小叶紫檀（Pterocarpus santalinus），又名檀香紫檀，为蝶形花科紫檀属植物。因为材质优良，加之分布区域小、成材周期长，其市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，小叶紫檀的假冒品泛滥，如何准确鉴定小叶紫檀成为小叶紫檀交易市场上的最大难题。本发明专利技术提供一种用于小叶紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定小叶紫檀，具有快速、准确、对样品损伤小等特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及植物分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法。
技术介绍
小叶紫檀（Pterocarpus santalinus），又名檀香紫檀，为蝶形花科紫檀属植物。小叶紫檀坚实厚重，木质细腻，密度较大，棕眼较小，稳定性优，纹理漂亮，韧性好，耐雕琢，产于印度南部及附近的狭窄区域。小叶紫檀木色呈深紫，历来为皇室贵族家具专用木材，价格昂贵，居各木之首，被称为“帝王之木”。十八世纪法国皇家路易十八所使用家具，其材质也是选用上等小叶紫檀，在《红木国标》中确定的红木树种中，小叶紫檀为红木之首。小叶紫檀生长极其缓慢，一棵成材的小叶紫檀要生长几百年甚至上千年，因出材率极低，资源奇缺，又有“寸檀寸金”之说。因为材质优良，加之分布区域小、成材周期长，其市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，小叶紫檀的假冒品泛滥，如何准确鉴定小叶紫檀成为小叶紫檀交易市场上的最大难题。现在大多采用显微解剖及荧光观测法来鉴定小叶紫檀，其操作过程复杂，对样品损伤严重，而且随着造假技术的进步，这些方法的鉴定准确率也得不到保证。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种用于小叶紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定小叶紫檀，具有快速、准确、对样品损伤小等特点，具体技术方案如下。（1）获取用于小叶紫檀分子鉴定的标准基因根据DNA条形码技术原理，采用PCR扩增方法，确保条带的纯度及可靠性。测序结果通过手工校对、序列拼接，并确保所得序列为标准序列。从采集的小叶紫檀样品提取基因组DNA，参考植物条形码DNA片段选取原则，利用引物进行聚合酶链式反应(PCR)，扩增出样品对应的psbK-psbI基因，将扩增产物测序后分析比对，优选引物序列扩增小叶紫檀样品的psbK-psbI基因序列片段作为标准基因，基因序列为序列表所示（531个碱基）。（2）用psbK-psbI基因序列鉴定小叶紫檀的方法，分为四个步骤：第一步，取样并提取DNA；第二步，利用PCR反应扩增psbK-psbI基因序列；第三步，对扩增产物进行测序；第四步，将得到的序列与权利要求1中的psbK-psbI基因序列进行同源性比对，当同源性碱基比例小于95%时，排除该物种为小叶紫檀的可能，当同源性碱基比例大于或等于95%时，该样本是小叶紫檀的概率是×100%。具体实施方式实验中，用5个不同来源的小叶紫檀样本，用TIANGENE公司DNA提取试剂盒提取样本DNA。采用的正向引物：TTAGCCTTTGTTTGGCAAG，反向引物：AGAGTTTGAGAGTAAGCAT，PCR扩增条件为94℃预变性4min，接下来94℃变性45s，50℃退火45 s，72℃延伸1.5min，一共进行35个循环，最后72℃延伸10min。获得产物经测序后比对，样本间的同源性都保持在99%以上，获得序列与其他物种通过在线比对，其同源性都在52%以下。序列表：CTGCTGTAAGTTTTCGATGAGATCTTGAATTTGAATAAATGTCCTAAAAAAATTCGGAATTTATTCGAAAACAAAAATTCGAACATTTTAACAATTTAAAAGATCAGATAAGTCTTACAGTGTGAATCCTCGATTCAAATATTGAAATTTTTGGATAGACAAAAAAAATCTGGACCATCTCATTATTCCCTCATTCTTACGTTTTTTCCACTGAGAAATCCTTCTATTTTTAGATTTGTATTAGATTTGAGTCCACCACCAGTACCTGGGTTGTGGATATGAAAGAAAATCTTTTGTAATACAAATATTGGTAATAGTATATTGGTATTGGTAATACTATATTGGTAATAGTAATAAAGGGCTCGGCTCTTCCTACAAAGAAAGAAATTTCCGAATTTTTTTTTCTATTTCCTTGAAATCACTTCATTTCTTAGAAACTTTGTATCAAAAGAAACATAATGTGTTATATAAGAGAATCTATTCTCTTTTCTCATTCTCTGTCGTTTTTTTTTTAATCTTGGAGATTTTGTA。序列表：CTGCTGTAAGTTTTCGATGAGATCTTGAATTTGAATAAATGTCCTAAAAAAATTCGGAATTTATTCGAAAACAAAAATTCGAACATTTTAACAATTTAAAAGATCAGATAAGTCTTACAGTGTGAATCCTCGATTCAAATATTGAAATTTTTGGATAGACAAAAAAAATCTGGACCATCTCATTATTCCCTCATTCTTACGTTTTTTCCACTGAGAAATCCTTCTATTTTTAGATTTGTATTAGATTTGAGTCCACCACCAGTACCTGGGTTGTGGATATGAAAGAAAATCTTTTGTAATACAAATATTGGTAATAGTATATTGGTATTGGTAATACTATATTGGTAATAGTAATAAAGGGCTCGGCTCTTCCTACAAAGAAAGAAATTTCCGAATTTTTTTTTCTATTTCCTTGAAATCACTTCATTTCTTAGAAACTTTGTATCAAAAGAAACATAATGTGTTATATAAGAGAATCTATTCTCTTTTCTCATTCTCTGTCGTTTTTTTTTTAATCTTGGAGATTTTGTA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于小叶紫檀分子鉴定的标准基因，其特征在于其氨基酸序列为序列表中的序列。
【技术特征摘要】
1.一种用于小叶紫檀分子鉴定的标准基因，其特征在于其氨基酸序列为序列表中的序列。2.一种用权利要求1中的标准基因鉴定小叶紫檀的方法，分为四个步骤：第一步，取样并提取DNA；第二步，利用PCR反应扩增psbK-psbI基因序列，前后引物序列分别为：TTAGCCTTTGTTTGGCA...
【专利技术属性】
技术研发人员：王兵益，杨时宇，廖礼彬，李体初，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院资源昆虫研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53
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