一种富钙蝉花的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种富钙蝉花的培养方法，该方法包括如下步骤：步骤1，蝉花菌种在液体培养基中进行扩大培养；步骤2，将步骤1扩增后的菌种接种到固体培养基中进行固体培养；步骤3，对孢梗束进行采收；其特征在于，在步骤1液体培养基和/或步骤2固体培养基中加入钙盐；所述钙盐为柠檬酸钙、柠檬酸-苹果酸钙、醋酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙中的任意一种或几种。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种蝉花的培养方法，具体涉及一种富钙蝉花的培养方法。
技术介绍
蝉花(Isaria cicadae Miquel)属于真菌界(FUNGI)的子囊菌门(Ascomycot)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草科(Cordycipitaceae)、棒束孢属(Isaria)，是我国名贵的中药材，是寄生在蝉(俗称“知了”)上的一种虫草菌。其药用已有1000多年历史，是我国传统的名贵药材之一，具有多方面的药用价值。主要成分有腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。蝉花具有独特而广泛的功效，如改善肾功能，抗肿瘤，调节免疫系统，滋补强壮，提高细胞能力、抗疲劳，降血压、血糖，解热、镇痛、改善睡眠，改善脂质代谢，促进造血，抗真菌，抗衰老等。钙是人体必需的基本元素，钙在人体内主要以骨骼、牙齿的形式存在，人体中99％的钙质存在骨骼牙齿中，支持人体的运动和咀嚼能力。另外1％存在于血液和组织器官中，称为血钙。缺钙易导致少年儿童厌食、偏食，不易入睡、易惊醒、易感冒，头发稀疏，智力发育迟缓，学步晚、出牙晚或出牙不整齐，阵发性腹痛腹泻，X或O型腿，鸡胸；缺钙还导致青少年精力不集中、易疲劳、腰酸背痛、免疫力低、蛀牙或牙齿发育不良；孕妇及哺乳期妇女抽筋乏力、关节痛、头晕、贫血及产前高血压综合症、水肿及乳汁分泌不足；缺钙导致老年人老年性皮肤病痒，脚后跟疼，腰椎颈椎疼痛，牙齿松动、脱落，明显驼背，身高降低，食欲减退，消化道溃疡，多梦、失眠、烦躁、易怒等。根据2002年“中国居民营养与健康”调查
报告显示，中国人钙缺乏状况仍然很严重，居民钙的日摄入量为391毫克，仅相当于推荐摄入量的41％。因此通过食物补钙是很必要的。现有技术培养富钙微生物多以钙的无机酸盐为钙原添加在培养基中，如《3种食用菌菌丝体富钙的研究》(卜庆梅等，食品科学，2009年)、《茯苓菌丝体富集钙的研究》(王伟霞等，食用菌，2007年)、《灵芝深层发酵生物富集钙的工艺及其检测》(苗敬芝，徐州工程学院学报，2005年10月)分别公开了以CaCl2、Ca(NO3)2、CaCO3、CaO为钙源对微生物进行富钙培养。现有技术未公开在蝉花培养基中加入钙盐培养富钙蝉花的技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种富钙蝉花的培养方法。本专利技术的另一个目的在于提供一种用于培养蝉花的培养基。本专利技术的目的是通过如下方案实现的：一种富钙蝉花的培养方法，该方法包括如下步骤：步骤1，蝉花菌种在液体培养基中进行扩大培养；步骤2，将步骤1扩增后的菌种接种到固体培养基中进行固体培养；步骤3，对孢梗束进行采收；其特征在于，在步骤1液体培养基和/或步骤2固体培养基中加入钙盐。进一步，所述钙盐为钙的有机酸盐；更进一步，所述钙盐为柠檬酸钙、柠檬酸-苹果酸钙、醋酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙中的任意一种或几种；更进一步，所述钙盐为柠檬酸钙或柠檬酸-苹果酸钙；更进一步，所述柠檬酸钙为难溶晶型柠檬酸钙、三水柠檬酸钙或高溶晶型柠檬酸钙中的任意一种或几种；进一步，钙盐的加入方式为在固体培养基中加入钙盐或在固体培养基和液体培养基中均加入钙盐；进一步，所述步骤1和/或2加入钙盐后进行超声处理；更进一步，超声处理时间为10-30min。进一步，步骤2固体培养过程中，在菌丝体生长阶段采用遮光培养，
培养温度22-24℃；从孢梗束始发至采收阶段采用光照培养，培养温度为20-22℃；培养过程中相对湿度为60-70％；更进一步，孢梗束始发时保证光照强度为100-200Lx。本专利技术步骤1所述液体培养过程以菌种扩增为目的，可采用常规的菌种扩培方法，包括斜面培养、摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养中的任意一种或几种方法的组合；所用培养基为本领域常规的液体培养基，如PSA培养基、PDA培养基、PDY培养基、PSB培养基、酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基，酵母浸出粉-白砂糖-大豆水解蛋白培养基，麸皮煮汁-白砂糖培养基等；进一步优选为PSB培养基。