一种艾滋病血液净化治疗仪制造技术

本发明专利技术公开了一种艾滋病血液净化治疗仪，包括能分离血浆、单个血细胞和因寄居HIV而形成的多核巨细胞的血液和血浆分离器，包含能结合HIV的HIV抗体、CD4+T细胞株、杂交瘤巨噬细胞株的净化器，当血液流经分离器时，含有HIV的多核巨细胞被滤除，所分离的血浆流经净化器时，其中的HIV被净化剂吸附清除，净化后的血浆与分离器所分离的单个血细胞汇合后回输体内，从而达到清除血细胞内、外HIV的艾滋病血液净化治疗的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种艾滋病血液净化治疗仪，主要用于艾滋病患者血细胞内、外艾滋病毒的清除，从而达到预防、控制和治疗艾滋病的目的。
技术介绍
HIV感染后可刺激机体生产囊膜蛋白(Gp120,Gp41)抗体和核心蛋白(P24)抗体。在HIV携带者、艾滋病病人血清中测出低水平的抗病毒中和抗体，其中艾滋病病人水平最低，HIV携带者最高，说明该抗体在体内有保护作用。但抗体不能与单核巨噬细胞内存留的病毒接触，且HIV囊膜蛋白易发生抗原性变异，原有抗体失去作用，使中和抗体不能发挥应有的作用。在潜伏感染阶段，HIV前病毒整合入宿主细胞基因组中，因此HIV不会被免疫系统所识别，所以仅依靠自身免疫功能无法将其清除。另外一个很重要的原因应该是，根据抗体杀灭、清除抗原的机理推测，免疫性抗体与抗原结合后，要产生免疫效应，要么通过激活补体，介导ADCC效应溶解细胞性抗原，但HIV不是细胞性抗原；要么通过趋化作用吸引吞噬细胞吞噬清除抗原，但HIV反而在吞噬细胞内被保护、增殖；要么抗体与抗原结合起中和作用，使之失去感染力，但HIV抗原结构多变，往往使抗体难以识别。从目前已用于临床的艾滋病治疗方法看，效果不那么理想：(1)HIV逆转录酶抑制剂：仅能防止尚未感染HIV的易感细胞感染，对已感染的细胞没有治疗作用，且毒副作用较多，包括腺粒体毒性、骨髓抑制、红细胞性贫血、粒细胞和血小板减少、胰腺炎，加之交叉耐药性的产生，这类药已不单独使用，主要做联合用药，且易产生耐药变株，导致临床疗效下降或失效。(2)HIV蛋白酶抑制剂：易产生药物性肝损伤、脂质代谢紊乱等毒副作用及耐药性。(3)HIV整合酶抑制剂：通过抑制HIV病毒DNA与宿主细胞DNA整合而发挥作用，与HIV逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂联合同时使用对抗病毒有协同作用。(4)抑制HIV病毒进入抑制剂：包括阻断gp120与CD4结合、阻断HIV与辅助受体结合、作用于gp41膜亚单位及作用于T淋巴细胞表面CC趋化因子受体5(CCR5)来阻断HIV进入宿主细胞，但对肝和心脏有副作用。(5)细胞因子治疗：主要用于调节T细胞动态平衡。(6)HIV疫苗治疗：由于HIV的特殊性，如固有免疫不足以抵御HIV及其靶向破坏免疫系统，病毒突变迅速，导致至今尚未开发出真正安全有效的疫苗。(7)基因治疗：HIV基因治疗的研究从未间断，包括反义技术、RNA诱饵、RNA干扰、细胞内抗体、显性阴性突变体、自杀基因等，但进入Ⅱ期临床试验阶段的基因疗法几乎没有。(8)单克隆抗体被动免疫疗法：通过下调CD4+T细胞表面CCR5来降低HIV的易感性、延缓艾滋病的进展和减少HIV的扩散，中和单克隆抗体2G12、2F5和4E10应用于HIV感染者具有良好的耐受性和安全性，能延缓但不能阻止病毒的反弹(9)过继性免疫细胞治疗：体外大量培养HIV自体的CD4+T细胞时会导致病毒大量扩增，增加病毒感染的CD4+T细胞数量，而回输CD4+T细胞可能会增加体内病毒复制的场所，导致病毒载量反弹，总体上看过继性免疫细胞治疗无明显的毒副作用，也未取得满意的治疗效果。