一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，包括以下步骤：(1)测定盐酸林可霉素和内标物各定量目标峰的纵向弛豫时间T1；(2)根据所测定的T1值设置核磁共振波普仪的倾倒角和弛豫延迟时间(d1)，所述倾倒角为30～90°，弛豫延迟时间(d1)≥(7/3×T1max～5×T1max)；(3)设定核磁共振波谱仪的其他相关检测参数，测定盐酸林可霉素及内标物中各定量目标峰的积分面积，根据如下公式计算盐酸林可霉素纯度：W％＝(mIS×HIS×AS×MS×100％)/(MIS×AIS×HS×mS)。本发明专利技术具有操作简便，内标物廉价易得，结果准确且重复性好等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药分析
，具体涉及一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的检测方法。
技术介绍
盐酸林可霉素临床主要用于敏感菌引起的各种感染，如肺炎、脑膜炎、心内膜炎、扁桃体炎及泌尿系统感染等，其主要通过作用于敏感菌核糖体的50S亚基，阻止肽链的延长，从而抑制细菌细胞的蛋白合成。对革兰阳性球菌有较好作用，特别对金葡萄及肺炎球菌有高效。目前，国内有多家医药企业生产该类药的注射剂、胶囊剂、片剂、软膏及滴眼液，是具有较好临床应用基础的医药品种。目前，对盐酸林可霉素纯度的检测通常使用HPLC-UV方法。然而如下所示，盐酸林可霉素分子中无共轭结构，在近紫外区无吸收，采用HPLC-UV方法测定其纯度时，紫外检测波长只能选择末端吸收(214nm)，以0.05mol.L-1硼砂溶液(85％磷酸溶液调节pH值至6.0)-甲醇(4:6)为流动相，以C18为色谱分离柱。然而，使用上述方法测定盐酸林可霉素纯度则存在以下不足：(1)仪器噪音高，选择性差，无法检出盐酸林可霉素合成过程中可能存在的无紫外吸收的杂质；(2)无法检出样品中可能存在的溶剂残留，如水、乙醇、乙腈等，仍需要结合气相色谱等方法扣除溶剂残留量后才能得出其真正的纯度；(3)峰形及出峰时间受水相中缓冲盐的比例及pH值影响较大，进而影响纯度测定结果；(4)定量时需要高纯度的盐酸林可霉素标准品，价格昂贵，长期使用成本高，而且在存放过程中标准样品发生吸潮、污染或降解等均会严重影响测定结果。而药品原料药纯度检测方法的研究是医药研发中一项重要内容，药品制剂原料的纯度最终影响成药的用药安全和疗效。因此，有必要开发一种能对盐酸林可霉素纯度进行廉价、简便、快速、准确测定的分析方法。氢核磁共振法因其具有的高灵敏度、高精确度、分析快速等优点已被广泛应用于有机化合物的结构解析和定性分析中，然而使用氢核磁共振法对某种特定化合物进行纯度测定定量分析时，由于影响其测量准确性的参数众多，而各化合物之间结构、性质上差异巨大，且参数设置无明确规律可以依循，因此构建一套基于氢核磁共振法准确测定化合物纯度的体系十分困难。目前，尚未有基于氢核磁共振法测定盐酸林可霉素原料药纯度的报道。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，该方法具有操作简便，内标物廉价易得，结果准确且重复性好等优点。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，包括以下步骤：(1)测定盐酸林可霉素和内标物各定量目标峰的纵向弛豫时间T1；(2)根据所测定的T1值设置核磁共振波普仪的倾倒角和弛豫延迟时间(d1)，所述倾倒角为30～90°，弛豫延迟时间(d1)≥(7/3×T1max～5×T1max)；(3)设定核磁共振波谱仪的其他相关检测参数，测定盐酸林可霉素及内标物中各定量目标峰的积分面积，根据如下公式(1)计算盐酸林可霉素纯度；W％＝(mIS×HIS×AS×MS×100％)/(MIS×AIS×HS×mS) (1) 其中，W％为盐酸林可霉素的纯度；mIS为内标物的实际质量(内标物的质量×纯度)，单位为mg；HIS为内标物定量目标峰的质子数；AS为盐酸林可霉素定量目标峰的积分值；MS为盐酸林可霉素的摩尔质量，单位为g/mol；MIS为内标物的摩尔质量，单位为g/mol；AIS为内标物定量目标峰的积分值；HS为盐酸林可霉素定量目标峰的质子数；mS为盐酸林可霉素样品的质量，单位为mg。优选的，所述倾倒角为30°、40°或90°，所述弛豫延迟时间(d1)为6～100s；优选的，所述核磁共振波谱仪的检测参数为：共振频率为400MHz，谱宽20ppm，测试温度28℃，采样时间(AQ)为2.0～4.1s；采样累加次数为32～128次；优选的，氘代试剂为重水、氘代甲醇或氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)；进一步优选的，所述氘代试剂为氘代二甲基亚砜；优选的，所述盐酸林可霉素检测浓度为16-18mg/mL；优选的，所述盐酸林可霉素的定量目标峰化学位移为δH 0.88(甲基信号)；优选的，所述内标物为其质子化学位移在δH 16.00～6.27或δH 6.27～5.17或δH 5.17～4.23或δH 1.99～1.39或δH 0.86～0.00范围，且室温条件下不与盐酸林可霉素发生化学反应的任意物质；进一步优选的，所述内标物为顺丁烯二酸；优选的，所述测定盐酸林可霉素及内标物中各定量目标峰的积分面积的方法为对每一信号6次积分取平均值。