一种杜鹃花化学消毒组培方法技术

本发明专利技术涉及一种杜鹃花化学消毒组培方法。杜鹃花的化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明专利技术的杜鹃花化学消毒组培方法，利用化学试剂达到灭菌或抑菌的目的，在配制培养基的过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了杜鹃花组培环节；并且操作简单，只要按不同的培养基配方配制即可；实用性强，推广性好，还可以有效降低杜鹃花的组培成本，一般可降低成本10％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种杜鹃花化学消毒组培方法
本专利技术涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种杜鹃花化学消毒组培方法，属生物

技术介绍
杜鹃花属(RhododendronLinn.)植物是世界著名的观赏植物，是我国十大名花之一，也是世界著名观赏花卉.其艳丽多彩的花色和得体的盆花造型一直占据着我国春节花卉热销品种之一。杜鹃花通常采用种子、扦插、压条和嫁接方法繁殖,但受种类或品种、季节、母株材料等因素限制，难于进行大量的商业化生产。自1975年Anderon首次成功地建立了山杜鹃(Rhododendronxx)的离体培养体系，组织培养已成为杜鹃花繁殖的重要手段，广泛应用于种质资源保护、遗传育种和无性系苗木的商业化生产中。对于特定的杜鹃花种类、品种，其离体繁殖成功的关键在于基本培养基的选择，在外植体的诱导和增殖培养中对所添加激素种类及配比的优化，以及对驯化移栽中环境因子的调控。但是，由于杜鹃花种类和品种间的差别，在组织培养过程中继代增殖培养、诱导生根、组培苗的驯化移栽体系的建立，仍是组织培养中急需解决的问题，特别是丛生芽和不定芽分化率低的问题,是组培快繁的瓶颈。杜鹃组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的优良性状的基础上，实现杜鹃的种质资源保存和转基因研究等。杜鹃组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的杜鹃组织培养方法要求外植体接种在高温高压灭菌后的无菌培养基中才能正常生长，耗能大，人工操作成本高。如果能通过化学消毒的方法来改造培养基，使培养基在不需要进行高温高压灭菌，就能够获得杜鹃的正常生长。这样，一方面可以降低杜鹃组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展杜鹃组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对杜鹃生长产生毒害或抑制，即不影响杜鹃的正常生长，从根本上简化了杜鹃组织培养。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种杜鹃花化学消毒组培方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的。本专利技术的一种杜鹃花化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：1.培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+2mg/L青霉素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；2.培养基配制：诱导培养基为ER+6～15mg/LZT+5～15mg/LIAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：ER+1～3mg/LZT+0.5～1.0mg/LIAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2ER+0.5～1.5mg/LNAA+0.1～0.5IBAmg/L+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述ER培养基为1965年，Eriksson公开的ER培养基；所述ZT为玉米素；所述NAA为〆-萘乙酸；所述IAA为吲哚乙酸；所述IBA为吲哚丁酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容、然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；3.诱导培养：取健壮的杜鹃顶芽或花蕾，先自来水冲洗表面灰尘，剥去外苞片，用体积比为75％酒精中浸2～3s，再用重量比为0.1％HgCl2消毒6～10min，无菌水冲洗3～5次；在超净工作台上，剥去2～3层的苞片，切除基部褐化部分，接种到诱导培养基上，40d后形成若干小芽；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；4.增殖培养：将诱导培养的小芽转入增殖培养基中,30d后逐步诱导出丛生芽并发育成不具根的丛生芽苗；将丛生芽苗切成带芽的茎段，转接到新的增殖培养基中，每30d转接一次；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；5.生根培养：当增殖培养的丛生芽苗长到4～6cm时，将丛生芽苗切成单株，接种到生根培养基上，25d后形成完整植株；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；6.瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后，移栽至栽培基质中，所述栽培基质由泥碳土和珍珠岩组成，其重量比为2∶1；大棚上层用75％遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃。本专利技术的应用效果：由于本专利技术的化学消毒组培方法，是利用化学试剂添加到各种培养基中，达到灭菌或抑菌的作用，所以，配制的培养基无需高温高压灭菌。因此，在杜鹃花诱导培养、增殖培养、生根培养各个阶段的影响，除了要考虑常用的评价指标外，还要考虑污染率的问题。1.诱导培养：通过实验证实，本专利技术的一种杜鹃花的化学消毒组培方法与常规的杜鹃花组培方法相比，结果如表1所示，在诱导培养阶段的外植体培养的成活率、污染率和死亡率都没有太大差异。