分离和测定苯磺贝他斯汀光学异构体杂质的方法技术

一种拆分苯磺贝他斯汀光学异构体并定量测定R-异构体杂质的方法，采用高效液相色谱法，流动相中含有正己烷和乙醇，其特征在于采用正相液相色谱法；使用的色谱柱中所用的填料是表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶；所述流动相中还含有碱性添加剂。本方法与现有技术方法相比，流动相配制简单，两异构体的分离度均在4.5～5.5范围内。尤其是，本方法的色谱柱耐用性较好，使用一年后仍有较高的柱效，极大降低了分析测定成本。

【技术实现步骤摘要】

： 本专利技术涉及一种分离和测定药物的光学异构体杂质的方法，具体涉及用高效液相 色谱法分离苯磺贝他斯汀及其R-异构体并定量测定该R-异构体的方法。
技术介绍
： 苯磺贝他斯汀是非镇静类高选择性组胺Hl受体拮抗剂类药物，具抗过敏、止痒效 果。 苯磺贝他斯汀是S-构型的手性化合物，化学名（+)-⑶-4- 哌啶]丁酸苯磺酸盐，与其R-异构体在药理作用方面有较大差异，苯磺 贝他斯汀较R-异构体更优越。 在制药过程中，往往将苯磺贝他斯汀的R-异构体作为杂质监控。因此，苯磺贝他 斯汀（s-构型）与R-异构体的分离、以及对苯磺贝他斯汀的R-异构体的含量测定，对苯磺 贝他斯汀质量的控制具有非常重要的意义。 现有技术都是用反相液相色谱法来拆分苯磺贝他斯汀的S-构型和R-构型，当使 用正相色谱方法时，使用常用填料的色谱柱不能将苯磺贝他斯汀（S-构型）与R-异构体分 离。如专利（CN1098262C)报道采用ULTRON ES-OVM色谱柱反相液相色谱法来拆分，进口标 准（JX20060221)采用ULTRON ES-⑶反相液相色谱法来拆分。 虽反相色谱所用试剂较便宜，但上述两种反相液相色谱拆分方法都存在明显缺 占· ULTRON ES-⑶柱对苯磺贝他斯汀两光学异构体的分离效果不理想，且使用一个月 左右后，两异构体基本不能分离； ULTRON ES-OVM柱填料为卵蛋白键合硅胶，对苯磺贝他斯汀及其异构体能够有效 分离，但使用一段时间后，峰型变宽，柱效明显下降，色谱柱耐用性差。 两种方法的拆分条件和结果如表1所示： 表1现有技术两种反相液相色谱方法比较 【
技术实现思路
】： 本专利技术的目的一是提供一种拆分苯磺贝他斯汀光学异构体的方法，不仅两光学异 构体的分离效果好，而且色谱柱耐用性较好，使用一段时间后仍能保持较高柱效。 本专利技术另一目的是提供定量测定苯磺贝他斯汀中所含的R-异构体杂质的方法。 本专利技术提供了一种拆分苯磺贝他斯汀光学异构体并定量测定R-异构体杂质的方 法，采用高效液相色谱法，流动相中含有正己烷和乙醇，其特征在于： 1)采用正相液相色谱法； 2)使用的色谱柱中所用的填料是表面涂敷有直链淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基甲 酸酯）的硅胶，如Chiralpak AD-H色谱柱； 3)所述流动相中还含有碱性添加剂； 所述碱性添加剂为含氮原子的碱性有机溶剂，优选为乙醇胺、二乙胺、三乙胺中的 一种或几种。 所述流动相中正己烷和乙醇的体积比为：正己烷：乙醇=85~90:10~15。 所述碱性添加剂的比例（V/V)为0. 05%~0. 15%，优选浓度为0. 05%~0. 1%。 在本专利技术的一个实施例中，用Chiralpak AD-H色谱柱（4. 6 X 250mm，5 μ m，填料为 表面涂敷有直链淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶）；以正己烷-乙醇-乙醇 胺（87:13:0. 1)为流动相；检测波长为260nm。分别取苯磺贝他斯汀对照品与R-异构体对 照品适量，加乙醇适量超声使溶解，用正己烷稀释至刻度制成每1ml约苯磺贝他斯汀Img和 R-异构体5 μ g的混合溶液，按上述色谱条件进样20 μ 1，记录色谱图。出峰顺序依次为贝 他斯汀、R-异构体，理论板数按贝他斯汀峰计算不低于2000,贝他斯汀和相邻异构体的分 尚度不低于2. 0。 本专利技术的方法经线性关系、回收率试验、检测限等方法学验证，结果证明该测定方 法准确可靠。方法学验证见实施例1。 用本专利技术的方法不仅可将苯磺贝他斯汀与其光学异构体进行分离，还能够采用不 加校正因子的主成分自身对照法（见实施例2)对R-异构体的含量进行测定。 实施例1、2给出了有效成分苯磺贝他斯汀（S-构型）与光学异构体（R-构 型）分离的研究，并对三批样品中的光学异构体进行定量测定。