防治霉浆菌感染的组合物制造技术

提供了作为抗霉浆菌的亚单位疫苗的活性成分的蛋白质及其制备的疫苗。所述疫苗含有P46、Tuf，或其组合的蛋白质，进一步还可包含MHP30、NrdFC，或其组合的蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】防治霉浆菌感染的组合物
本专利技术关于一种抗猪霉浆菌的疫苗，尤指一种抗猪霉浆菌的亚单位疫苗(SubunitVaccine)。
技术介绍
霉浆菌(Mycoplasmaspp.)是目前所知能在细胞外自行复制的最小细菌，其引发的猪霉浆菌肺炎虽然不会造成猪只的高死亡率，但会降低饲料换肉率、导致生长发育迟缓、造成发炎性反应及免疫抑制作用、及引起其它诸多细菌性病原的感染，因而使养猪业者蒙受严重的经济损失。目前对于猪霉浆菌肺炎的防治方式有三种，包括：药物投予、饲养管理及疫苗接种。由于抗生素对于猪肺炎霉浆菌的预防效果不佳，因此药物投予的策略仅限于治疗目的，难以达到预防的效果。此外，考虑到药物滥用可能引发更大规模的抗药性菌种的感染，采用药物投予不仅需要更多的规划，同时面临诸多极限。良好的饲养管理是防治猪霉浆菌感染的根本方法。优良的猪舍环境卫生质量及妥善的饲养管理有助于减少感染的发生。从另一方面来说，配合疫苗接种更可使整体的防疫工作更加完善。领域中现行使用的疫苗是以不活化死菌作为疫苗的活性成分。然而，因为霉浆菌为营养苛求性菌(fastidiousbacteria)而不容易以人工培养，造成霉浆菌疫苗的价格居高不下。为了降低霉浆菌疫苗的成本，学者不断研究以不同的策略来研发疫苗，包括：(1)减毒疫苗、(2)载体疫苗、(3)亚单位疫苗、及(4)DNA疫苗；其中，亚单位疫苗因具有容易生产及安全性高的优点，而最具应用潜力。目前已知部分可研制为猪霉浆菌亚单位疫苗的可能候选抗原，但截至今日，领域中仍尚未有研究报告完整地提出适用于猪霉浆菌亚单位疫苗的抗原。
技术实现思路
于是，本专利技术的一目的为提供适用于猪霉浆菌亚单位疫苗的抗原，并据以制得亚单位疫苗，以降低防疫成本。本专利技术的又一目的为组合本专利技术所得的适用于猪霉浆菌亚单位疫苗的抗原，以制得效果更优良的亚单位疫苗，提供防疫工作更多样化的选择。为达到上述目的，本专利技术提供一种防治霉浆菌感染的蛋白质，其具有SEQIDNO：01、SEQIDNO：02、或其组合所示的氨基酸序列。本专利技术另提供一种防治霉浆菌感染的组合物，其包含：第一活性成分，其包含P46、Tuf、或其组合的蛋白质；及生物可接受的佐剂。较佳地，前述第一活性成分具有SEQIDNO：01、SEQIDNO：02、或其组合所示的氨基酸序列。较佳地，前述组合物进一步包含第二活性成分，其包含MHP30、NrdFC、或其组合的蛋白质。较佳地，前述第二活性成分具有SEQIDNO：03、SEQIDNO：04、或其组合所示的氨基酸序列。较佳地，前述第一活性成分和/或前述第二活性成分的浓度为20至2000μg/mL，其是以前述组合物的总体积为基础。本专利技术又提供一种防治霉浆菌感染的组合物，其包含：活性成分，其包含下列群组的蛋白质的至少两种：P46、Tuf、MHP30、及NrdFC；及生物可接受的佐剂。较佳地，前述活性成分为P46、Tuf、MHP30、及NrdFC。较佳地，前述活性成分具有下列群组的氨基酸序列的至少两种：SEQIDNO：01、SEQIDNO：02、SEQIDNO：03、及SEQIDNO：04。较佳地，前述活性成分具有SEQIDNO：01、SEQIDNO：02、SEQIDNO：03、及SEQIDNO：04所示的氨基酸序列。较佳地，前述活性成分的浓度为20至2000μg/mL，其是以前述组合物的总体积为基础。较佳地，前述生物可接受的佐剂为：弗氏完全或不完全佐剂、铝胶、表面活性剂、聚阴离子、肽、油乳液或其组合。较佳地，前述组合物进一步包含生物可接受的添加剂。较佳地，前述生物可接受的添加剂为溶剂、安定剂、稀释剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂、等张剂、吸收延缓剂或其组合。本专利技术再提供一种表达载体，其是用于制备前述组合物中的活性成分，前述表达载体包含质粒；其中前述质粒包含：核苷酸序列，其是选自下列群组的核苷酸序列中的至少一个：SEQIDNO：05、SEQIDNO：06、SEQIDNO：07、及SEQIDNO：08；融合伴侣基因，其是选自于由大肠杆菌的MsyB基因、大肠杆菌的YjgD基因、大肠杆菌的GroS17基因、枯草杆菌的GroES基因、酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillusacidocaldarius)的TrxA基因、啤酒酵母菌的SUMO基因、及透明颤菌(Vitreoscillasp.)