一种用于检测胃泌素17的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测胃泌素17的试剂盒。本发明专利技术提供了一种用于检测人胃泌素17的试剂盒，包括组件1和组件2；所述组件1为包被有G‑17‑BSA的微孔板；所述G‑17‑BSA为多肽，自N末端至C末端依次含有如下两个区段：G‑17多肽和牛血清白蛋白成熟肽；所述G‑17多肽为：在序列表的序列1所示多肽的N末端第一个氨基酸残基末端连接一个焦谷氨酸得到的多肽；所述组件2为酶结合物溶液；所述酶结合物溶液中含有HRP标记的小鼠抗G‑17单克隆抗体。本发明专利技术提供的试剂盒可用于检测人血液样本中的胃泌素17的含量，从而可用于评估或预测胃粘膜状态或状况，诊断萎缩性胃炎，胃癌高危人群的筛查，从而可用于评价消化道系统生理病理状态。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于检测胃泌素17(G-17)的试剂盒，具体涉及一种基于化学发光法检测胃泌素17的试剂盒。
技术介绍
胃泌素是一种重要胃肠激素，最早是EdkinsJS等人发现并且命名。随后，DockrayGJ等人研究发现胃泌素基因定位于17号染色体的长臂，全长为4.1kb，能够编码101个氨基酸残基组成的多肽-胃泌素原。胃泌素原经过一系列的加工和修饰从而形成了具有生物活性的成熟多肽。胃泌素的合成经历了胃泌素原、甘氨酸延伸型胃泌素和成熟胃泌素三个阶段，前两种胃泌素作为胃泌素合成及加工的中间产物，是未酰胺化的胃泌素，而成熟的胃泌素是酰胺化的胃泌素，羧基端的酰胺化是胃泌素家族成员发挥其生物活性所必需的。胃泌素有多种亚型，包括胃泌素34、胃泌素71、胃泌素52、胃泌素14、胃泌素17等，在人体中含量最多(约90％)且作用最为重要的是胃泌素17。胃泌素由存在于胃幽门部粘膜的G细胞(gastrincontainingcell)分泌，进入血中再作用于胃，促进胃液分泌。G细胞主要分布在胃窦部，十二指肠和空肠上段粘膜内也有少量G细胞。胃的幽门窦受到食物等的机械性刺激，幽门部的pH偏碱性时就进行胃泌素的分泌。其结果，胃液特别是盐酸的分泌变得旺盛，而当胃内部的pH降低时盐酸和胃泌素的分泌就停止。此外，胃泌素也具有促进胃蛋白酶分泌、胰液分泌、胆液分泌、胰岛素分泌等的作用。胃窦粘膜内的胃泌素主要是G-17，十二指肠粘膜中有G-17和G-34约各占一半。从生物效应来看，G-17刺激胃分泌的作用要比G-34强5-6倍，G-34在体内被清除的速度很慢(半衰期约为50min)，G-17的半衰期通常只有6min。G-17为由17个氨基酸残基组成的多肽，有两种(胃泌素Ⅰ和Ⅱ)：一种酪氨酸残基进行了硫酸基取代，一种未进行所述取代，两者在生理活性上并没有差异。对各种哺乳动物的G-17的一级结构的研究表明，均为17个氨基酸组成，仅在自氨末端的第5位和第10位的氨基酸残基因动物而异。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测胃泌素17的试剂盒。本专利技术提供了一种用于检测人胃泌素17的试剂盒(试剂盒甲)，包括组件1和组件2；所述组件1为包被有G-17-BSA的微孔板；所述G-17-BSA为多肽，自N末端至C末端依次含有如下两个区段：G-17多肽和牛血清白蛋白成熟肽；所述G-17多肽为：在序列表的序列1所示多肽的N末端第一个氨基酸残基末端连接一个焦谷氨酸得到的多肽；所述组件2为酶结合物溶液；所述酶结合物溶液中含有HRP标记的小鼠抗G-17单克隆抗体。所述G-17-BSA具体可为将G-17多肽的C末端与牛血清白蛋白成熟肽的N末端连接形成的多肽。牛血清白蛋白成熟肽具体可如序列表的序列2所示。所述酶结合物溶液中还含有酪蛋白、Proclin-300和BSA。所述酶结合物溶液由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH7.4、0.02M的PBS缓冲液；所述溶质及其在酶结合物溶液中的浓度如下：HRP标记的小鼠抗G-17单克隆抗体的体积百分含量为0.02％、酪蛋白0.1g/100ml、Proclin-300的体积百分含量为0.02％、BSA2g/100ml。