与现有技术相比，本专利技术有如下有益效果：(1)本专利技术利用氢核磁共振技术，选择廉价稳定的内标物替代需要使用标准品作外标的HPLC-UV进行盐酸林可霉素原料药纯度测定，操作简便，结果准确且重复性好；(2)本专利技术样品前处理简单，分析时间短，特别适合无紫外吸收的医药品种原料药的纯度分析及质量控制，能够有效解决盐酸林可霉素以及类盐酸林可霉素的新药纯度测定的技术问题，为此类药物纯度测定提供了新方法。氢核磁共振定量的基础是在合适的仪器参数下，定量目标信号的积分值与引起该信号的质子数成正比关系，通过选择适当的内标物，根据定量目标峰的积分值推算该信号所属化合物的摩尔浓度，进而计算各定量化合物的质量及纯度。在实际研究过程中，申请人发现脉冲倾倒角和弛豫延迟时间(d1)直接影响最终定量结果的准确性。当采用90°脉冲时，d1≥5×T1max是确保含量测定数据准确性的必须条件，但此时分析时间较长，氢核磁定量快速性的优点得不到发挥；当采用较小脉冲倾倒角时，如30°脉冲，此时d1≥(7/3)×T1max，就能够获得准确的分析结果，且分析时间大大缩短。因此，本申请首先通过测定定量目标信号的纵向弛豫时间(T1)，进而确定脉冲倾倒角和弛豫延迟时间(d1)及其他参数设置，并最终建立了基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法。由于在测定过程中不需要特定研发药品的对照品，因此，特别适合新药研发原料药的纯度测定。需要说明的是，核磁共振定量的原理是含氢有机化合物NMR波谱信号直接与原子数目成正比，因此在实验参数设定时，需要被测物和内标物上的共振峰与其对应的原子数尽可能保持一致，若选择不合适位置的氢进行纯度的测定，则受溶剂中杂质以及溶剂本身等干扰峰的影响较大，被测组分和杂质信号之间存在干扰，被测组分和内标也会出现信号重叠，导致积分不准确，检测结果重现性差。本专利技术中的待检测物质盐酸林克霉素分子量高达443，结构式如
技术介绍
中所示，实际上除了羰基、羟基等位置上比较活泼的氢不易被测出外，盐酸 林克霉素还有约十个不同位置的氢，每一位移峰都会对应不同的倾倒角和弛豫延迟时间等参数，所以选择哪个位置的氢进行纯度测定是目前限制利用氢核磁共振测定盐酸林克霉素纯度的技术难题之一。而内标物的选择最基本的原则是室温条件下不与盐酸林克霉素发生化学反应的物质，但是在内标物的物的选择时还要考虑被测物质的氢共振峰与内标的氢共振峰之间要避免重叠以及内标物是否廉价易得等，目前可用于作为内标物的物质有苯、苯甲酸苄酯、马来酸、过氧化苯甲酰、非那西汀、2,4-二硝基甲苯、三氟乙酸钠，DMSO-d6，邻苯二甲酸氢钾等多种，每种内标物都有至少一种氢共振峰，待测物质盐酸林本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)测定盐酸林可霉素和内标物各定量目标峰的纵向弛豫时间T1；(2)根据所测定的T1值设置核磁共振波普仪的倾倒角和弛豫延迟时间(d1)，所述倾倒角为30～90°，弛豫延迟时间(d1)≥(7/3×T1max～5×T1max)。

【技术特征摘要】
1.一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)测定盐酸林可霉素和内标物各定量目标峰的纵向弛豫时间T1；(2)根据所测定的T1值设置核磁共振波普仪的倾倒角和弛豫延迟时间(d1)，所述倾倒角为30～90°，弛豫延迟时间(d1)≥(7/3×T1max～5×T1max)。2.如权利要求1所述的一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，其特征在于，所述倾倒角为30°、40°或90°，弛豫延迟时间为6～100s。3.如权利要求1所述的一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，其特征在于，所述核磁共振波谱仪的检测参数为：共振频率为400MHz，谱宽20ppm，测试温度28℃，采样时间(AQ)为2.0～4.1s；采样累加次数为32～128次。4.如权利要求1所述的一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，其特征在于，氘代试剂为重水、氘代甲醇或氘代二甲基亚砜。5.如权利要求4所述的一种基于氢核磁共振快速测定盐酸林可霉素原料药纯度的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：王志伟，李锋，林云良，赵汝松，魏祥玉，闫慧娇，陈跃，高红梅，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东;37