本发明专利技术涉及一种复合式牙科种植体。所涉及的复合式种植体包括中心种植体，所述的中心种植体外包覆有antimiR-138修饰的BMSC膜片。可选的，所述中心种植体为微弧氧化纯钛种植体、酸蚀喷砂种纯钛植体或羟基磷灰石等离子喷涂纯钛种植体。本发明专利技术的复合种植体不但具有成骨效应，而且发明专利技术人意外发现其同时具有显著的成血管效应，即该复合种植体在植入体内后可协同发挥促成骨和成血管效应。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及牙科种植体，具体涉及一种复合式牙科种植体.
技术介绍
随着种植技术发展，牙科种植体已广泛应用于临床的牙列缺损及缺失病人的修 复。但是对于一些骨质疏松症、糖尿病、以及放疗之后的患者，由于存在成骨活性下降，血供 较差，破骨活跃等一系列问题，因此这些疾病往往伴随着种植术后的骨愈合不良、失败率较 高等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的一方面是提供一种复合式种植体，该复合式种植体包括中心种植 体，所述的中心种植体外包覆有antimiR-138修饰的BMSC膜片。 可选的，所述中心种植体为微弧氧化纯钛种植体、酸蚀+喷砂种纯钛植体或羟基 磷灰石等离子喷涂纯钛种植体。 可选的，所述微弧氧化的电解液溶质包括P _甘油磷酸钠和醋酸钙。 本专利技术的复合种植体不但具有成骨效应，而且专利技术人意外发现其同时具有显著的 成血管效应，即该复合种植体在植入体内后可协同发挥促成骨和成血管效应。【附图说明】 图1为微弧氧化钛种植体及BMSC膜片/种植体复合物的扫描电镜观察；其 中：antimiR-138为实验组：antimiR-138修饰的BMSC膜片/微弧氧化钛种植体复合物； antimiR-control为阴性对照组：antimiR_control修饰的BMSC膜片/种植体复合物；No agent为空白对照组：未经转染修饰的BMSC膜片/种植体复合物。 图2为体外成骨诱导3天，7天后对各组膜片种植体复合物中内源性miR-138 含量的miRNA-PCR检测，林，林*p〈0. 01，0? 001表示与空白对照组比有统计学差异； #，###p〈〇. 05, 0. 001表示与阴性对照组比有统计学差异。 图3为体外成骨诱导7天后，各组成骨相关蛋白ALP, OCN和RUNX2的westernblot 分析，***p〈0. 001表示与空白对照组比有统计学差异。 图4为体外成骨诱导7天后，各组成血管相关蛋白OSX和VEGF的westernblot分 析，**，***p〈〇. 01，0. 001表示与空白对照组比有统计学差异。 图5为antimiR-138修饰的BMSC膜片/微弧氧化钛种植体复合物裸鼠体内移植8 周的HE，MT染色观察，其中NB代表新生骨，CT代表纤维结缔组织，黑色箭头指示骨细胞， 黄色箭头指示成骨细胞，红色星号代表新生血管。 图6为antimiR-138修饰的BMSC膜片/微弧氧化钛种植体复合物裸鼠体内移植 8周后，各组成骨和成血管相关蛋白的免疫荧光染色分析。【具体实施方式】 以下是专利技术人提供的具体实施例，以对本专利技术的技术方案作进一步解释说明。 实施例1 : 步骤一，微弧氧化（MO)纯钛种植体的制备 纯钛种植体基体抛光后依次经丙酮、无水乙醇和去离子水超声清洗并干燥； 采用微弧氧化工艺在种植体基体表面制备微弧氧化涂层，再依次用丙酮、无水乙 醇和去离子水超声清洗并吹干，最后将试样密封包装后，c〇60辐照消毒；其中微弧氧化工 艺中，电解液溶质由〇. 02-0. 04M P -甘油磷酸钠和0. 2M醋酸钙配制，溶剂为去离子水；反应 条件为300-450V电压、100-120HZ电源频率，20% -25%占空比，处理时间为5-10min。 步骤二，antimiR-138修饰的BMSC膜片的构建 具体方法可参见公开发表的文章 Feasibility of non-viral oligonucleotide delivery to the cell sheets and enhanced osteogenesis of the mesenchymal stem cell sheets by antimiR-138. Biomaterials, 2014；35:7734-7749. 