用于测定多价、多特异性分子的生物活性的基于SPR的桥接测定法制造技术

本文报道了二价、双特异性抗体的结合测定法用于测定二价、双特异性抗体的生物活性的用途，所述二价、双特异性抗体具有与其抗原相互作用较小的KD值(解离常数)，所述抗原将该二价、双特异性抗体固定至固体表面。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本文报道了二价、双特异性抗体的结合测定法用于测定二价、双特异性抗体的生物活性的用途，所述二价、双特异性抗体具有与其抗原相互作用较小的KD值(解离常数)，所述抗原将该二价、双特异性抗体固定至固体表面。【专利说明】用于测定多价、多特异性分子的生物活性的基于SPR的桥接测 定法 本文报道了改进的用于测定多特异性、多价(例如双特异性、二价)分子的生物活 性的桥接测定法的设置，其中在低聚副产物的存在下测定法的特异性和稳定性增加。
技术介绍
用于测定单特异性抗体的生物活性的测定法是众所周知的。不同的测定法设置是 已知的，如，例如通过固定的抗原(直接或间接地固定于固相)捕获抗体和通过标记的抗化 抗体检测抗原-抗体复合体，或通过固定的抗体(直接或间接地固定于固相)捕获抗原和通 过结合抗原上不同的非重叠表位的标记的抗体检测抗体-抗原复合体。 生物活性测定法是根据测试系统的特异性的、功能性的生物反应测量测试物质的 生物活性的分析方法。可W使用基于动物的体内测定法、基于细胞的体外测定法或(受体） 结合测定法来评估生物活性。 表面等离子体共振(SPR)是一种公知的测定单特异性抗体的抗体-抗原相互作用 的技术。该技术可用于测定抗体对其各自抗原的结合亲和性。 在W0 2011/117329中报道了双特异性、二价抗VEGF/抗ANG2抗体。 在W0 2009/080251中报道了二价、双特异性抗体。在US 2011/0293613中报道了双 特异性抗体。在W0 2010/040508中报道了双特异性抗VEGF/抗ANG2抗体。Schaefer，W.，等人 (Proc.Natl. Acad. Sci.USA 108(2011)11187-11192)报道了免疫球蛋白结构域交叉用作生 产双特异性IgG抗体的一般方法。
技术实现思路
已经发现，使用如W上概述的一般原则而不考虑如本文报道的发现的测定生物活 性的测定法，对于多价、多特异性抗体(如二价，双特异性抗体）的"功能性"多聚体是敏感 的，即二聚体、Ξ聚体、四聚体和更高阶的聚集体，原因是基于亲合力的多聚体结合。 如本文所报道的一个方面是具有与其抗原相互作用的较小（较低）kD值(解离常 数)的多价、多特异性抗体的结合位点用于测定多价、多特异性抗体生物活性（即与抗原的 功能性结合)的(体外）用途，其中抗原将多特异性、多价抗体固定于固体表面。 在一个实施方案中，通过测定与抗原的(桥接)结合信号测定生物活性，多价、多特 异性抗体对于该抗原具有更大(更高）的Kd值(解离常数）。 在一个实施方案中，生物活性是结合亲和性。 在一个实施方案中，通过表面等离子体共振或化ISA测定(桥接)结合信号。 在一个实施方案中，多价、多特异性抗体选自二价、双特异性抗体，Ξ价、Ξ特异性 抗体，四价、四特异性抗体，Ξ价、双特异性抗体，和四价、Ξ特异性抗体。在一个实施方案 中，多价、多特异性抗体是二价、双特异性抗体。 如本文所报道的一个方面是二价、双特异性抗体与其第一和第二抗原的同时结合 在表面等离子体共振或化ISA方法中的用途，其中，第一抗原作为捕获试剂固定在固体表 面，和其中二价、双特异性抗体具有的与第一抗原相互作用的Kd值小于与第二抗原相互作 用的Kd值，用于降低在表面等离子体共振或ELISA方法中二价、双特异性抗体的功能性多聚 体形式的干扰。 在一个实施方案中，固体表面是表面等离子体共振忍片。 在一个实施方案中，第一抗原是二聚体或Ξ聚体或四聚体。 在一个实施方案中，功能性多聚体是功能性二聚体。 在一个优选的实施方案中，第一抗原是二聚体或Ξ聚体或四聚体和功能多聚体是 功能性二聚体。 在一个实施方案中，具有与其抗原相互作用更高的kD值的结合位点的Kd值，是具有 较小Kd值的二价、双特异性抗体的结合位点的Kd值的至少1.1倍高。 