所述包被有G-17-BSA的微孔板的制备方法如下：(1)用pH9.6、0.05mol/L的CB缓冲液稀释G-17-BSA，得到蛋白浓度为2μg/ml的包被液；(2)取微孔板，每孔加入100μl步骤(1)制备的包被液，2-8℃静置18-24h，然后弃除孔内液体；(3)完成步骤(2)后，取所述微孔板，每孔加入200μl封闭液，2-8℃静置18-24h，然后弃除孔内液体；封闭液由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH7.4、0.02M的PBS缓冲液；所述溶质及其在封闭液中的浓度如下：蔗糖8g/100ml、BSA0.5g/100ml、酪蛋白0.5g/100ml；(4)完成步骤(3)后，取所述微孔板，在20-30℃、湿度<40％的环境中干燥18-24h。所述试剂盒中还包括组件3和\\或组件4和\\或组件5。所述组件3为20×浓缩洗液；20×浓缩洗液由溶质和溶剂组成；溶剂为pH7.4、0.2mol/L的PBS缓冲液；所述溶质及其在20×浓缩洗液中的浓度如下：Tween20的体积百分含量为1％。所述组件4为发光液A和发光液B；发光液A由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液；所述溶质及其在发光液A中的浓度如下：鲁米诺3mg/ml、对碘苯酚0.25mg/ml、四苯硼钠0.5mg/ml；发光液B由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液；所述溶质及其在发光液B中的浓度如下：过氧化脲0.5mg/ml。所述组件5为G-17标准品溶液；G-17标准品溶液由S0溶液、S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液组成；S0溶液为含1g/100mlBSA和体积百分含量为0.02％的Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液；S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液均为含G-17、1g/100mlBSA和体积百分含量为0.02％的Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液；S1溶液中，G-17的浓度为20pg/ml；S2溶液中，G-17的浓度为100pg/ml；S3溶液中，G-17的浓度为200pg/ml；S4溶液中，G-17的浓度为500pg/ml；S5溶液中，G-17的浓度为1000pg/ml。所述试剂盒还包括记载有如下操作方法的载体：(1)制作标准方程①取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μlG-17标准品溶液和100μl酶结合物溶液，振荡混匀，然后37℃静置60分钟；②完成步骤①后，用洗涤液洗涤5遍，扣干；所述洗涤液为用蒸馏水或去离子水将20×浓缩洗液稀释至20倍体积得到的溶液；③完成步骤②后，每孔加入50μl发光液A和50μl发光液B，振荡混匀，然后在化学发光免疫分析仪上检测发光值；使用log-logit线性拟合方式进行数据处理，制作标准方程：ln[百分结合率/(1-百分结合率)]＝Blog10浓度+A；A、B为直线参数；S1溶液至S5溶液中任一溶液对应的发光值除以S0溶液对应的发光值，为百分结合率；(2)检测待测溶液待测溶液为待测液体样本、待测液体样本的稀释液或待测固体样本的溶解液；①取包被有G-17-BSA的微孔板，每孔加入50μl待测溶液和100μl酶结合物溶液，振荡混匀，然后37℃静置60分钟；②完成步骤①后，用洗涤液洗涤5遍，扣干；③完成步骤②后，后，每孔加入50μl发光液A和50μl发光液B，振荡混匀，然后在化学发光免疫分析仪上检测发光值；根据步骤(1)得到的标准方程，计算待测溶液中的人胃泌素17浓度。本专利技术还保护一种用于检测人胃泌素17的试剂盒(试剂盒乙)，包括所述G-17-BSA和所述小鼠抗G-17单克隆抗体。本专利技术还保护一种辅助诊断待测者是否患有发生胃体萎缩的慢性胃炎或发生胃窦萎缩的慢性胃炎的试剂盒(试剂盒丙)，包括以上任一所述的试剂盒甲或试剂盒乙。