一种原位活体检测植物miRNA的微电极生物传感器及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微电极生物传感技术，具体公开了一种原位活体检测植物miRNA的微电极生物传感器及其应用。本发明专利技术通过在工作电极电沉积金纳米粒子后，将末端巯基化的能识别目标miRNA的DNA探针放入亚甲基蓝MB溶液中孵育，形成DNA‑亚甲基蓝复合物，再将该复合物滴涂至沉积了金纳米粒子的工作电极表面，得到DNA探针修饰的工作电极。应用含有该工作电极的微电极生物传感器对活体植物监测，利用电化学脉冲伏安法检测杂交前后MB的峰电流值变化，从而达到对microRNA定量检测的目的，对被检测样本不造成本质伤害，得到的数据结果可实时动态的反映植物体内目标miRNA的含量变化，实际应用操作简便，易于掌握。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微电极生物传感技术，具体地说，涉及一种原位活体检测植物miRNA的微电极生物传感器及其应用。
技术介绍
植物microRNA(miRNA)是一类重要的具有调控作用的小分子，它是一种非编码RNA，长约20～25个核苷酸。研究结果表明，miRNA在高等植物中普遍存在。miRNA的靶基因很多都是植物中起着重要作用的转录因子，miRNA通过对这些靶基因的调节，在植物生长发育、激素响应、抗逆抗病等多个方面起到了至关重要的作用。例如在白菜受芜菁花叶病毒侵染后，可诱导产生miR1885，miR1885通过调控生长素受体—核苷酸绑定位点—亮氨酸富集区(TIR-NBS-LRR)类抗病基因介导了白菜抵御病毒侵染的过程。在拟南芥中也发现miRNA可以通过阻断生长素信号传导途径，提高植株对细菌侵染疾病的抗性。目前miRNA的检测方法主要有高通量测序、定量PCR等。高通量方法有助于获得样本中所有miRNA的总体表达图谱，但检测过程较为复杂，并且灵敏度低，难以实现标准化。定量PCR方法灵敏度较高，并且检测范围较宽，但是miRNA样品的准备要求较高的实验技术，并且需要昂贵的信号读出设备，因此具有一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种原位活体检测植物miRNA的微电极生物传感器，具有三电极体系，包括Ag/AgCl的参比电极，铂对电极，金工作电极，其特征在于，所述金工作电极上电沉积金纳米粒子，并修饰有能识别目标miRNA的DNA探针。

【技术特征摘要】
1.一种原位活体检测植物miRNA的微电极生物传感器，具有三电极体系，包括Ag/AgCl的参比电极，铂对电极，金工作电极，其特征在于，所述金工作电极上电沉积金纳米粒子，并修饰有能识别目标miRNA的DNA探针。2.如权利要求1所述的微电极生物传感器，其特征在于，所述金纳米粒子直径为10-50nm。3.如权利要求1所述的微电极生物传感器，其特征在于，所述DNA探针是指末端巯基化的DNA探针。4.如权利要求1所述的微电极生物传感器，其特征在于，修饰方法为在金工作电极上滴涂有能识别目标miRNA的DNA探针-亚甲基蓝复合物。5.如权利要求4所述的微电极生物传感器，其特征在于，所述能识别目标miRNA的DNA探针-亚甲基蓝复合物的制备方法为：将DNA探针序列放入10-4-10-5M的亚甲基蓝溶液中10-30min，形成DNA-亚甲基蓝复合物。6.如权利要求4所述的微电极生物传感器，其特征在于，将能识别目标miRNA的DNA探针-亚甲基蓝复合物滴涂到沉积了金纳米粒子的金工...

【专利技术属性】
技术研发人员：李爱学，王成，胡叶，王晓冬，侯佩臣，何璐璐，周航，高权，陈泉，赵勇，
申请(专利权)人：北京农业信息技术研究中心，
类型：发明
国别省市：北京;11