miRNA在软骨母细胞型骨肉瘤诊断中的用途制造技术

本发明专利技术公开了miRNA在软骨母细胞型骨肉瘤诊断中的用途，所述miRNA为miRNA‑4482‑3p。本发明专利技术发现了miRNA‑4482‑3p与骨肉瘤的发生发展相关，可作为骨肉瘤的分子标志物。鉴于此，本发明专利技术提供了用于骨肉瘤早期诊断的产品，该产品在临床上具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及miRNA在软骨母细胞型骨肉瘤诊断中的用途，具体的所述miRNA为miRNA-4482-3p。
技术介绍
microRNA是一种不编码蛋白质的，约21-25nt大小的单链小分子RNA。通过特异性的结合靶基因来调控其表达。从1993年，第一个microRNA：lin-4被发现后，在过去的几十年，大量的microRNA被发现并认为在细胞的发生、分化、增殖和凋亡起着重要的作用。据报道，miRNAs调控人类60％编码蛋白基因的表达，通过结合其目标基因mRNA的3’非翻译区而导致mRNA的降解或者翻译抑制。除了沉默作用外，某些miRNAs还被证实能激活基因的表达。在不同的肿瘤类型中，microRNA呈现两种不一样的角色：抑癌基因和癌基因。主要的作用机制包括：miRNA位点的缺失、扩增、突变，表观遗传水平改变，转录调控因子的异常表达等。原发性骨肿瘤临床较为罕见，每百万人口中仅约有10例被诊断该病，而在这10例之中大约2-5例，就可能是患有骨肉瘤，这一现象在儿童和青少年人群中尤其常见。虽然骨肉瘤发病率并不算高，但其却是最常见的原发性骨恶性肿瘤，其恶性程度甚高，进展迅速，极易发生早期肺转移，是儿童和青少年群体中引起肿瘤相关性死亡的最主要诱因，给患者及其家庭带来极大的精神损害，给社会乃至国家亦带来沉重的经济负担。骨肉瘤发病率男女比例约为1.5：1，近80％-90％发生与股骨、胫骨和肱骨等，发生在手和足等四肢末端的不到1％。骨肉瘤患者预后很差，高分化骨肉瘤单纯手术切除后5年生存率小于20％，近年来应用新辅助化疗治疗骨肉瘤使得骨肉瘤患者长期生存率有了大幅提高，无转移的高分化骨肉瘤患者5年生存率从原来的小于20％提高到60％-70％。但是，转移或者复发的患者长期生存率仍低于20％，对化疗药物的耐药是造成治疗失败及复发的主要原因。骨肉瘤可分为不同的亚型，其中软骨母细胞型骨肉瘤为骨肉瘤的一种亚型。
软骨母细胞型骨肉瘤以产生软骨基质为主，大多为高级别透明软骨，除了颌骨和盆骨的软骨母细胞型骨肉瘤以外，肿瘤内的软骨基质很少有明显黏液变性或出现其他形式的软骨肉瘤成分。软骨母细胞型骨肉瘤的瘤组织中，1/2以上呈软骨肉瘤样结构，在此基础上可化生形成肿瘤骨。软骨母细胞型骨肉瘤作为普通型骨肉瘤的一个亚型和其他普通型骨肉瘤的临床治疗和预后并无大的差别。由于骨肉瘤给人类健康带来的巨大危害，研究者们正通过各种途径寻找有效的治疗骨肉瘤的方法。分子靶向治疗正在被尝试应用到骨肉瘤的诊断和治疗当中。最近的研究表明microRNA(miRNA)在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用，寻找与骨肉瘤发生发展相关的miRNA对骨肉瘤的机制研究以及临床上的诊断和治疗就有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种用于骨肉瘤诊断的miRNA，该miRNA为miRNA-4482-3p。本专利技术的目的之二，提供一种对骨肉瘤进行早期诊断的产品。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测微小RNA的试剂在制备诊断骨肉瘤的产品中的应用，其中，所述微小RNA为miRNA-4482-3p或其同源物。进一步，所述骨肉瘤为软骨母细胞型骨肉瘤。进一步，所述产品通过测定样本中miRNA-4482-3p或其同源物的表达水平以诊断骨肉瘤。其中，miRNA-4482-3p或其同源物在骨肉瘤患者中表达下调。进一步，所述产品包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测miRNA-4482-3p或其同源物的水平以诊断骨肉瘤的产品。进一步，所述产品包括芯片和/或试剂盒。其中，所述芯片包括固相载体以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于上面所述的miRNA-4482-3p的部分或全部序列。所述试剂盒包括用于检测上面所述的miRNA-4482-3p的表达水平的试剂。进一步，所述试剂盒包括扩增miRNA-4482-3p的引物对，序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本专利技术提供了一种诊断骨肉瘤的产品，所述产品能够通过检测样本中miRNA-4482-3p或其同源物的水平来诊断骨肉瘤。进一步，所述样本包括血液、尿液、脑脊液、组织液、汗液、唾液、泪液。