促黄体生成素半定量排卵检测试纸及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种促黄体生成素半定量排卵检测试纸，包括背板和依次固连在所述背板上的吸水垫、含有抗体工作液的硝酸纤维膜、含有胶体金工作液的胶体金垫和含有缓冲液的样品垫。本发明专利技术的有益效果是：应用单克隆抗体技术和新型金标显色技术，连续使用本试纸，能动态地测定妇女尿促黄体生成素(LH)的变化情况，可帮助医生了解卵泡发育情况、确定有无排卵，可提前12‑24小时预测排卵时间，可用于辅助诊断LH相关的内分泌综合症，对促排卵治疗、人工授精、更年期妇女LH的监测具有一定的临床应用意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于不孕检测
，具体涉及一种促黄体生成素半定量排卵检测试纸及其制备方法。
技术介绍
不孕检测试纸是检测女性尿液中促黄体生产素的含量(单位为mIU/ml)，适用范围为女性预测排卵以及辅助不孕症诊断。现有的不孕检测试纸仅能提供两种结果(阴性和阳性)，无法读出尿LH数值，也就定性检测试纸使得很难对LH激素水平进行动态监测，也就无法准确预测排卵时间。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种促黄体生成素半定量排卵检测试纸，该试纸能有效测定促黄体生成素含量的变化情况。本专利技术的另一目的是提供上述试纸的制备方法。本专利技术所采取的技术方案是促黄体生成素半定量排卵检测试纸，包括背板和依次固连在所述背板上的吸水垫、含有抗体工作液的硝酸纤维膜、含有胶体金工作液的胶体金垫和含有缓冲液的样品垫。优选的，所述抗体工作液的制备方法包括以下步骤：a、动物免疫：采用纯种BALB/C小鼠作为免疫对象，注射人体促黄体生成素作为抗原溶液进行免疫；b、细胞融合：将免疫后的小鼠处死，取出脾脏，将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合；c、选择杂交瘤细胞：所述脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合后，筛选出杂交瘤细胞；d、杂瘤细胞克隆：将检测抗体呈阳性的杂交瘤细胞进行克隆，冷冻；e、抗体的制备和纯化：将所述呈阳性的杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔中，小鼠感染产生腹水，抽取所述腹水经过滤、纯化，得到抗体。优选的，所述步骤b中融合是将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按体积比为2:1以上的量混匀后，离心，去除上清液，在室温条件下加入50％的PEG溶液，静置，再加入不含血清的培养液或盐水缓冲液，再静置。优选的，所述步骤c中筛选采用HAT培养基来进行。优选的，所述步骤d中检测采用酶联免疫吸附法来进行；所述冷冻的方法：先在4℃放置1小时，再在-20℃放置30分钟，然后-80℃放置12小时，再转入液氮中冻存。优选的，所述步骤e中所述过滤是向腹水中加入结合缓冲液，离心，用0.45um滤膜滤过；所述纯化是将所得过滤液上样于ProteinA亲和层析柱，再用0.1MpH值为3-4的柠檬酸缓冲液进行洗脱，收集洗脱液，加入0.5M的Tris缓冲液进行中和，最后于4℃透析24-48h。采用纯化工艺，能使最终抗体的总蛋白浓度达到5mg/ml以上，纯度＞99％，ELISA检测其效价能稳定在10-6，从而能高度特异性结合尿LH，保证试纸的灵敏性和准确性。优选的，所述腹水与结合缓冲液按体积比为1:1的量进行混合；所述结合缓冲液为pH值为7-8的3M的PBS溶液。优选的，所述胶体金工作液的制备方法包括以下步骤：a、将0.01％的氯金酸溶液加热煮沸，加入1％的柠檬酸溶液，继续煮沸，至溶液呈红色；然后离心，去除上清液，得浓缩后的胶体金溶液；b、将所述抗体工作液和所述浓缩后的胶体金溶液混合，经偶联反应形成金标抗体，再经冷冻，离心浓缩，得到胶体金工作液。优选的，所述缓冲液为0.1MTris缓冲液。优选的，所述Tris缓冲液加入0.5％-1％的BSA溶液。本专利技术申请中，若无特殊说明，百分比均指的质量百分比。本专利技术的有益效果在于：应用单克隆抗体技术和新型金标显色技术，连续使用本试纸，能动态地测定妇女尿促黄体生成素(LH)的变化情况，可帮助医生了解卵泡发育情况、确定有无排卵，可提前12-24小时预测排卵时间，可用于辅助诊断LH相关的内分泌综合症，对促排卵治疗、人工授精、更年期妇女LH的监测具有一定的临床应用意义。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的其中一个实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术试纸的结构示意图。图中：1-吸水垫，2-硝酸纤维膜，3-胶体金垫，4-样品垫，5-背板。图2为使用本专利技术试纸后与色卡比色的示意图。具体实施方式为使本领域技术人员详细了解本专利技术的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本专利技术的应用和技术效果。实施例1如图1所示，一种促黄体生成素半定量排卵检测试纸，包括背板5和依次固连在所述背板5上的吸水垫1、含有抗体工作液的硝酸纤维膜2、含有胶体金工作液的胶体金垫3和含有0.1MTris缓冲液的样品垫4。