本发明专利技术公开了一种联合应用AMF与PGPR菌剂进行柑橘容器菌根苗栽培的方法，该方法步骤包括制备AMF菌根接种体、制备PGPR菌剂、育苗土消毒、枳种子催芽、播种与接种。本发明专利技术设计的柑橘容器菌根苗栽培方法，其能够提高柑橘根系的菌根侵染率，更好的活化营养土矿质营养，促进柑橘容器苗对养分和水分的吸收利用，培育出抗逆性和成活率更高的菌根容器苗，有利于工厂化大批量容器苗的整齐快速的生长，缩短育苗期，并能使橘树终身受益菌根促生效应，减少化学肥料在容器育苗中的施用量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及柑橘苗木栽培技术，具体涉及联合应用AMF与PGPR菌剂进行柑橘容器 菌根苗栽培的方法。
技术介绍
丛枝菌根真菌（AMF)几乎存在于所有生态类型土壤中，在自然界中分布极其广泛， 其能侵染80%的陆生高等植物形成互惠共生体。经研究表明，AMF真菌能促进宿主植物对 养分和水分的吸收，提高宿主植物对多种生物和非生物胁迫的抗性；另外，在生物修复退化 土壤、改良土壤结构、减轻土壤污染、保护和利用资源等方面也具有不可替代的重要作用。 而根围促生细菌（PGPR)是根际土壤微生态中的一类重要的有益微生物成员。 研究表明，巨大芽孢杆菌（ifeciWiAs挪识terii/a?)与胶质类芽孢杆菌（ 作为微生物肥料中两类经常应用的PGPR，能够促进土壤难溶性磷、钾等矿 物质元素的释放，近年来，通过其改善植物营养吸收，减少化学肥料施用的研究逐渐成为了 发展可持续农业的热点。 在目前，柑橘砧木苗通常通过种子繁育，传统的露地育苗设施环境调控能力差，出 苗率偏低、偏慢，容易受病虫害感染，而且在自然土壤中育苗，不同种类的大量微生物常与 AMF竞争，从而抑制AMF对砧木苗根系的大量侵染。因此，露地繁育的柑橘砧木苗只带有自 然的、较少的菌根，严重消弱了菌根共生体对柑橘吸收利用营养及抗病性的有益贡献。 而相比较露地育苗，柑橘容器育苗能够培育出高质量苗木，近年来在全国柑橘容 器育苗中被大量采用。理论上来说，若在育苗伊始就对苗木根系接种上高效的AMF菌种，批 量化生产优质柑橘容器菌根苗，可显著提高柑橘幼苗对基质养分的利用吸收，促进苗木快 速整齐生长，缩短育苗周期，并提高苗木定植后的抗逆性和抗病性，缓解柑橘连作障碍，而 且可使橘树终生受益。但经多年的研究表明，单一微生物的促生长作用效率普遍偏低，无法 满足实际当中的大批量育苗需要。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种联合应用AMF与PGPR菌剂进行柑橘容 器菌根苗栽培的方法，其能够提高柑橘根系的菌根侵染率，更好的活化营养土矿质营养，促 进柑橘容器苗对养分和水分的吸收利用，培育出抗逆性和成活率更高的菌根容器苗，有利 于工厂化大批量容器苗的整齐快速的生长，缩短育苗期，并能使橘树终身受益菌根促生效 应，减少化学肥料在容器育苗中的施用量。 为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案： 一种联合应用AMF与PGPR菌剂进行柑橘容器菌根苗栽培的方法，其特征在于：包括如 下几个步骤： a、制备AMF菌根接种体：选细河沙、橘园土、草炭按体积比2:1:1混勾，装布袋经121°C 湿热灭菌2小时2次，中间间隔24小时，放置1~2周后作为AMF菌剂培养基质；将含有AMF 孢子的菌剂加入上述培养基质中并播种三叶草，在塑料温室自然光照条件下培养，培养3~4 个月后收获基质和根段，保证根段侵染率在70%以上，侵染强度在40%以上；且风干后测定 AMF孢子密度，保证每克接种基质至少含25个成熟健康孢子，作为标准接种剂； b、 制备PGPR菌剂：将浓度为10s CFU/ml的PGPR种子液Iml接种于液体培养基中，于 30摄氏度下180转/分钟摇瓶培养36小时后稀释至10s CFU/ml，作为标准接种剂； c、 育苗土消毒：将育苗土装布袋湿热灭菌2小时2次，消毒除去杂菌，中间间隔24小 时，放置1~2周后作为柑橘容器育苗土；所述育苗土为橘园普通土壤添加堆怄发酵、充分腐 熟并以体积比7 :3的比例添加菌糠；所述菌糠为金针菇、平菇、杏鲍菇菌糠中的一种或多 种； d. 枳种子催芽：选择上一年采集优质饱满枳种子，用10%双氧水表面消毒10分钟，蒸 馏水冲洗数次后，置于底部铺有湿润棉层的托盘中，于27°C电热恒温隔水式培养箱中暗培 养催芽； e. 播种与接种：先将萌发的枳种子在浓度为10s CFU/ml的PGPR液体培养基中浸泡 30分钟，在育苗钵中装入消毒育苗土至育苗钵的3/4处，浇透水压出孔穴，而后将AMF菌根 接种体25-35克撒入孔穴，并以1株/钵将浸泡过的枳种子根系平直的播种于育苗钵孔穴 中，并灌根移入5ml的PGPR菌剂，再覆盖1-1. 5 cm育苗土。 进一步的，上述AMF为根内球囊霉或摩西球囊霉 iFunneliforeis mosseae、。 进一步的，上述PGPR为巨大芽孢杆菌，所述液体培养基含有1. 5%淀粉、0. 