在一个实施方案中，Kd值是至少10倍高。 在一个实施方案中，Kd值是至少100倍高。 如本文所报道的一个方面是多价、多特异性抗体与其第一和第二抗原同时结合 (的桥接信号）用于多价、多特异性抗体的生物活性测定的（体外）用途，所述生物活性即与 抗原的功能性结合， 其中多价、多特异性抗体的生物活性从与其第二抗原得到的(桥接)结合信号中导 出， 其中与第二抗原的（桥接)结合信号通过表面等离子体共振或化ISA测定，其中第 一固定抗原作为在固体表面上的捕获试剂，和 其中多价、多特异性抗体具有的与第一抗原相互作用的Kd值(解离常数)小于与第 二抗原相互作用的Kd值(解离常数）。 在一个实施方案中，多价、多特异性抗体选自二价、双特异性抗体，Ξ价、Ξ特异性 抗体，四价、四特异性抗体，Ξ价、双特异性抗体，和四价、Ξ特异性抗体。在一个实施方案 中，多价、多特异性抗体是二价、双特异性抗体。 在一个实施方案中，通过表面等离子体共振测定(桥接)结合信号。 如本文所报道的一个方面是多价、多特异性抗体与其第一和第二抗原的同时结合 用于测定生物活性的（体外）用途，即多价、多特异性抗体与第一和第二抗原同时功能性结 合，W减少来自多价、多特异性抗体的多聚体形式的干扰， 由此多价、多特异性抗体的生物活性从与其第二抗原得到的(桥接)结合信号中导 出， 由此与第二抗原的（桥接)结合信号通过表面等离子体共振或化ISA测定，其中第 一固定抗原作为在固体表面上的捕获试剂，和 由此多价、多特异性抗体具有的与第一抗原相互作用的Kd值(解离常数)小于与第 二抗原相互作用的Kd值(解离常数）。 在一个实施方案中，多价、多特异性抗体选自二价、双特异性抗体，Ξ价、Ξ特异性 抗体，四价、四特异性抗体，Ξ价、双特异性抗体，和四价、Ξ特异性抗体。在一个实施方案 中，多价、多特异性抗体是二价、双特异性抗体。 在一个实施方案中，通过表面等离子体共振测定(桥接)结合信号。 在之前所有方面和实施方案的一个实施方案中，基于二价、双特异性抗体与其第 二抗原的结合测定多价、多特异性抗体与其第一和第二抗原同时结合的结合信号。 在之前所有方面和实施方案的一个实施方案中，固体表面是表面等离子体共振忍 片或多孔板的孔壁。 在之前所有方面和实施方案的一个实施方案中，具有与其抗原相互作用的更大 (更高)kD值(解离常数）的结合位点的Kd值(解离常数），是具有较小(较低化D值(解离常数） 的多价、多特异性抗体的结合位点的Kd值(解离常数)的至少1.1倍大(高）。在一个实施方案 中，Kd值(解离常数)是至少1.5倍大(高）。在一个实施方案中，Kd值(解离常数)是至少2倍大 (高）。在一个实施方案中，Kd值(解离常数)是至少10倍大(高）。在一个实施方案中，Kd值(解 离常数)是至少100倍大(高）。 在之前所有方面和实施方案的一个实施方案中，第一抗原是二聚体或Ξ聚体或四 聚体或容易聚集。 在之前所有方面和实施方案的一个实施方案中，功能性多聚体是功能性二聚体。 如本文所报道的一个方面是用于测定多价、多特异性抗体的生物活性的(体外)方 法，所述生物活性即与抗原的功能性结合，包括W下步骤： -测定多价、多特异性抗体与其第一和第二抗原同时结合的(桥接)结合信号， 由此多价、多特异性抗体的生物活性从与其第二抗原得到的(桥接)结合信号中导 出， 由此与第二抗原的（桥接)结合本文档来自技高网...

【技术保护点】
二价、双特异性抗体与其第一和第二抗原的同时结合在表面等离子体共振或ELISA方法中的用途，用于降低在表面等离子体共振或ELISA方法中二价、双特异性抗体的功能性多聚体形式的干扰，其中，第一抗原作为捕获试剂固定在固体表面，和其中二价、双特异性抗体具有的与第一抗原相互作用的KD值小于与第二抗原相互作用的KD值。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·帕帕季米特里乌，J·T·雷古拉，H·克腾伯格，J·莫莱肯，C·加斯纳，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH