1.一种烟蒂中杀菌剂截留量的检测方法，所述烟蒂包括滤嘴和残留烟丝，所述杀菌剂
为多菌灵、霜霉威、稻瘟灵、三唑醇和三唑酮中的一种或多种，其特征在于，包括以下步骤：
步骤a)根据ISO8243:2006来选取样品烟支,按照ISO3402:1999来平衡烟支；采用ISO
标准抽吸模式(ISO3308:2000)来抽吸5支卷烟，收集抽吸卷烟后的烟蒂；
步骤b)将烟蒂中的滤嘴和烟丝进行拆分,分别提取；
将卷烟烟丝合并放入第一旋盖离心管中，加入超纯水，静置充分浸润，向第一离心管中
加入乙腈和内标，第一涡旋震荡，完成后冷冻保存；
将滤嘴分为多瓣，合并放入第二旋盖离心管中，向离心管中加入甲醇，振荡到样品被甲
醇充分浸润，静置，向第二离心管中加入内标，第二涡漩振荡，完成后冷冻保存；
步骤c)经过涡漩振荡冷冻后的第一旋盖离心管和第二旋盖离心管中分别依次加入无
水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，第三次涡旋振荡后离心，离心完成后冷冻保
存；
步骤d)N-丙基乙二胺(PSA)纯化：
在第一旋盖离心管中移取其上清液于第三旋盖离心管中，在第二旋盖离心管中移取其
上清液于第四旋盖离心管中，分别向第三旋盖离心管和第四旋盖离心管中加入无水硫酸镁
及PSA吸附剂，第四次漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤
液，并用超纯水稀释定容后待测；
步骤e)配制标准溶液
分别准确称取杀菌剂标准品,精确至0.0001g，用乙腈溶解定容，制得单一标准储备液；
用乙腈准确配制混合标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；
稀释混合标准储备液得到混合标准工作液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；
准确配置TPP内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存；取一定量的内标标准
储备液，用乙腈稀释定容，制得内标工作液；
所有的冷冻的储备液使用前将其恢复到室温；
步骤f)LC-MS/MS分析测定
色谱条件：AtiantisUPLCHSST3(100mm×2.1mm，1.8μm)；流动相A：体积分数为0.1％
的甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.1％的甲酸甲醇溶液；流速0.4mL/min；柱温35℃；进
样量2μL；
梯度洗脱条件：0～2min，90％A～50％A；2～2.4min，50％A～30％A；2.4～4.0min，30％
A～20％A；4.0～6.0min，20％A～5％A；6.0～9.8min，5％A～5％A；9.8～10.0min，5％A～
90％A；10.0～12.0min，90％A～90％...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶晓秋，熊巍，黄玫，韶济民，张海燕，庞夙，杨雪，
申请(专利权)人：中国烟草总公司四川省公司，
类型：发明
国别省市：四川;51