5%酵母 粉、0· 05% K2HPO4 · 3Η20、0· 05% NaCl、0. 05% MgSO4 · 7H20 和 0· 01% CaCO3,液体培养基的 pH 为 7. 0〇 进一步的，上述PGPR为胶质类芽孢杆菌，其液体培养基含有0.5%牛肉浸膏、1% 蛋白胨、0· 1% NaCl、0. 1% MgSO4 · 7Η20、0· 05% K2HPO4 · 3H20 和 0· 01% CaCO3,液体培养基的 pH 为 7. 0。 进一步的，上述菌糠为粪肥菌糠，其通过清洁菌糠加入稀人畜粪尿充分混匀，用稀 泥封顶，堆体温度达到50°C，自然发酵2个月左右，当堆肥温度低于32°C，达到黑、烂即可。 进一步的，上述培育土中添加过磷酸钙肥料。 进一步的，上述育苗钵在播种前先清洗干净，用0. 1%高锰酸钾溶液浸泡30分钟后 晾干备用。 进一步的，上述播完种的育苗钵放置于温室培养架上培育柑橘砧木苗，每隔7天 浇施200ml自来水/钵，温室搭建遮阳网，遮阳率70%，温室内温度为28-34°C，相对湿度80% 以上，进行常规管理，注意日常检查，防范病虫害。 本专利技术的优点在于： 1.在容器育苗营养土中添加高效促生长的AMF菌根接种体，能够比未接种容器育苗培 育出抗逆性和成活率更高的菌根容器苗，接种技术简单易行，有利于工厂化大批量容器苗 的整齐快速的生长，缩短育苗期，并能使橘树终身受益菌根促生效应。 2.在柑橘容器苗根际联合接种AMF与PGPR能够提高柑橘根系的菌根侵染率，更好 的活化营养土矿质营养，促进柑橘容器苗对养分和水分的吸收利用，最终减少化学肥料在 容器育苗中的施用量。【具体实施方式】 本专利技术所用的AMF为根内球囊霉i/7irarai/ice>6·)或摩西球囊霉 ffias^eae),分别简称为 Ri 和 Gm。 本专利技术所用的PGPR为胶质类芽孢杆菌（)或巨大 芽抱杆菌aze^ateri·)，分别简称为Pa和Bm。 -种联合应用AMF与PGPR菌剂进行柑橘容器菌根苗栽培的方法，包括如下几个步 骤： 1、制备AMF菌根接种体：选细河沙、橘园土、草炭按体积比2:1:1混勾，装布袋经121°C 湿热灭菌2小时2次，中间间隔24小时，放置1~2周后作为AMF菌剂培养基质；将含有AMF 孢子的菌剂加入上述培养基质中并播种三叶草，在塑料温室自然光照条件下培养，培养3~4 个月后收获基质和根段，保证根段侵染率在70%以上，侵染强度在40%以上；且风干后测定 AMF孢子密度，保证每克接种基质至少含25个成熟健康孢子。 2、制备PGPR菌剂：将浓度为10s CFU/ml的PGPR种子液Iml接种于液体培养 基中，于30摄氏度下180转/分钟摇瓶培养36小时后稀释至10s CFU/ml，作为标准接种 剂。在此，当PGPR为巨大芽孢杆菌时，以上液体培养基含有1. 5%淀粉、0本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种联合应用AMF与PGPR菌剂进行柑橘容器菌根苗栽培的方法，其特征在于：包括如下几个步骤：a、制备AMF菌根接种体：选细河沙、橘园土、草炭按体积比2:1:1混匀，装布袋经121℃湿热灭菌2小时2次，中间间隔24小时，放置1~2周后作为AMF菌剂培养基质；将含有AMF孢子的菌剂加入上述培养基质中并播种三叶草，在塑料温室自然光照条件下培养，培养3~4个月后收获基质和根段，保证根段侵染率在70%以上，侵染强度在40%以上；且风干后测定AMF孢子密度，保证每克接种基质至少含25个成熟健康孢子；b、制备PGPR菌剂：将浓度为108 CFU/ml的PGPR 种子液1ml接种于液体培养基中，于30摄氏度下180转/分钟摇瓶培养36小时后稀释至108 CFU/ml，作为标准接种剂；c、育苗土消毒：将育苗土装布袋湿热灭菌2小时2次，消毒除去杂菌，中间间隔24小时，放置1~2周后作为柑橘容器育苗土；所述育苗土为橘园普通土壤添加堆沤发酵、充分腐熟并以体积比7：3的比例添加菌糠；所述菌糠为金针菇、平菇、杏鲍菇菌糠中的一种或多种；d. 枳种子催芽：选择上一年采集优质饱满枳种子，用10%双氧水表面消毒10分钟，蒸馏水冲洗数次后，置于底部铺有湿润棉层的托盘中，于27℃电热恒温隔水式培养箱中暗培养催芽；e. 播种与接种：先将萌发的枳种子在浓度为108 CFU/ml的PGPR 液体培养基中浸泡30分钟，在育苗钵中装入消毒育苗土至育苗钵的3/4处，浇透水压出孔穴，而后将AMF菌根接种体25‑35克撒入孔穴，并以1株/钵将浸泡过的枳种子根系平直的播种于育苗钵孔穴中，并灌根移入5ml 的PGPR菌剂，再覆盖1‑1.5 cm育苗土。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王鹏，王引，吴韶辉，温明霞，石学根，
申请(专利权)人：浙江省柑桔研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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