本专利技术步骤2中所述固体培养基为本领域常规固体培养基，如谷物培养基，可选自小麦、玉米、大米、小米、黄豆粉、荞麦、大麦、燕麦、糙米、粳米中的任意一种或几种；农作物秸杆培养基，如麦秆、玉米杆、棉杆、豆杆、芝麻杆中的任意一种或几种；农作物皮壳培养基，如麸皮、大豆皮、棉籽壳等；经济林木树枝培养基等；其中优选谷物培养基。一种用于培养蝉花的培养基，其特征在于在培养基中加入钙盐。进一步，所述钙盐为钙的有机酸盐；更进一步，所述钙盐为柠檬酸钙、柠檬酸-苹果酸钙、醋酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙中的任意一种或几种；更进一步，所述钙盐为柠檬酸钙或柠檬酸-苹果酸钙；更进一步，所述柠檬酸钙为难溶晶型柠檬酸钙、三水柠檬酸钙或高溶晶型柠檬酸钙中的任意一种或几种。进一步，培养基中加入钙盐后进行超声处理；更进一步，超声处理时间为10-30min。本专利技术中所用蝉花(Isaria cicadae Miquel)是广布种，广泛分布在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的6-8月，按照一般中药材的采集方法都可采到，是现有技术中已知菌种，并可以从商业途径购买获得。本专利技术优选CN102851353A公开的蝉拟青霉菌株[Paecilomyces cicadae(Miq.)
Samson]，已于2009年11月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为CGMCC No.3453。本专利技术研究表明，在固体培养基和/或液体培养基中加入有机钙盐不仅能够促进蝉花的生长，而且能够明显提高其孢梗束的钙含量。实验例1有机钙对蝉花生长的影响1、对蝉花干重的影响有机钙：柠檬酸钙(难溶晶型)和柠檬酸-苹果酸钙实验方法：按实施例1方法对蝉花菌种进行培养，斜面和液体培养基为PSB培养基，固体培养基为小麦培养基，并按表1分别加入不同量的柠檬酸钙(难溶晶型)和柠檬酸-果酸钙，对照组固体培养基中不加钙。对照组设置6组重复，各实验组设置8组重复。培养结束后，分别测定孢梗束和菌丝体总干重，结果见表1。表1有机钙对蝉花干重的影响上述实验结果表明，在培养基中加入有机钙能明显提高蝉花的干重。2、对蝉花出草率的影响有机钙：三水柠檬酸钙和柠檬酸钙(高溶晶型)实验方法：按实施例1方法对蝉花菌种进行培养，斜面和液体培养基为PSB培养基，固体培养基为小麦培养基，并按表2分别加入不同量的三水柠檬酸钙和高溶晶型柠檬酸钙，对照组固体培养基中不加钙。对照组设置6组重复，各实验组设置8组重复。培养结束后，分别出草率，结果见
表2。表2有机钙对蝉花生长的影响上述实验结果表明，在培养基中加入有机钙能明显促进蝉花的出草率。综上，本实验结果表明，在培养基中加入有机钙对蝉花的生长具有明显的促进作用。实验例2有机钙对蝉花含钙量的影响有机钙：三水柠檬酸钙和柠檬酸钙(高溶晶型)实验方法：按实施例1方法对蝉花菌种进行培养，斜面和液体培养基为PSB培养基，固体培养基为小麦培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种富钙蝉花的培养方法，该方法包括如下步骤：步骤1，蝉花菌种在液体培养基中进行扩大培养；步骤2，将步骤1扩增后的菌种接种到固体培养基中进行固体培养；步骤3，对孢梗束进行采收；其特征在于，在步骤1液体培养基和/或步骤2固体培养基中加入钙盐。

【技术特征摘要】
1.一种富钙蝉花的培养方法，该方法包括如下步骤：步骤1，蝉花菌种在液体培养基中进行扩大培养；步骤2，将步骤1扩增后的菌种接种到固体培养基中进行固体培养；步骤3，对孢梗束进行采收；其特征在于，在步骤1液体培养基和/或步骤2固体培养基中加入钙盐。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述钙盐为钙的有机酸盐。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述钙盐为柠檬酸钙、柠檬酸-苹果酸钙、醋酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙中的任意一种或几种。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述柠檬酸钙为难溶晶型柠檬酸钙、三水柠檬酸钙或高溶晶型柠檬酸钙中的任意一种或几种。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1和/或2加入钙盐后进行超声处...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪伟，董琼，陆小芳，陈奇超，彭国杰，胡建峰，张忠亮，徐煜，施伟勤，陆文遥，孙长胜，
申请(专利权)人：浙江泛亚生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33