凝胶中抗原-抗体沉淀反应于1905年首先应用于研究利泽甘氏现象，1932年应用于鉴定细菌菌株，1946年Oudin在试管中进行免疫扩散试验，用于分析抗原混合物，1948年Elek和Ouchterlony分别建立了琼脂双向双扩散法，用于同时鉴定、比较两种以上抗原或抗体。凝胶中抗原-抗体沉淀反应的介质凝胶琼脂或琼脂糖是一种含有硫酸基的多糖体，高温时能溶于水，冷后凝成凝胶，内部形成一种多孔的网状结构，而且孔径很大，可允许大分子物质(分子量可达百万以上)自由通过。孔径的大小还决定于琼脂浓度，琼脂浓度大，孔径相对较小，琼脂浓度小，孔径相对较大。1％琼脂凝胶的孔径约为85nm，由于琼脂或琼脂糖具有很好的化学稳定性，凝胶后含水量大，透明度好，来源方便，易处理，因此是一种很好的扩散介质。抗原和抗体的分子量一般都在20万以下，在凝胶中从高浓度区域向低浓度区域扩散时所受的阻力很小，基本上呈自由扩散形式。当抗原与相应抗体经扩散后在凝胶中相遇，形成抗原抗体复合物，若两者在相遇处比例适当，则形成最大的复合物。由于复合物的分子量增大，颗粒增大，因而不再继续扩散而产生沉淀，呈现出线状或带状，这种沉淀就形成了一个“特异性屏障”，凡在免疫学上与其相同的抗原或抗体分子不能通过，而性质不同的那些分子可以通过这个屏障而继续扩散，直到形成它们自己的复合物为止。此种反应称为琼脂凝胶或免疫扩散，是目前用已知抗体检测未知量相应抗原的常规实验诊断项目，也是《中国药典》2010版中规定用于流感病毒疫苗血凝素含量检测的标准方法。通常将一定量的羊抗人Ig抗血清成分混合于琼脂凝胶中，制成含有特异性羊抗人Ig抗血清的琼脂板，待凝固后打孔，并在相应孔中加入待检人血清(IgG，IgA，IgM等)，使待检血清在琼脂板中向四周扩散，在抗原和抗体浓度比例合适处发生结合，形成肉眼可见的白色沉淀环而不再扩散。由此可见，当一种溶液通过半固体凝胶时，其中的大分子溶质就被分子筛作用的凝胶孔阻留在凝胶中，特别是其中的抗原能被预先固定在凝胶中的抗体结合而被吸附在凝胶中。CD4分子是HIV的受体，HIV易感于CD4+T细胞，CD4+T细胞是T淋巴细胞的一种，平均寿命一般为7天左右，但某些T细胞特别是经永生化成细胞系(株)后可长期存活、无限扩增。国外文献报道，猴肾病毒40(SV40)可以使某些人类细胞发生永生化。Poulin DL、Kung AL和Sullivan CS等研究表明，SV40T抗原基因的导入能加快转化细胞的生长速率，永生化细胞在体外多次传代后，仍具有相对稳定的增殖特性和功能状态，同时也能保留其原始细胞的许多分化表型。Reilly用猿猴病毒大T抗原基因转化来建立血管平滑肌细胞株，构建细胞模型以研究肝素对血管平滑肌的抑制作用机制。Su等利用经SV40转化的角化上皮细胞株，构建细胞模型来分析上皮细胞内蛋白质合成的调控作用。Miquel等用SV40转化的角化上皮细胞株，作为细胞模型研究层粘连蛋白5介导的细胞粘附作用。Webber等用经SV40转化的前列腺上皮细胞株作为细胞模型来研究前列腺上皮细胞的生理功能和分泌功能。Racusen等用经Ad12-SV40转化肾小管上皮细胞模型来研究近曲小管的损伤和疾病。Hougton等用SV40转化建立骨髓基质细胞株作为细胞模型以研究在一定培养条件下，细胞具有向脂肪细胞和成骨细胞的双向分化的潜能，进一步研究骨质疏松的机制。国外研究还表明，导入外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)可以使细胞保持正常表型及分化特征。近年来已利用hTERT成功建立了某些细胞的永生化细胞系，基本保持染色体稳定、分化正常、接触抑制、无致瘤性等相对正常的生长特征。