本发明专利技术涉及免疫鉴定脑脊液的装置和方法。本公开内容涉及样品中是否存在脑脊液(cerebrospinal fluid，CSF)的检测，其通过检测与在其他体液中的水平相比在CSF中富集的一种或更多种抗原来进行。装置和方法适于在来自跨种族、年龄、性别、健康状态和遗传变异的广泛人群的混合体液样品中检测脑脊液是否存在。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是申请号为201080045270. 4的中国专利申请的分案申请，原申请是2010 年8月6日提交的PCT国际申请PCT/US2010/044690于2012年4月6日进入中国国家阶 段的申请。 与相关申请的交叉引用 本申请是2009年8月7日提交的美国临时申请No. 61/232, 033(其通过整体引用 并入本文）的正式申请。
本公开内容涉及样品中是否存在脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF)的检测，其 通过检测与在其他体液中的水平相比在CSF中富集的一种或更多种蛋白质来进行。本文描 述了用于检测来自跨种族、年龄、性别、健康状态和遗传变异的广泛人群的混合体液样品中 是否存在脑脊液的装置和方法。
技术介绍
脑脊液（CSF)或脑脊髓液（liquor cerebrospinalis)存在于蛛网膜下腔以及围 绕并穿过中枢神经系统（CNS)的腔室中。脑和脊髓浸泡于CSF中，CSF向神经元和胶质提供 水分、营养、代谢废物的去除和静液冲击的缓冲。CSF通过扩散、胞饮和主动转运的组合过程 通过侧脑室和第四脑室的脉络丛从动脉血中产生。该流体还包含产生自神经元和胶质的成 分。在通过脑室系统扩散至蛛网膜下腔后，大部分CSF经硬脑膜静脉丛被蛛网膜颗粒重吸 收进入血流。每天产生约500ml的脑脊液；成人的总体积为140-150ml，总CSF每6-8小时 更新。在整个CNS中CSF与硬脑膜连接。大部分流体在吻端CNS产生，而且大部分最终在 尾端脊髓排出，形成吻端至尾端的净流体流。CSF是等渗混合物，大部分成分为盐、葡萄糖、 蛋白质和水。来自腰区（lumbar region)的CSF含有15至45mg/dl蛋白质（0.3-1%血清 蛋白质浓度）和50-8011^/(11葡萄糖（60%血液葡萄糖）。脑池和脑室05?中的蛋白质浓度 较低。 CSF中的蛋白质类型可以分为两类：构成健康个体CSF的主要成分的血液来源蛋 白，以及脑来源蛋白。CSF中约20%的蛋白质来源于脑实质，但其中只有一部分是脑特异 的。 尽管事实上大部分脑脊液蛋白质也存在于血清中，但是多种蛋白质来源是CSF特 有的： 从神经元和胶质细胞释放的蛋白质，例如tau蛋白、S-100和神经元特异性烯醇酶 (neuron-specific enolase, NSE)〇 从软脑膜（leptomeniges)释放的蛋白质，例如|3-微量蛋白（0-trace protein) 和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C(cystatin C)。 在脉络丛中进行合成期间被糖基化或磷酸化差异性修饰的蛋白质，例如运甲状腺 素蛋白（transthyretin，TTR)、血管紧张肽II和胰岛素样生长因子II。 CSF和血浆的蛋白质谱有很大的重合，有相当数目的蛋白质是CSF特有的，或者在 CNS中通过磷酸化或糖基化独特地修饰。 设计侧向流测试（Lateral Flow Test)(或者也称为侧向流免疫色谱测定或试 条测试）来快速检测异质基质中是否存在给定分析物。目前市场上有多种侧向流测试用 于家用测试、即时测试（point of care testing)或实验室使用，例如怀孕测试（例如 FirstResponse?，ClearBlue?)、hiv测试（例如QraQuickADVANCE?, Clearview? Complete)或衣原体测试（例如ClearvieW?Chlamydia，inSTIcheck?Chlamydia)。需要与 HIV 测试（如 OraQuickADVANCE?或ClearvieW?Complete)类 似的适于检测CSF的测试：它是即时测试；该测试仅是定性的；操作者使用该测试仅需最低 程度的训练；该测试在试片上有内部对照以确认准确取样。
技术实现思路