其中，抗体工作液的制备方法包括以下步骤：a、动物免疫：采用纯种BALB/C小鼠作为免疫对象，注射人体促黄体生成素作为抗原溶液进行免疫；b、细胞融合：将免疫后的小鼠处死，取出脾脏，将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合；融合是将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按体积比为2:1的量混匀后，离心，去除上清液，在室温条件下加入50％的PEG溶液，静置，再加入不含血清的培养液或盐水缓冲液，再静置。c、选择杂交瘤细胞：所述脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合后，采用HAT培养基筛选出杂交瘤细胞；d、杂瘤细胞克隆：采用酶联免疫吸附法检测抗体呈阳性的杂交瘤细胞进行克隆，冷冻；冷冻的方法：先在4℃放置1小时，再在-20℃放置30分钟，然后-80℃放置12小时，再转入液氮中冻存。e、抗体的制备和纯化：将所述呈阳性的杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔中，小鼠感染产生腹水，抽取所述腹水经过滤、纯化，得到抗体。所述过滤是向腹水中加入结合缓冲液，离心，用0.45um滤膜滤过；所述纯化是将所得过滤液上样于ProteinA亲和层析柱，再用0.1MpH值为3.5的柠檬酸缓冲液进行洗脱，收集洗脱液，加入0.5M的Tris缓冲液进行中和，最后于4℃透析36h。所述腹水与结合缓冲液按体积比为1:1的量进行混合；所述结合缓冲液为pH值为7.5的3M的PBS溶液。其中，胶体金工作液的制备方法包括以下步骤：a、将0.01％的氯金酸溶液加热煮沸，加入1％的柠檬酸溶液，继续煮沸，至溶液呈红色；然后离心，去除上清液，得浓缩后的胶体金溶液；b、将所述抗体工作液和所述浓缩后的胶体金溶液混合，经偶联反应形成金标抗体，再经冷冻，离心浓缩，得到胶体金工作液。实施例2如图1所示，一种促黄体生成素半定量排卵检测试纸，包括背板5和依次固连在所述背板5上的吸水垫1、含有抗体工作液的硝酸纤维膜2、含有胶体金工作液的胶体金垫3和含有加入0.7％的BSA溶液的0.1MTris缓冲液的样品垫4。其中，抗体工作液的制备方法包括以下步骤：a、动物免疫：采用纯种BALB/C小鼠作为免疫对象，注射人体促黄体生成素作为抗原溶液进行免疫；b、细胞融合：将免疫后的小鼠处死，取出脾脏，将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合；融合是将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按体积比为2:1的量混匀后，离心，去除上清液，在室温条件下加入50％的PEG溶液，静置，再加入不含血清的培养液或盐水缓冲液，再静置。c、选择杂交瘤细胞：所述脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合后，采用HAT培养基筛选出杂交瘤细胞；d、杂瘤细胞克隆：采用酶联免疫吸附法检测抗体呈阳性的杂交瘤细胞进行克隆，冷冻；冷冻的方法：先在4℃放置1小时，再在-20℃放置30分钟，然后-80℃放置12小时，再转入液氮中冻存。e、抗体的制备和纯化：将所述呈阳性的杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔中，小鼠感染产生腹水，抽取所述腹水经过滤、纯化，得到抗体。所述过滤是向腹水中加入结合缓冲液，离心，用0.45um滤本文档来自技高网...

【技术保护点】
促黄体生成素半定量排卵检测试纸，其特征在于：包括背板(5)和依次固连在所述背板(5)上的吸水垫(1)、含有抗体工作液的硝酸纤维膜(2)、含有胶体金工作液的胶体金垫(3)和含有缓冲液的样品垫(4)。

【技术特征摘要】
1.促黄体生成素半定量排卵检测试纸，其特征在于：包括背板(5)和依次固连在所述背板(5)上的吸水垫(1)、含有抗体工作液的硝酸纤维膜(2)、含有胶体金工作液的胶体金垫(3)和含有缓冲液的样品垫(4)。2.根据权利要求1所述的促黄体生成素半定量排卵检测试纸，其特征在于：所述抗体工作液的制备方法包括以下步骤：a、动物免疫：采用纯种BALB/C小鼠作为免疫对象，注射人体促黄体生成素作为抗原溶液进行免疫；b、细胞融合：将免疫后的小鼠处死，取出脾脏，将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合；c、选择杂交瘤细胞：所述脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合后，筛选出杂交瘤细胞；d、杂瘤细胞克隆：将检测抗体呈阳性的杂交瘤细胞进行克隆，冷冻；e、抗体的制备和纯化：将所述呈阳性的杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔中，小鼠感染产生腹水，抽取所述腹水经过滤、纯化，得到抗体。3.根据权利要求2所述的促黄体生成素半定量排卵检测试纸，其特征在于：所述步骤b中融合是将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按体积比为2:1以上的量混匀后，离心，去除上清液，在室温条件下加入50％的PEG溶液，静置，再加入不含血清的培养液或盐水缓冲液，再静置。4.根据权利要求2所述的促黄体生成素半定量排卵检测试纸，其特征在于：所述步骤c中筛选采用HAT培养基来进行。5.根据权利要求2所述的促黄体生成素半定量排卵检测试纸，其特征在于：所述步骤d中检测采用酶联免疫吸...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕琦，李维酽，
申请(专利权)人：昆明云大生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53