在口腔医学领域，日本学者Kamata、Fujita和Fujii转染hTERT建立了永生化人牙龈成纤维细胞、牙周细胞、牙髓细胞系和牙囊细胞系，细胞群体倍增数达150次以上，细胞均表现原有的生物学特性，诱导培养后都可以表达来源细胞的相关蛋白。Kitagawa等转染hTERT建立了人成牙骨质细胞系，细胞倍增达200次以上，细胞分化标志物如碱性磷酸酶、I型胶原等表达稳定。因研究工作的需要，几乎每种疾病都有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种艾滋病血液净化治疗仪，其特征在于，包括依次连接的血液分离器、血浆分离器和净化器；待净化的血液经血液分离器分离后，滤去多核巨细胞，而中小体积血细胞及血浆进入血浆分离器；血浆分离器将中小体积血细胞及血浆进行分离，分离出的血浆经两个或两个以上并联净化器净化后，与血浆分离器分离出的中小体积混合后，完成净化；所述净化器进出口均设有细胞筛网，净化器内设置有多层由琼脂凝胶和净化细胞组成的净化层，多层净化层构成净化柱；所述净化细胞由能结合HIV的CD4+T细胞株、杂交瘤巨噬细胞株按照数量比1：0.5～3组成；每一层中，细胞占总体积的4/5；所述琼脂凝胶包含游离的HIV抗体、结合于羊抗Ig的HIV抗体、琼脂糖等；从净化器的进口处至出口处，游离的HIV抗体的抗体滴度、结合于羊抗Ig的HIV抗体的抗体滴度均从高到低依次递减，琼脂糖浓度从低到高依次递增；每一层中，净化细胞占总体积的4/5，或净化细胞占净化柱总体积的4/5。

【技术特征摘要】
1.一种艾滋病血液净化治疗仪，其特征在于，包括依次连接的血液分离器、血浆分离器和净化器；待净化的血液经血液分离器分离后，滤去多核巨细胞，而中小体积血细胞及血浆进入血浆分离器；血浆分离器将中小体积血细胞及血浆进行分离，分离出的血浆经两个或两个以上并联净化器净化后，与血浆分离器分离出的中小体积混合后，完成净化；所述净化器进出口均设有细胞筛网，净化器内设置有多层由琼脂凝胶和净化细胞组成的净化层，多层净化层构成净化柱；所述净化细胞由能结合HIV的CD4+T细胞株、杂交瘤巨噬细胞株按照数量比1：0.5～3组成；每一层中，细胞占总体积的4/5；所述琼脂凝胶包含游离的HIV抗体、结合于羊抗Ig的HIV抗体、琼脂糖等；从净化器的进口处至出口处，游离的HIV抗体的抗体滴度、结合于羊抗Ig的HIV抗体的抗体滴度均从高到低依次递减，琼脂糖浓度从低到高依次递增；每一层中，净化细胞占总体积的4/5，或净化细胞占净化柱总体积的4/5。2.根据权利要求1所述的艾滋病血液净化治疗仪，其特征在于，所述血液分离器通过微孔滤膜实现细胞分离，微孔直径为1～250μm；所述中小体积血细胞为直径小于微孔直径的细胞，或能滤过微孔的细胞。3.根据权利要求1所述的艾滋病血液净化治疗仪，其特征在于，所述血浆分离器的空心纤维膜直径为270～370μm，膜厚度为50μm，孔径为0.2～0.6μm，纤维长度为13.5～26μm。4.根据权利要求1所述的艾滋病血液净化治疗仪，其特征在于，所述净化器进口处筛网的目数为800目，出口处筛网的目数可以为2.0～5.0目。5.根据权利要求1所述的艾滋病血液净化治疗仪，其特征在于，所述净化器中净化层的层数为5层，游离的HIV抗体的抗体滴度、结合于羊抗Ig的HIV抗体的抗体滴度均从高到低，依次为1：100、1：200、1：300、1：500、1：700。6.根据权利要求1所述的艾滋病血液净化治疗仪，其特征在于，所述净化器中净化层的层数为5层，琼脂糖浓度从低到高...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁炳焕，李兰娟，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33