用于治疗和/或预防癌症的沙门氏菌菌株制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗和/或预防癌症复发/发展的药物组合物，其包含肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体。优选地，所述癌症为膀胱癌。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含肠道沙门氏菌伤寒血清变型（Salmonellaentericaserovar typhi)菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力 (non-viable)的减毒非重组突变体的药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症。优选地，所 述癌症为膀胱癌。
技术介绍
在欧洲和美国，膀胱癌是男性中排第四位的最常见的癌症病因。3/4的肿瘤被诊断 为非肌层浸润性膀胱癌（匪IBC)并局限于膀胱粘膜中。根据具体的肿瘤阶段和级别特征， 使用卡介苗（BCG)的膀胱内（ives)免疫疗法部分地限制了这些肿瘤在经尿道内窥镜切除 手术后复发和可能发展的高的倾向。BCG减少膀胱癌的复发和发展。但是，在接近90 %的 患者中出现与BCG细菌感染膀胱组织并可能扩散的能力或所诱导的强炎症相关的副作用， 范围从膀胱炎到败血症和死亡。 BCG的精确作用机理仍然未知。但是，已证明在膀胱内滴注后BCG感染尿道 上皮细胞和癌细胞并被其内化，引起导致抗肿瘤应答的炎性细胞和细胞因子的大量涌 入（综述参见Askeland,Newton, 0'Donnell, &Luo, 2012)。在临床试验或动物模型中 对一些策略进行了测试，所述策略例如将细胞因子与BCG结合，降低BCG的剂量，使用 分枝杆菌细胞壁替代BCG，或使用toll样受体（TLR)激动剂刺激免疫系统（综述参见 Kresowik&Griffith，2009)，但是迄今为止BCG仍是减少NMIBC复发/发展的最佳选择。 两项使用ivesTLR激动剂的研究已在MB49原位膀胱癌模型中证明了治疗潜力，第一项 研究证明CpG--- 种TLR9 激动剂--优于BCG疗法（Mangsbo,Nanalga,Essand,Lo skog, &Totterman, 2008)，第二项研究证明在该模型中R-837具有抗肿瘤作用（Hayashi etal.，2010)。类似地，Seow等人最近也已报道了ives乳杆菌的抗肿瘤作用（Seowet al. , 2010) 〇 已进行了大量尝试，以开发包含减毒重组细菌和/或减毒肿瘤靶向细菌（特别 是减毒的伤寒沙门氏菌（Salmonellatyphi))的组合物，用于抑制实体瘤癌症的生长或 减小其体积，例如W003/063593(VionPharmaceuticals)、US2007/0298012 (I.King&L. -M. Zheng)、W02009/098246(AeternaZentarisGmbH)、W02006/076678 (Univ.JohnHopkins)， 但是这些尝试都未能在人类临床试验中获得可持续的功效（Chorobik,Czaplicki,Ossysek ,&Bereta, 2013)〇 基于这些原因，仍需要提供比BCG更安全、更有效的组合物以治疗癌症，特别是膀 胱癌。
技术实现思路
本专利技术涉及包含肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/ 或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体的药物组合物，其用于治 疗和/或预防膀胱癌。 本专利技术还提供了用于诱导癌细胞中的细胞凋亡的方法，所述方法包括给予包含肠 道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变 型菌株的无活力的减毒非重组突变体的药物组合物。 另一目的涉及治疗和/或预防膀胱癌的方法，所述方法包括给予包含肠道沙门 氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株 的无活力的减毒非重组突变体的药物组合物，其中所述肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的 活的或无活力的减毒非重组突变体不在肿瘤中存留，并且选自Ty21a、CVD908-htrA、CVD 909、Ty800、M01ZH09、x9633、x9639、x9640 和x8444。 本专利技术的其他目的是提供诱导癌细胞中的细胞凋亡的方法，所述方法包括给予包 含肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血 清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体的药物组合物。 还提供了肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道 沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体用于制备用于治疗和/或预防 膀胱癌的药物的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的或无活力 的减毒非重组突变体不在肿瘤中存留，并且选自Ty21a、CVD908-htrA、CVD909、Ty800、 M01ZH09、x9633、x9639、x9640和x8444。【附图说明】 图1 :BCG或Ty21a处理时原位膀胱肿瘤消退的比较。在22%的EtOH预处理之后， 用200' 000个MB49-luc细胞对10-20只雌性C57BL/6小鼠组进行ives滴注（第0天）。 使用能够检测生物发光的体内成像系统Xenogen监测肿瘤生长，在第8天荷瘤小鼠的代表 性结果如（A)所示。在第1、8、15和22天，使用不同剂量的BCG或Ty21a对小鼠组进行ives 处理，同时一组小鼠保持未处理。所述处理的范围从Ty21a初始胶囊或BCG小瓶的1/10 (B)， 至IJ1/100和1/1000 (C)。示出了每一组的随时间的小鼠存活百分数。经校正的对数秩检验之 后的显著性差异表示为：在B中*ρ〈0·025或*〈0·0125,#ρ〈0·0025,在C中*#ρ〈0·00025。 图2 :Ty21a或BCG处理后细菌从膀胱的回收。在第0天使用Ty21a对7组小鼠 (每组4只）进行ives激发（平均值土SEM1. 3X10s±4. 3X107CFU/小鼠）（A)。在第-1 天使用200' 000个MB49-luc细胞对6组小鼠进行ives激发，并在24h之后，在第0天用 Ty21a处理（平均值土SEM3· 9X10s±2. 4X10SCFU/ 小鼠）（B)或用BCG(2-8X107CFU/ 小 鼠）（C)处理。在感染后的不同时间点处死小鼠。处理膀胱并将其置于盘中，如材料和方法 中所述。数据被表示为CFU数/组织。水平线代表平均应答。 图3 :单剂量Ty21a之后健康膀胱中的先天和适应性免疫应答的特征。在第0天使 用Ty21a(平均值土SEM1. 3X10s±4. 3X107CFU/小鼠）对小鼠组（每组5只）进行ives 激发，并在处理后的不同时间点处死小鼠。增加一组4只首次用于实验的小鼠（nalive mouse)。回收膀胱细胞，进行流式细胞术染色。使用aquadead试剂盒排除死细胞。示出 了先天免疫细胞（A):嗜中性粒细胞、NK、巨噬细胞和DC's，以及适应性免疫细胞（B) :CD4 和⑶8T细胞的百分数。水平线代表平均百分数。在单因素Anova、Dunnet多重比较检验 之后表示出不同时间点和首次用于实验的小鼠之间的显著性差异，*p〈〇.05。 图4 :单剂量Ty21a之后健康膀胱中的先天和适应性免疫应答的特征。在第0天 使用200' 000个MB49-luc细胞对小鼠组（每组4至10只）进行ives激发，并在第1、8、 15和22天用PBS或1/10的BCG或Ty21a处理。在不同本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物组合物，其包含肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的减毒非重组突变体和/或肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的无活力的减毒非重组突变体，用于治疗和/或预防膀胱癌，其特征在于，所述肠道沙门氏菌伤寒血清变型菌株的活的和/或无活力的减毒非重组突变体不在肿瘤中存留，其选自Ty21a、CVD 908‑htrA、CVD 909、Ty800、M01ZH09、χ9633、χ9639、χ9640和χ8444。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·纳德利哈弗里格，P·济奇林斯基，S·多明戈斯佩雷拉，
申请(专利权)人：佛多斯大学医学研究中心CHUV，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH