一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法技术

本发明专利技术涉及活性蛋白制备领域，特别涉及一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，包括以下步骤：采用35％的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上清液；采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液；将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得。该制备方法先选用特定浓度的硫酸铵溶液将小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白如纤维蛋白、一部分糖蛋白以及一部分其它蛋白沉淀，通过离心将其去除；然后再用饱和硫酸铵溶液将上清液中的糖蛋白、糖蛋白肽以及部分生长因子沉淀，得到的沉淀即为小麦胚芽细胞活性蛋白；最后采用透析的方式将沉淀中的硫酸铵去除，即得到纯净的小麦胚芽细胞活性蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及活性蛋白制备领域，特别涉及，包括以下步骤：采用35％的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上清液；采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液；将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得。该制备方法先选用特定浓度的硫酸铵溶液将小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白如纤维蛋白、一部分糖蛋白以及一部分其它蛋白沉淀，通过离心将其去除；然后再用饱和硫酸铵溶液将上清液中的糖蛋白、糖蛋白肽以及部分生长因子沉淀，得到的沉淀即为小麦胚芽细胞活性蛋白；最后采用透析的方式将沉淀中的硫酸铵去除，即得到纯净的小麦胚芽细胞活性蛋白。【专利说明】
本专利技术涉及活性蛋白制备领域，具体而言，涉及一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制 备方法。
技术介绍
小麦胚芽含有黄酮类化合物，如：山柰酚、杨梅树皮素、木犀草素等、儿茶精类物 质、苦味萜、17种氨基酸以及钾、锰、磷、钙、铁等25种元素，在抗衰老、抗氧化等方便效果显 著。 以往的小麦胚芽蛋白的提取主要采用盐溶碱提酸沉法，然而这种方法需要大量酸 和碱，并且排出大量含糖等营养物质以及酸碱废水，从而造成后处理困难，严重污染环境， 而且在提取过程中很容易使蛋白质发生变性；现有的小麦胚芽蛋白的提取采用反胶束法， 是以副产品小麦胚芽为原料，包括前萃和后萃。前萃由琥珀酸二（2-乙基己基）酯璜酸钠 (AOT)-异辛烷-氯化钾缓冲溶液组成的反胶束体系从小麦胚芽中提取蛋白；后萃先回收异 辛烷，少量KCl的缓冲溶液溶解剩余的固形物，最后用丙酮沉淀得小麦胚芽蛋白。该方法步 骤复杂，且提取得到的小麦胚芽蛋白的分子量较大。 目前蛋白酶的提取方法有多种，但主要有丙酮有机溶剂提取法、乙醇提取法，超滤 法，但这些并不适合小麦胚芽细胞活性蛋白的提取。 小麦胚芽细胞活性蛋白是由小麦胚芽细胞培养后萃取第99段的活性蛋白。小麦 胚芽细胞活性蛋白能极大促进细胞间质生成，激发细胞活性。细胞培养基既是培养细胞中 供给细胞营养和促使细胞生殖、增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。小 麦胚芽细胞活性蛋白含有丰富的天然植物基酸、植物生长素和生长因子，如：表皮生长因 子、皮纤维细胞生长因子、角质生长因子等，是常用的天然培养基，可用于许多细胞和细胞 的培养。 此外，小麦蛋白活性分子化妆品在消费者使用过程中，产品主要作用是迅速补充 细胞营养，调节细胞代谢正常，让活力弱的细胞变强，让细胞恢复增长，达到新生细胞和代 谢掉的细胞平衡。在产品研发和生产过程中，是根据氧化还原理论，吸收途径主要是通过汗 腺和细胞体液交换吸收。皮肤不管是松驰、绉纹、眼袋、眼纹等各种衰老问题，都是皮肤细胞 缺乏营养，造成细胞干瘪踏陷，同时新生细胞减少，代谢掉的细胞大于新生细胞。在去斑应 用中，目前市场产品都是脱色类，这只是解决了表面问题，过一段时间黑色素又聚集，去掉 的斑又反弹了。去斑效果好，不反弹，去除中不是去掉黑色素，而是让黑色素细胞代谢恢复 正常，这样斑会因为正常黑色素细胞代谢慢慢消除，皮肤代谢正常后，不会产生新的多余的 黑色素细胞，斑就消除了。因此，小麦胚芽细胞活性蛋白具有滋养细胞，促进新陈代谢，有效 改善细纹，美白和细嫩肌肤的作用，能够解决肌肤大多数问题。 