在本专利技术的具体实施方式中，所述样本为血液。进一步，所述产品包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测miRNA-4482-3p或其同源物的表达水平。进一步，所述产品包括芯片和/或试剂盒。其中，所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于上面所述的miRNA-4482-3p的部分或全部序列。所述试剂盒包括针对miRNA-4482-3p的引物和/或探针。在本专利技术中，试剂盒还包括针对现有技术中已经报道的用于诊断骨肉瘤的miRNA的引物和/或探针。将多种miRNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种miRNA指标联合诊断骨肉瘤的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。所述芯片(即微阵列)包含针对miRNA-4482-3p特异性的一组寡核苷酸(如寡脱氧核苷酸)探针。通过使用该微阵列，可通过逆转录RNA以产生一组靶寡脱氧核苷酸，然后使其与微阵列上的探针寡脱氧核苷酸杂交，从而产生杂交或表达谱，来测定生物样品中多种微小RNA的表达水平。miRNA特异性的探针寡核苷酸或对miRNA特异性的探针寡核苷酸是指具有经选择与特定miRNA基因产物杂交或与该特定miRNA基因产物的逆转录物杂交的序列的探针寡核苷酸。在本专利技术的具体实施方式中，所述miRNA-4482-3p核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO.1所示。应当知道，本专利技术的miRNA-4482-3p包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，“变体”是指，与对应野生型miRNA基因产物具有少于100％的同一性并且具有对应野生型miRNA基因产物的一个或多个生物活性的miRNA。此类生物活性的实例包括但不限于，与骨肉瘤发生发展的细胞过程(例如，细
胞分化、细胞生长、细胞死亡)的抑制。这些变体包括物种变体和由于miRNA基因的一个或多个突变(例如，置换、缺失、插入)而产生的变体。在某些实施方案中，变体与对应野生型miRNA基因产物具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的同一性。其显示完整miRNA-4482-3p核酸分子相同的功能，它们可能通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。本领域人员熟知，为了保证miRNA的稳定性，可以在miRNA的一端或者两端增加保护性碱基，如TT，也可对miRNA碱基进行修饰，但是不影响miRNA的功能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miRNA-4482-3p功能的条件下，对miRNA-4482-3p进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。本专利技术的miRNA-4482-3p核酸分子可以以单链或双链的形式存在。成熟的miRNA-4482-3p主要呈单链形式，而miRNA-4482-3p前体是部分自互补的，以形成双链结构。本专利技术的核酸分子可以是RNA、DNA、PNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测微小RNA的试剂在制备诊断骨肉瘤的产品中的应用，其特征在于，所述微小RNA为miRNA‑4482‑3p或其同源物。

【技术特征摘要】
1.检测微小RNA的试剂在制备诊断骨肉瘤的产品中的应用，其特征在于，所述微小RNA为miRNA-4482-3p或其同源物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述骨肉瘤为软骨母细胞型骨肉瘤。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品通过测定样本中miRNA-4482-3p或其同源物的表达水平以诊断骨肉瘤。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述miRNA-4482-3p或其同源物在骨肉瘤患者中表达下调。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测miRNA-4482-3p或其同源物的水平以诊断骨肉瘤的产品。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括芯片和/或试...

【专利技术属性】
技术研发人员：石小峰，王晓云，杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11