在一个实施方案中，用于检测样品中是否存在脑脊液的装置包含： 样品施加区， 样品标记区，其包含针对CSF富集蛋白（CSF-enriched protein)的第一抗体，其 中所述第一抗体与流动颗粒缀合； 样品检测区，其包含针对所述CSF富集蛋白的第二抗体，其中将所述第二抗体固 定到所述样品检测区， 其中在第二区存在可检测条带指示所述样品中存在脑脊液。 在另一实施方案中，检测样品中是否存在CSF的方法包括： 将所述样品与对CSF富集蛋白特异的结合伴侣（binding partner)接触，以及 检测结合伴侣-CSF富集蛋白复合物是否存在，其中可检测复合物的存在指示所 述样品中存在CSF。 在上述实施方案中，所述CSF抗原是神经细胞粘附分子样蛋白同工型1(SEQ ID N0:1;登录号gi :62088238);链A，与牛胰胰蛋白酶抑制剂（Bpti)复合的人中胰蛋白 酶（Mesotrypsin) (SEQ ID N0 :2;登录号 gi :162330095) ;CNTN2 接触蛋白-2 前体（SEQ ID N0:3;登录号gi|4827022);CNTNl接触蛋白-1的同工型2(SEQ ID N0:4;登录号gi: 28373119);与SPARC样蛋白1高度相似的cDNA(未命名的蛋白质产物）（SEQ ID NO :5;登 录号：gi |194388050) ;NRCAM蛋白（神经元细胞粘附分子）可能的稍 长片段（~96kDa)(登录号：SEQ ID NO :6 ;gi | 68534652 和 SEQ ID NO :7 ;gi 11〇97315〇1); NCAM2 神经细胞粘附分子 2,同工型 CRA_a(SEQ ID NO :8 ;登录号 gi 1119630409) ;SERPINA3 丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子，进化枝A，成员3前体/a 1-抗胰凝乳蛋白酶的同工 型1/生长抑制蛋白25或a 1-抗胰凝乳蛋白酶前体的稍长片段（SEQ ID N0 :9;登录 号gi 146981961) ;AGT血管紧张肽原（SEQ ID N0 :10;登录号gi |553181);血管紧张肽原 前体（丝氨酸蛋白酶抑制因子（Serpin)A8) (SEQ ID N0 :11;登录号gi|4557287);未命名 的蛋白质产物，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B;在人中也称为细胞粘附分子3 (SEQ ID NO :12;登录号 gi 1187608363) ;cDNA FLJ59893, dickkopf 同源物 3 前体（SEQ ID NO :13; 登录号gi|40548389) ;SERPINF1丝氨酸（或半胱氨酸）蛋白酶抑制因子，进化枝F(a-2抗 纤溶酶（antiplasmin)，色素上皮衍生因子，Pedf)，成员1同工型4因子（SEQ ID N0:14 ; 登录号gi 115988024);与GC维生素D结合蛋白相似的人蛋白质，预测为维生素D结合蛋 白 (SEQ ID NO :15;登录号181482) ;CD14人单核细胞抗原 CD14(CD14)(SEQ ID NO :16;登录号 gi |117646212) ;CADM3 人细胞粘附分子 3(CADM3)，转 录变体 1(SEQ ID N0:17;登录号 gi|90080503;SEQ ID N0:18;gi|l87本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测样品中是否存在脑脊液的装置，其包含：样品施加区，样品标记区，其包含针对CSF富集蛋白的第一抗体，其中所述第一抗体与流动颗粒缀合；样品检测区，其包含针对所述CSF富集蛋白的第二抗体，其中将所述第二抗体固定到所述样品检测区，其中在第二区存在可检测条带指示所述样品中存在脑脊液。