所述试剂盒丙还包括记载有如下判断标准的载体：如果血清中胃泌素17的浓度高于120pg/ml本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测人胃泌素17的试剂盒，包括组件1和组件2；所述组件1为包被有G‑17‑BSA的微孔板；所述G‑17‑BSA为多肽，自N末端至C末端依次含有如下两个区段：G‑17多肽和牛血清白蛋白成熟肽；所述G‑17多肽为：在序列表的序列1所示多肽的N末端第一个氨基酸残基末端连接一个焦谷氨酸得到的多肽；所述组件2为酶结合物溶液；所述酶结合物溶液中含有HRP标记的小鼠抗G‑17单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测人胃泌素17的试剂盒，包括组件1和组件2；所述组件1为包被有G-17-BSA的微孔板；所述G-17-BSA为多肽，自N末端至C末端依次含有如下两个区段：G-17多肽和牛血清白蛋白成熟肽；所述G-17多肽为：在序列表的序列1所示多肽的N末端第一个氨基酸残基末端连接一个焦谷氨酸得到的多肽；所述组件2为酶结合物溶液；所述酶结合物溶液中含有HRP标记的小鼠抗G-17单克隆抗体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述酶结合物溶液中还含有酪蛋白、Proclin-300和BSA。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述酶结合物溶液由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH7.4、0.02M的PBS缓冲液；所述溶质及其在酶结合物溶液中的浓度如下：HRP标记的小鼠抗G-17单克隆抗体的体积百分含量为0.02％、酪蛋白0.1g/100ml、Proclin-300的体积百分含量为0.02％、BSA2g/100ml。4.如权利要求1至3中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述包被有G-17-BSA的微孔板的制备方法如下：(1)用pH9.6、0.05mol/L的CB缓冲液稀释G-17-BSA，得到蛋白浓度为2μg/ml的包被液；(2)取微孔板，每孔加入100μl步骤(1)制备的包被液，2-8℃静置18-24h，然后弃除孔内液体；(3)完成步骤(2)后，取所述微孔板，每孔加入200μl封闭液，2-8℃静置18-24h，然后弃除孔内液体；封闭液由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH7.4、0.02M的PBS缓冲液；所述溶质及其在封闭液中的浓度如下：蔗糖8g/100ml、BSA0.5g/100ml、酪蛋白0.5g/100ml；(4)完成步骤(3)后，取所述微孔板，在20-30℃、湿度<40％的环境中干燥18-24h。5.如权利要求1至4中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括组件3和\\或组件4和\\或组件5；所述组件3为20×浓缩洗液；20×浓缩洗液由溶质和溶剂组成；溶剂为pH7.4、0.2mol/L的PBS缓冲液；所述溶质及其在20×浓缩洗液中的浓度如下：Tween20的体积百分含量为1％；所述组件4为发光液A和发光液B；发光液A由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液；所述溶质及其在发光液A中的浓度如下：鲁米诺3mg/ml、对碘苯酚0.25mg/ml、四苯硼钠0.5mg/ml；发光液B由溶质和溶剂组成；所述溶剂为pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液；所述溶质及其在发光液B中的浓度如下：过氧化脲0.5mg/ml；所述组件5为G-17标准品溶液；G-17标准品溶液由S0溶液、S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液组成；S0溶液为含1g/100mlBSA和体积百分含量为0.02％的Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液；S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液均为含G-17、1g\...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵京超，李华柏，高将，刘伟雪，兰鑫，周奋，
申请(专利权)人：北京欣经科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11