的Vgb基因所组成的群组；及调控元件。较佳地，前述调控元件包含启动子及核糖体结合部位。较佳地，前述质粒为pET-MSY、pET-YjgD、pET-GroS17、pET-GroES、pET-TrxA、pET-SUMO、或pET-Vgb。较佳地，当前述核苷酸序列选自下列群组的核苷酸序列中的至少一个：SEQIDNO：05、SEQIDNO：06、及SEQIDNO：08时，前述融合伴侣基因为大肠杆菌的MsyB基因。较佳地，当前述核苷酸序列为SEQIDNO：07时，前述融合伴侣基因选自于由大肠杆菌的YjgD基因、大肠杆菌的GroS17基因、枯草杆菌的GroES基因、酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillusacidocaldarius)的TrxA基因、啤酒酵母菌的SUMO基因、及透明颤菌(Vitreoscillasp.)的Vgb基因所组成的群组。较佳地，前述表达载体是利用于大肠杆菌表达系统。本专利技术又提供一种生产可溶性抗原的方法，其包含使用前述表达载体；其中前述抗原为霉浆菌的P46、Tuf、MHP30、或NrdFC。综上所述，本专利技术关于用于防治猪霉浆菌感染的抗原、组合物、及用于制备该抗原的质粒。本专利技术的揭露内容不仅提供猪霉浆菌防疫工作的新选择，更揭示组合两种以上抗原的“鸡尾酒”亚单位疫苗(即，含有两种以上的抗原作为活性成分)具有更加强的免疫诱发效果。此外，本专利技术的研究成果并指出了特别合适用于辅助抗猪霉浆菌的抗原于表达系统中表达的融合伴侣基因，有助于提升疫苗制备上的产能。附图说明图1为一蛋白质电泳图谱，其显示使用不同的融合伴侣对于所产出的MHP3的可溶性影响。M行：蛋白质marker(PageRulerTMpretainedproteinladder；Fermentas，USA)；第1行：E.coliBL21(DE3)(pET-YjgD-MHP30)可溶性蛋白质；第2行：E.coliBL21(DE3)(pET-SUMO-MHP30)可溶性蛋白质；第3行：E.coliBL21(DE3)(pET-GroS17-MHP30)可溶性蛋白质；第4行：E.coliBL21(DE3)(pET-GroES-MHP30)可溶性蛋白质；第5行：E.coliBL21(DE3)(pET-D-MHP30)可溶性蛋白质；第6行：E.coliBL21(DE3)(pET-MsyB-MHP30)可溶性蛋白质；第7行：E.coliBL21(DE3)(pET-Vgb-MHP30)可溶性蛋白质；第8行：E.coliBL21(DE3)(pET-TrxA-MHP30)可溶性蛋白质。图2为一蛋白质电泳图谱，其显示使用不同的融合伴侣对于所产出的P46、NrdFC及Tuf的可溶性影响。M行：蛋白质marker(PageRulerTMpretainedproteinladder；Fermentas，USA)；第1行：本文档来自技高网...

【技术保护点】
PCT国内申请，权利要求书已公开。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种防治猪霉浆菌感染的组合物，其包含：第一活性成分，其包含Tuf及生物可接受的佐剂；其中Tuf的氨基酸序列为SEQIDNO：02所示。2.如权利要求1所述的组合物，其进一步包含第二活性成分，其包含P46、MHP30、NrdFC、或其组合的蛋白质；其中前述P46的氨基酸序列为SEQIDNO：01所示；前述MHP30的氨基酸序列为SEQIDNO：03所示；NrdFC的氨基酸序列为SEQIDNO：04所示。3.如权利要求1所述的组合物，其中前述第一活性成分的浓度为20至2000μg/mL，其是以前述组合物的总体积为基础。4.如权利要求2所述的组合物，其中前述第一活性成分及/或前述第二活性成分的浓度为20至2000μg/mL，其是以前述组合物的总体积为基础。5.如权利要求1或2所述的组合物，其中前述生物可接受的佐剂为：弗氏完全或不完全佐剂、铝胶、表面活性剂、聚阴离子、肽、油乳液或其组合。6.如权利要求1或2所述的组合物，其进一步包含生物可接受的添加剂。7.如权利要求6所述的组合物，其中前述生物可接受的添加剂为溶剂、安定剂、稀释剂、防腐剂、抗菌剂、等张剂、吸收延缓剂或其组合。8.如权利要求2所述的组合物，其包含P46、Tuf、MHP30、及NrdFC。9.一种生产如权利要求1至8中任一项所述的组合物中的活性成分的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：林俊宏，王志鹏，陈正文，方健宇，谢明伟，杨平政，
申请(专利权)人：财团法人农业科技研究院，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71