一种鉴定人类个体、人源细胞株性别的引物、试剂盒和方法技术

本发明专利技术提供了用于鉴定人类个体、人源细胞株性别的引物对，本发明专利技术还提供了前述引物对的用途，以及鉴定人类个体、人源细胞株性别的试剂盒及鉴定方法。利用本发明专利技术提供的引物、试剂盒和方法，可以准确鉴定人类个体、人源细胞株性别，有效降低女性样本假男性现象，操作简便、灵敏度高、特异性强，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定人类个体、人源细胞株性别的引物、试剂盒和方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种鉴定人类个体、人源细胞株性别的引物、试剂盒和方法。
技术介绍
人类个体的性别鉴定在法医学判定、考古研究、运动员比赛等多个领域意义重大，另外，在科学探索领域，不同性别来源的细胞在许多细胞特性方面的表现也不一致，比如QiuP发现[QiuP,etal.Genderdependedpotentialityofdifferentiationofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsintooocyte-Likecellsinvitro.CellBiochemFunct.2013,31(5):365-373]：同样是人源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)，来自女性个体的hUC-MSCs在向雌性生殖细胞诱导分化时，相对于来自男性个体的hUC-MSCs，表达雌性生殖分化的标志基因更快、形成的类卵细胞个体更大、培养上清液中雌激素的产生量更多；Ghasemzadeh-HasankolaeiM的研究[Ghasemzadeh-HasankolaeiMetal.Maleandfemaleratbonemarrow-derivedmesenchymalstemcellsaredifferentintermsoftheexpressionofgermcellspecificgenes.AnatSciInt.2015,90(3):187-196]表明：来自女性个体的间充质干细胞更趋向于向女性生殖细胞分化，而来自男性个体的间充质干细胞更趋向于向男性生殖细胞分化；我们研究组在实验中也发现：来自不同性别个体的hUC-MSCs生长速率存在差异。因此，为了全面认识个体特性、促进科学探索，性别鉴定至关重要。利用PCR技术进行性别鉴定是目前应用最广泛的方法，包括普通PCR法、巢式PCR法、荧光定量PCR法。其中，荧光定量PCR方法(qPCR)因其简便、直观、灵敏度更高，具有广阔的应用前景。上述检测方法均是通过检测样本中是否含有Y染色体上片段来判断男女性别，由此带来一个突出的问题，即操作过程中女性样本可能污染少量男性DNA而导致假男性，影响判断结果的准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可准确鉴定人类个体、人源细胞株性别的引物、试剂盒和方法。本专利技术提供了SEQIDNO：1-2所示的引物对或SEQIDNO：3-4所示的引物对。本专利技术还提供了SEQIDNO：1-2所示的引物对1和SEQIDNO：3-4所示的引物对2在鉴别人类个体、人源细胞株性别中的用途。本专利技术还提供了SEQIDNO：1-2所示的引物对1和SEQIDNO：3-4所示的引物对2在制备鉴别人类个体、人源细胞株性别的试剂中的用途。本专利技术鉴定人类个体、人源细胞株性别的试剂盒，包含SEQIDNO：1-2所示的引物对1和SEQIDNO：3-4所示的引物对2，用于分别扩增NROB1基因和Sry基因。本专利技术提供了上述试剂盒在鉴定人类个体、人源细胞株性别中的用途。本专利技术鉴定人类个体、人源细胞株性别的方法，包括如下步骤：a、提取待检样本的DNA；b、以待检样本的DNA为模板，用SEQIDNO：1-2所示的引物对1和SEQIDNO：3-4所示的引物对2分别进行定量PCR扩增NROB1和Sry基因；c、结果分析：对扩增结果进行分析，根据NROB1、Sry基因扩增的CT值，计算待检样本中NROB1、Sry基因的相对表达量比值NROB1/Sry：若比值大于10为女性，比值小于10为男性。