而现有的小麦胚芽蛋白溶液含有一些杂蛋白，如纤维蛋白、部分糖蛋白等，阻碍小 麦胚芽蛋白溶液的使用效果。 有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该制备方法简单 易行，得到的小麦胚芽细胞活性蛋白含量高，且活性高。 为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案： ，包括以下步骤： (a)、采用35%的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上 清液； (b)、采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液； (c)、将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得。 本专利技术提供的小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，先选用特定浓度的硫酸铵溶液 将小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白如纤维蛋白、一部分糖蛋白以及一部分其它蛋白沉淀，通 过离心将其去除；然后再用饱和硫酸铵溶液将上清液中的糖蛋白、糖蛋白肽以及部分生长 因子沉淀，得到的沉淀即为小麦胚芽细胞活性蛋白；最后采用透析的方式将沉淀中的硫酸 铵去除，即得到纯净的小麦胚芽细胞活性蛋白。 小麦胚芽蛋白溶液可采用现有的方法制备，如：碱溶液沉淀法、α-淀粉酶法、木 瓜蛋白酶法、超声波法、反胶团萃取法等等。 其中，饱和硫酸铵溶液采用以下方式配置： 边搅拌边慢慢将767g(NH4)2S04加到1升蒸馏水中，用氨水或硫酸调到至pH为 7. 0,即得到饱和硫酸铵溶液。 35%的硫酸铵溶液即将配好的饱和硫酸铵溶液进行稀释至相应的饱和度即可，即 35 %的硫酸铵溶液是将饱和硫酸铵与水以体积比为35:65的比例进行混合。 步骤（C)中，通过透析去除硫酸铵，查看硫酸铵是否去除彻底，采用氯化钡溶液进 行验证，具体为：将透析液与质量百分数为10%的氯化钡溶液等体积混合，看是否有白色 沉淀，若没有，则去除彻底。 为了使小麦胚芽蛋白溶液中的杂蛋白去除的更充分，经验证，优选地，在步骤（a) 中，所述硫酸铵溶液的体积与所述小麦胚芽蛋白溶液的体积为〇. 4-0. 8:1。 更优选地，在步骤（a)中，所述硫酸铵溶液的体积与所述小麦胚芽蛋白溶液的体 积为〇. 5:1。 优选地，在步骤（a)中，所述离心为：在0-6°C条件下，以转速为5000r/min，离心 20min。经验证，该转速以及离心时间条件下，能够充分的将杂蛋白与活性蛋白分离开，得到 的上清液中基本无杂蛋白残留；同时在低温下进行离心以保持蛋白的活性。 为了将第一上清液中的活性蛋白充分的沉淀，经验证，优选地，在步骤（b)中，所 述饱和硫酸铵溶液与所述第一上清溶液的体积比为1-1. 2 :1 ; 更了更充分的将第一上清液中的活性蛋白沉淀，且利于复性以保持很好的活性， 优选地，所述饱和硫酸铵溶液与所述第一上清溶液的体积比为1:1。 具体地，所述充分沉淀为： 在搅拌速度为180r/min条件下，将饱和硫酸铵添加到上清液中，添加完毕后混 匀，得到混合液； 将得到的混合液于0-6°C条件下静置IOh。 添加完毕后混匀即添加完毕后继续搅拌至完全混匀，然后再进行静置，以使上清 液中的活性蛋白充分沉淀；同时在低温下以保持蛋白的活性。 进一步地，在步骤（b)中，所述离心为：在〇-6°C条件下，以转速为10000r/min，离 心35min。经验证，该转速条件下，能够充分的将呈絮凝状的活性蛋白沉淀，得到沉淀物即为 变性的活性蛋白；同时在低温下以保持蛋白的活性。 试验验证，只进行步骤（b)，上清液中仍残留20% -30%的活性蛋白，为了将活性 蛋白充分分离收集，防止浪费，优选地，重复步骤（b)l次，收集沉淀。重复步骤（b)l次即 将步骤（b)中得到的上清液，再采用饱和硫酸铵溶液进行充分沉淀，离心，得到沉淀和上清 液，将得到的沉淀于PBS溶液中溶解后透析。经过沉淀和分离，得到的活性蛋白的收集率达 到95%以上。 进一步地，在步骤（c)中，所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)、采用35％的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上清液；(b)、采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液；(c)、将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄海军，
申请(专利权)人：北京七秀时代科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11