步骤三，antimiR-138修饰的BMSC膜片/微弧氧化钛种植体复合物的构建 待膜片成熟后，利用antimiR-138修饰的BMSC膜片包覆微弧氧化钛种植体构建 antimiR-138修饰的BMSC膜片/种植体复合体。 专利技术人对该实施例的复合式种植体进行了以下相关实验： (1)膜片/种植体复合物的扫描电镜观察 将膜片/种植体复合物继续培养48小时，常规脱水后喷金，场发射扫描电镜观察 膜片/种植体复合物的微观形态。 (2) antimiR-138修饰的BMSC膜片/种植体复合物的miRNA基因沉默的鉴定 膜片与种植体复合后体外成骨诱导3天、7天，并采用miRNA-qPCR的方法对各组内 源性miR-138的沉默效应进行检测。 (3)成骨、成血管相关蛋白的westernblot检测 膜片成骨诱导7d后终止培养，PBS清洗3次后进行总蛋白的提取，采用Western blot方法分析成骨、成血管相关蛋白（RUNX2，ALP，0CN，0SX，VEGF)的表达。 (4) antimiR-138修饰的BMSC膜片/微弧氧化钛种植体复合物的体内成骨实验 将三组BMSC膜片/种植体复合体植入裸鼠体内，8周后取材，并对移植 复合物进行常规组织切片，和Masson三色染色，以及成骨、成血管相关蛋白 (RUNX2, 0CN，0SX，VEGF，CD31)的免疫荧光分析。 实验结果： (1)种植体试样以及BMSC膜片/种植体复合物的扫描电镜观察 图1所示，种植体试样经过微弧氧化（MO)处理后，其表面可形成如火山口样，均 匀分布的多孔状结构。膜片与种植体复合后48h的扫描电镜观察显示：大量胶原纤维与富 含胞外基质的细胞相互连接形成一层网状结构，并紧密贴附在种植体微弧氧化的多孔结构 表面。高倍可见细胞形态伸展，并有大量的伪足伸出嵌合在丰富的胞外基质中。且实验组 与对照组膜片/种植体复合物形态结构无明显差异。 (2) BMSC膜片/微弧氧化钛种植体复合物内源性miR-138的基因沉默的鉴定 图2所示，膜片与种植体复合后体外成骨诱导3天、7天，并对其内源性miR-138的 含量应进行检测，结果如图2.所示，成骨诱导3天时，相对与空白对照组，转染复合物对实 验组膜片中miR-138的抑制率为94. 7%，成骨诱导7天时其抑制率仍保持在53. 5%，即转 染复合物对膜片种植体复合物中内源性miR-138的抑制具有长时的效应。 (3)成骨、成血管相关蛋白的表达 成骨诱导7天后，对各组成骨、成血管相关蛋白的表达进行westernblot分析，得 到图3、图4的结果，实验组成骨、成血管相关蛋白（冊似2，1^，0^03乂和￥￡6?)的表达显 著高于两对照组。 (4) antimiR-138修饰的BMSC膜片/微弧氧化钛种植体复合物的体内移植结果 如图5所示，8周时，三组的种植体表面均可见血管组织再生，且未见明显的炎症 反应。实验组种植体周围可观察到广泛致密且矿化良好的成熟骨组织（如图5中的MT染 色），新骨内可观察到典型的骨陷窝、骨细胞和骨衬里细胞并伴有血管生成，其骨生成方式 主要以软骨内骨化为主。而对照两组种植体周围的新骨生成量明显少于实验组，且新骨矿 化程度不高，同时仍伴有一些纤维结缔组织修复。 对8周取材的移植物的成骨、成血管相关蛋白RUNX2, OCN，OSX，VEGF，⑶31进行免 疫荧光染色，结果如图6所示，在新骨形成区域，实验组成骨相关蛋白OCN、RUNX2、O本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种复合式牙科种植体，其特征在于，该复合式种植体包括中心种植体，所述的中心种植体外包覆有antimiR‑138修饰的BMSC膜片。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：闫钧，张玉梅，赵领洲，常蓓，宋文，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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