LETMD1在脓毒症诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了分子标志物在诊断脓毒症中的应用，具体地为LETMD1在诊断脓毒症中的应用，LETMD1在脓毒症患者中表达下调，本发明专利技术为临床上脓毒症的早期诊断提供了可能，从而有利于降低因严重脓毒症或脓毒症休克导致的死亡率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及LETMD1在脓毒症诊断中的应用。
技术介绍
脓毒症是任何类型的感染引起的全身炎症反应综合征。在脓毒症发病过程中，全身多种组织器官均参与其中。脓毒症是全世界重症监护室病人死亡的主要原因，且脓毒症治疗费用昂贵，给病人造成了沉重的经济负担。在疾病过程中，除了病原微生物及其相关毒素侵袭机体的组织细胞外，机体的自身免疫反应也参与该病的发展。脓毒症过程中，免疫亢进和免疫抑制同时存在，且抗炎和促炎反应也参与发病。尽管近几年在脓毒症治疗方面研究有很大的进展，但是脓毒症的30天病死率仍然高达47％。脓毒症的临床表现较为多样，且缺乏特有的临床表现，所以目前很多学者均在寻找脓毒症的生物学标记物，以用于脓毒症的诊断及预后评价。目前发现的生物学标记已经有很多，包括脓毒症疾病过程中各个环节的生物学标记物，如凝血，炎症等，包括CRP、PCT、活化蛋白C(APC)，高迁移率族蛋白B(HMGB1)、细胞因子、内毒素、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)及其他新型标志物，且部分已经应用于临床。研究这些物质的临床意义在于(1)区别脓毒症和其他原因引起的SIRS；(2)判断脓毒症的严重程度和不良预后；(3)连续监测以判断病人对某种治疗方法的反应。脓毒症生物学标志物源于宿主对感染性刺激的反应，理想的标志物应具备高效、易于鉴别炎症病因、可识别潜在病毒或细菌感染、准确反映抗感染疗效的优势。但是目前应用的上述几种标记物，敏感性和特异性均不理想。CRP与疾病严重程度无关，无法预测预后；内毒素测定无临床意义，而内毒素活性分析法诊断G-菌感染和脓毒症有较高阴性预测价值，但不能反映宿主反应，与急性生理和慢性健康评估Ⅱ评分(APACHEⅡ评分)相关性差细胞因子在脓毒症的诊断及预后评估意义较小；骨髓细胞表达激活受体-1(TREM-1)主要见于细菌或真菌所致的急性炎症损伤，非感染性炎症时不表达。TREM-1能较好地判断预后，但预测价值低于PCT，测定肺泡灌洗液中TREM-1对于诊断呼吸机相关性肺炎有很高的灵敏度和特异性；APC因临床证据不足，影响因素较多，测定方法复杂等原因,用于诊断、危险分层及预后判断的临床意义有限。因此寻找敏感和特异性的生物标志物应用于临床诊断、治疗和预后具有重要的意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一，提供一种分子诊断标志物；本专利技术的目的之二，提供一种产品，用以早期诊断脓毒症。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了LETMD1基因及其表达产物在制备诊断脓毒症的产品中的应用。进一步，所述的产品通过检测样品中LETMD1基因及其表达产物的表达水平来诊断脓毒症。进一步，检测LETMD1基因及其表达产物的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或微阵列芯片诊断脓毒症的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断脓毒症的产品至少包括一对特异扩增LETMD1基因的引物；所述用实时定量PCR诊断脓毒症的产品至少包括一对特异扩增LETMD1基因的引物；所述用免疫检测诊断脓毒症的产品包括：与LETMD1蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断脓毒症的产品包括：与LETMD1基因的核酸序列杂交的探针；所述用微阵列芯片诊断脓毒症的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与LETMD1蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与LETMD1基因的核酸序列杂交的探针。进一步，所述产品包括芯片和/或试剂盒；其中所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述试剂盒包括基因检测试剂盒、蛋白免疫检测试剂盒。进一步，所述用实时定量PCR诊断脓毒症的产品至少包括一对特异扩增LETMD1基因的引物。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述用实时定量PCR特异扩增LETMD1基因的引物序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。本专利技术提供了一种诊断脓毒症的产品，所述的产品能够通过检测样品中LETMD1基因的表达水平来诊断脓毒症。进一步，上面所述的产品包括芯片、或试剂盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒。所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测LETMD1基因转录水平的针对LETMD1基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的LETMD1蛋白的特异性抗体；所述基因检测试剂盒包括用于检测LETMD1基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括LETMD1蛋白的特异性抗体。其中，所述基因芯片可用于检测包括LETMD1基因在内的多个基因(例如，与脓毒症相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括LETMD1蛋白在内的多个蛋白质(例如与脓毒症相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与脓毒症的标志物同时检测，可大大提高脓毒症诊断的准确率。进一步，所述基因检测试剂盒包括用于特异性扩增LETMD1基因引物对。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述用于扩增LETMD1基因的引物对的序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。在本专利技术的具体实施方式中，所述基因检测试剂盒还包含SYBRGreen聚合酶链式反应体系、用于扩增管家基因的引物对；所述SYBRGreen聚合酶链式反应体系包含：PCR缓冲液、dNTPs、SYBRGreen荧光染料。在本专利技术中，“抗体”覆盖单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、及抗体片段、组合抗体等，只要它们展现出期望的生物学活性即可。“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同和/或结合相同表位，除了生产单克隆抗体的过程中可能产生的可能变体外，此类变体一般以极小量存在。此类单克隆抗体典型的包括包含结合靶物的多肽序列的抗体，其中靶物结合多肽序列是通过包括从众多多肽序列中选择单一靶物结合多肽序列在内的过程得到的。单克隆抗体还包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性即可。“抗体或抗体片段”指无论自天然生成抗体的任何物种衍生，还是通过重组DNA技术创建；无论自血清、B细胞、杂交瘤、转染瘤、酵母或细菌分离的抗体(例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE)或片段(诸如Fab、F(ab’)2、Fv、二硫化物连接的Fv、scFv、闭合构象多特异性抗体、二硫化物连接的scFv、双抗体)。在本专利技术中，术语“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严谨性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。在本专利技术中，术语“微阵列”是杂交阵列原件有序排列在基质上，所述杂交阵列原件诸如聚核苷酸探针(例如寡核苷酸)或结合剂(例如抗体)。所述基质可以是固体基质，例如，玻璃或二氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
LETMD1基因及其表达产物在制备诊断脓毒症的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.LETMD1基因及其表达产物在制备诊断脓毒症的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的产品通过检测样品中LETMD1基因及其表达产物的表达水平来诊断脓毒症。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，检测LETMD1基因及其表达产物的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或微阵列芯片诊断脓毒症的产品。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括芯片和/或试剂盒；其中所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述试剂盒包括基因检测试剂盒、蛋白免疫检测试剂盒。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断脓毒症的产品至少包括一对特异扩增LETMD1基因的引物。...

【专利技术属性】
技术研发人员：台德强，孙锦云，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11