表1本专利技术的化学消毒组培方法对杜鹃花诱导培养的影响组培方式平均成活率(％)平均污染率(％)平均死亡率(％)常规组培方法453619化学消毒组培方法5033172.增殖培养：本专利技术的化学消毒组培方法与常规组培杜鹃花的增殖倍数和污染率的比较，结果如表2所示，增殖倍数和污染率二个指标都没有太大差异。在瓶苗的生长状况看，本专利技术的化学消毒组培方法的培养基由于不经过高温高压灭菌，激素和营养元素损失较少，其杜鹃花组培苗更绿，更壮。表2本专利技术的化学消毒组培方法对杜鹃花增殖倍数和污染率的影响组培方式平均增殖倍数平均污染率(％)生长状况常规组培方法5.60.5苗浅绿、弱化学消毒组培方法6.00苗绿、壮3.本专利技术的化学消毒组培方法对杜鹃花生根率和污染率的影响：在生根过程中，本专利技术的化学消毒组培方法与常规的杜鹃花组培方法相比，结果如表3所示，生根率和污染率都没有太大差异；从瓶苗的生长状况看，用本专利技术的方法，杜鹃花组培苗茎更粗，叶片更大。表3本专利技术的化学消毒组培方法的杜鹃花瓶苗生根情况4.成本分析：本专利技术的化学消毒组培方法与常规组培的成本分析见表4。本专利技术组培省去了高压灭菌环节,简化了组培程序,提高了工作效率。从可以直接计算出来的费用来算，每年可以节约5万元左右(以每天配制50L培养基计算)。另外，还有一些不容易计算的项目，如高压锅维修，安全，节约空间等：表4本专利技术的杜鹃花简便组培方法培养与常规组培的成本分析表本专利技术具有如下优点和有益效果：1.本专利技术的杜鹃花化学消毒组培方法中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了杜鹃花组培环节，降低了杜鹃花组培成本。2.本专利技术的杜鹃花化学消本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杜鹃花化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+2mg/L青霉素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：诱导培养基为ER+6～15mg/L ZT+5～15mg/L IAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：ER+1～3mg/L ZT+0.5～1.0mg/L IAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2ER+0.5～1.5mg/LNAA+0.1～0.5IBA mg/L+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述ER培养基为1965年，Eriksson公开的ER培养基；所述ZT为玉米素；所述NAA为〆‑萘乙酸；所述IAA为吲哚乙酸；所述IBA为吲哚丁酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容、然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)诱导培养：取健壮的杜鹃顶芽或花蕾，先自来水冲洗表面灰尘，剥去外苞片，用体积比为75％酒精中浸2～3s，再用重量比为0.1％HgCl2消毒6～10min，无菌水冲洗3～5次；在超净工作台上，剥去2～3层的苞片，切除基部褐化部分，接种到诱导培养基上，40d后形成若干小芽；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；(4)增殖培养：将诱导培养的小芽转入增殖培养基中,30d后逐步诱导出丛生芽并发育成不具根的丛生芽苗；将丛生芽苗切成带芽的茎段，转接到新的增殖培养基中，每30d转接一次；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；(5)生根培养：当增殖培养的丛生芽苗长到4～6cm时，将丛生芽苗切成单株，接种到生根培养基上，25d后形成完整植株；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；(6)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后，移栽至栽培基质中，所述栽培基质由泥碳土和珍珠岩组成，其重量比为2∶1；大棚上层用75％遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃。...

【技术特征摘要】
1.一种杜鹃花化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+2mg/L青霉素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：诱导培养基为ER+6～15mg/LZT+5～15mg/LIAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：ER+1～3mg/LZT+0.5～1.0mg/LIAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2ER+0.5～1.5mg/LNAA+0.1～0.5IBAmg/L+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述ER为1965年，Eriksson公开的ER培养基；所述ZT为玉米素；所述NAA为〆-萘乙酸；所述IAA为吲哚乙酸；所述IBA为吲哚丁酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)诱导培养：取健壮的杜鹃花蕾，先自来水冲洗表面灰尘，剥去外苞片，用体积比为75％酒精中浸2～3s，再用重量比为0.1％HgCl2消毒6～10min，无菌水冲洗3～5次；在超净工作台上，剥去2～3层的苞片，切除基...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晋隆，林庆良，许莉萍，高世武，阙友雄，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35