结果表明，本方法与专利 CN1098262C方法和进口标准（JX20060221)中的方法相比，本专利技术方法具有如下优点： 1、流动相配制简单。 2、两异构体的分离度均在4. 5~5. 5范围内·。 3、色谱柱耐用性较好，使用一年Chiralpak AD-H色谱柱后，仍有较高的柱效。【附图说明】： 图1~图6是采用HPLC (高效液相色谱）方法分离苯磺贝他斯汀与R-异构体得 到的色谱图。从各图可看到，现有技术和本专利技术所用的三种色谱柱，各自在使用时间不同的 情况下，苯磺贝他斯汀及其R-异构体分离情况的比较： 图1本专利技术所用的Chiralpak AD-H新色谱柱初次使用时； 图2本专利技术所用的Chiralpak AD-H色谱柱使用一年后； 图3现有技术所用的ULTRON ES-⑶新色谱柱初次使用时； 图4现有技术所用的ULTRON ES-⑶色谱柱使用一个月后； 图5现有技术所用的ULTRON ES-OVM新色谱柱初次使用时； 图6现有技术所用的ULTRON ES-OVM色谱柱使用三个月后。 各图中，纵座标是峰面积（单位：mV)，横座标是时间（单位：min)。【具体实施方式】 下面以实施例进一步解释本专利技术，但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例中 所使用的色谱分离的流动相、流动相的组成和使用的色谱分离柱及色谱分离柱的填料。 以下各实验中所用色谱仪：SHIMADZU LC-2010AHT (日本岛津）；检测器：UV ;色谱 工作站：LCsolution,流速：L 0ml/min〇 实施例1Chiralpak AD-H色谱柱正相HPLC (高效液相色谱）检测 色谱条件 色谱柱=Chiralpak AD-H(填料是表面涂敷有直链淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基 甲酸酯）的硅胶，4. 6 X 250mm, 5 μ m) 流动相：正己烷-乙醇-乙醇胺（87:13:0. 1，V/V/V);所用正己烷、乙醇均为色谱 纯，乙醇胺为分析纯 检测波长：260nm ; 进样量：20 μ 1 :理论板数桉苯磺贝他斯饤峰计不低干2000 方法：分别取苯磺贝他斯汀对照品与R-异构体对照品适量，加乙醇适量超声使溶 解，用正己烧稀释至刻度制成每1ml约苯磺贝他斯汀Img和R-异构体50 μ g的混合溶液， 照上述色谱条件进样20μ 1，记录色谱图（图1、图2) 图1是Chiralpak AD-H色谱柱初次使用记录的色谱图；图2是该色谱柱使用一年 后，采用同样色谱方法条件记录的色谱图。分离数据见表2。 表2Chiralpak AD-H色谱柱使用前后分离数据对比 从表2数据中看出：Chiralpak AD-H色谱柱使用一年后，理论板数和分离度均没 有明显变化。证明Chiralpak AD-H色谱柱对苯磺贝他斯汀及R-异构体不仅有较好的分离 效果，而且该色谱柱耐用性较好。 本专利技术方法的方法学验证 1、线性关系 精密称取R-异构体对照品16. 49mg (含量99. 41 % )于100mL量瓶中，用8ml乙醇 超声溶解并用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（1);再精密量取该贮备液5ml至50ml 量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（2)。 线性溶液的配制：分别精密量取上述贮备液（2) I. 5、2. 5ml于25ml量瓶中，用溶剂 稀释至刻度，摇匀，配制成异构体浓当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种拆分苯磺贝他斯汀光学异构体并定量测定R‑异构体杂质的方法，采用高效液相色谱法，流动相中含有正己烷和乙醇，其特征在于：1)采用正相液相色谱法；2)使用的色谱柱中所用的填料是表面涂敷有直链淀粉‑三(3,5‑二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶；3)所述流动相中还含有碱性添加剂；所述碱性添加剂为含氮原子的碱性有机溶剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵静，许佳，肖丽，黄真，
申请(专利权)人：重庆华邦制药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85