其中所述CSF富集蛋白是神经细胞粘附分子样蛋白同工型1(SEQ ID NO：1；登录号gi：62088238)；链A，与牛胰胰蛋白酶抑制剂(Bpti)复合的人中胰蛋白酶(SEQ ID NO：2；登录号gi：162330095)；CNTN2接触蛋白‑2前体(SEQ ID NO：3；登录号gi|4827022)；CNTN1接触蛋白‑1的同工型2(SEQ ID NO：4；登录号gi：28373119)；与SPARC样蛋白1高度相似的cDNA(未命名的蛋白质产物)(SEQ ID NO：5；登录号：gi|194388050)；NRCAM蛋白(神经元细胞粘附分子)[人(Homo sapiens)]可能的稍长片段(～96kDa)(登录号：SEQ ID NO：6；gi|68534652和SEQ ID NO：7；gi|109731501)；NCAM2神经细胞粘附分子2，同工型CRA_a(SEQ ID NO：8；登录号gi|119630409)；SERPINA3丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子，进化枝A，成员3前体/α1‑抗胰凝乳蛋白酶的同工型1/生长抑制蛋白25[人]或α1‑抗胰凝乳蛋白酶前体的稍长片段(SEQ ID NO：9；登录号gi|46981961)；AGT血管紧张肽原(SEQ ID NO：10；登录号gi|553181)；血管紧张肽原前体(丝氨酸蛋白酶抑制因子A8)(SEQ ID NO：11；登录号gi|4557287)；未命名的蛋白质产物，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B；在人中也称为细胞粘附分子3(SEQ ID NO：12；登录号gi|187608363)；cDNA FLJ59893，dickkopf同源物3前体(SEQ ID NO：13；登录号gi|40548389)；SERPINF1丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子，进化枝F(α‑2抗纤溶酶，色素上皮衍生因子，Pedf)，成员1同工型4因子(SEQ ID NO：14；登录号gi|15988024)；与GC维生素D结合蛋白相似的人蛋白质，预测为维生素D结合蛋白[黑猩猩(Pan troglodytes)](SEQ ID NO：15；登录号181482)；CD14人单核细胞抗原CD14(CD14)(SEQ ID NO：16；登录号gi|117646212)；CADM3人细胞粘附分子3(CADM3)，转录变体1(SEQ ID NO：17；登录号gi|90080503；SEQ ID NO：18；gi|187608363(人)；神经细胞粘附分子变体(SEQ ID NO：19；登录号gi：62088238)；与CLU cDNA FLJ57622相似的未命名蛋白质，与簇蛋白高度相似(SEQ ID NO：20；登录号gi|189054091)；与簇蛋白高度相似的蛋白质(SEQ ID NO：21；登录号gi|193787502)；LMAN2囊泡整合膜蛋白VIP36(SEQ ID NO：22；登录号gi|157834800)；簇蛋白同工型1[人](SEQ ID NO：23；登录号NM_001831.2)；超氧化物歧化酶3，细胞外前体(SEQ ID NO：24；登录号gi|118582275)；纤维蛋白αC端片段(SEQ ID NO：25；登录号gi|223057)；链A，人激肽释放酶6(Hk6)活化形式或KLK6激肽释放酶6的同工型1(SEQ ID NO：26；登录号gi|21465970)；APCS血清淀粉样P成分/链A或五聚体人血清淀粉样P成分(SEQ ID NO：27；登录号gi|576259)；FAM3C蛋白FAM3C/序列相似家族3，成员C前体[人]note＝″预测的成骨细胞蛋白；白介素样EMT诱导因子(SEQ ID NO：28；登录号gi|55629272)；与未命名蛋白质产物[食蟹猴(Macaca fascicularis)]相似的蛋白质，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B，在人中也称为细胞粘附分子3(SEQ ID NO：29；登录号gi|187608363)；上述CSF抗原的CSF富集磷酸化或去磷酸化形式；或者两种或更多种上述CSF抗原的组合。...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：文森特·皮埃里博内，
申请(专利权)人：亲和标记技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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