CT值：英文Cyclethreshold，中文名为循环阈值，含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数，CT值与qPCR反应体系的模板初始量呈负相关。其中：步骤a所述的待检样本为人类个体或人源细胞株。实验操作中难免轻微的交叉污染，如果女性样本中污染了少量男性样本，在使用常规方法检测时，会有来自男性样本轻微的染色体基因的信号，这时，操作者很可能因为看到这个信号而误认为这是男性样本，从而造成女性样本假男性现象。但是，如果使用本专利技术方法，少量污染的男性样本不会根本性改变比值的大格局，还是会远大于10，这时，根据比值，操作者仍然判断其为女性样本，从而避免了女性样本的假男性现象。另外，使用本专利技术方法，还可以降低男性样本假女性现象。如果男性样本提取DNA不顺利，损失了较多DNA，这是PCR模板量会相应降低，如果用常规方法，y染色体上的基因信号会很弱，容易被操作者误认为没有信号，而判断其为女性，造成男性样本假女性现象，但是如果使用本方法，比值来自一个x染色体基因的信号和一个y染色体基因的信号，就算DNA模板量低，来自x染色体基因的信号和来自y染色体基因的信号同时降低，比值还是变化不大，这样根据比值，仍然判断为男性，从而避免了男性样本假女性现象。本专利技术提供的引物、试剂盒和方法，通过荧光定量PCR计算待检样本中NROB1、Sry基因的相对表达量比值NROB1/Sry，比值大于10判断为女性，比值小于10判断为男性；本专利技术提供的引物灵敏度高、特异性强；利用本专利技术的引物、试剂盒和方法可以准确鉴定人类个体、人源细胞株性别，有效降低女性样本假男性现象，具有良好的应用前景。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1对取样男性的染色体分析结果。图2qPCR反应条件。图3qPCR扩增结果图；其中：A为不加入DNA模板时针对NROB1基因的阴性扩增曲线图，可见无明显信号；B为不加入DNA模板时针对Sry基因的阴性扩增结果，可见也无明显信号；C为针对NROB1基因的扩增曲线图；D为针对Sry基因的扩增曲线图；E为针对NROB1基因的融解曲线图；F为针对Sry基因的融解曲线图。图4对取样女性的染色体分析结果。具体实施方式下面以实施例作进一步说明，但本专利技术不局限于这些实施例。本专利技术所用的实验试剂、仪器如下：全血基因组DNA快速提取试剂盒(溶液型)DP1101：京百泰克生物技术有限公司；iQSybrGreenSupermix：Bio-Rad，USA；DMEM高糖培养液、细胞培养用双抗、新生小牛血清、细胞培养用胰蛋白酶、细胞培养用磷酸缓冲液：均来自成都哈里生物；CFX96qPCR仪：Bio-Rad，USA。实施例1本专利技术引物的设计1、选定用于荧光定量PCR的基因人X染色体的单一基因选定为NROB1，其位于X染色体的Xp21，2个外显子，1个内含子，编码细胞核受体超家族的一种孤儿蛋白质；人Y染色体的单一基因选定为Sry，其位于Y染色体的Yp11.3，1个外显子，没有内含子，编码决定生物雄性性别的蛋白质。2、引物设计针对NROB1和Sry的引物信息见表1。表1引物信息3、引物进行荧光定量PCR的验证1)制备DNA模板：取健康男性的外周血，利用全血基因组DNA快速提取试剂盒(溶液型)提取血液DNA，得到男性DNA。对取样的男性进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
SEQ ID NO：1‑2所示的引物对或SEQ ID NO：3‑4所示的引物对。

【技术特征摘要】
1.SEQIDNO：1‐2所示的引物对1和SEQIDNO：3‐4所示的引物对2在鉴别人类个体、人源细胞株性别中的用途。2.SEQIDNO：1‐2所示的引物对1和SEQIDNO：3‐4所示的引物对2在制备鉴别人类个体、人源细胞株性别的试剂中的用途。3.一种鉴定人类个体、人源细胞株性别的试剂盒，其特征在于：它包含SEQIDNO：1‐2所示的引物对1和SEQIDNO：3‐4所示的引物对2，用于分别扩增NROB1基因和Sry基因。4.权利要求3所述的试剂盒在鉴定人类个体、人源细胞株性别中的用途。5.一种鉴定人...

【专利技术属性】
技术研发人员：万谦，向俊蓓，蒋小辉，陈强，刘绵学，
申请(专利权)人：四川新生命干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51