用于不取决于性别的确定老化的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于确定受试者老化情况的方法。该方法基于特定的核苷酸或蛋白质及其表达水平，也无论性别如何，能够对受试者的年龄和年龄相关的情况得出结论。本发明专利技术进一步涉及一组基因，也无论性别如何，该基因的表达水平取决于各个受试者的老化情况。此外，本发明专利技术涉及确定基因的表达水平，以及各个表达水平用于确定老化情况的用途。本发明专利技术也涉及装置，尤其是阵列和芯片，该装置用于确定受试者的老化情况。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于确定受试者老化情况的方法。该方法基于特定的核苷酸或蛋 白质及其表达水平，也无论性别如何，能够对受试者的年龄和年龄相关的情况得出结论。在 本专利技术的情况下，年龄相关的情况尤其可以是年龄相关的疾病。 本专利技术也涉及一组基因，也无论性别如何，该基因的表达水平取决于各个受试者 的老化情况。此外，本专利技术涉及基因表达水平的确定，以及各个表达水平用于确定老化情况 的用途。 本专利技术也涉及装置，尤其是阵列和芯片，该装置用于确定受试者的老化情况。
技术介绍
在如今的观念中，老化是一个复杂多因素的过程，受遗传因素和外界因素二者影 响。老化的确切机理是未知的。然而，存在关于老化机理的多种理论，其并不一定是互相排 斥，而就多因素起源而言，作为平行或顺序的过程对于老化的整个过程具有影响。这些理论 包含一方面改变基因信息及其结构，如端粒的逐渐缩短、染色体异常和增加突变，通过降低 的DNA修复能力导致或伴随。另一方面，认为氧化应激，也与线粒体的机能障碍相关联，并 且通过蛋白质折叠能力的降低引发的折叠异常的蛋白质更高的发生率和/或折叠异常的 蛋白质的分解的减少，与老化相关联。然而，还不知道这些观察到的作用是否为老化的原因 或结果。 由于预期寿命的增加，预计将来年龄相关的现象对社会的重要性将增加。因此，做 出了世界范围的巨大努力来更精确地确定老化的各种因素的影响并分别寻找可能的减缓 老化的因素和用于与年龄相关联的疾病的预防措施。因此根据目标，分别确定老化和健康 老化的发展，明确定义以及可再现的确定参数，对于影响老化的研宄至关重要。这些参数在 不同的老化情况下至少在一个可测定的性质上必须是不同的。 由WO2010/104573A1已知一种方法，根据该方法具体的基因被识别，该方法可以 用于确定受试者的年龄。然而，由于所述方法难以在样本上实施，并且部分需要外科手术， 根据所述的方法确定老化情况非常困难。因此根据其中描述的方法确定老化情况非常困 难。 在目前的技术水平下，没有能够轻易确定受试者老化情况且具有较高的可信度的 已知方法。从目前的技术水平也难以获知，具体生物标记的何种程度的表达水平显示性别 特异性差异。然而，有可能不取决于性别确定受试者的老化情况，这对基因作为生物标记 的用途非常重要。如果各个基因仅适于用作一种性别的生物标记，则该事实并非如此。由 于甚至不知道这些生物标记能否不取决于性别地使用，在以前已知的用于老化的生物标记 中，情况甚至更不利。因此，可能发生对收集的数据的曲解。
技术实现思路
因此本专利技术的目的是提供一种方法，该方法能够可靠并快速地，还不取决于性别 地确定受试者的老化情况。此外，本专利技术的目的是能够可靠并快速地，还不取决于性别地确 定受试者的健康老化情况，从而能够确定导致疾病的个体差异。通过包括以下步骤的方法 解决该目的： a.提供受试者的细胞样本， b.确定细胞样本中至少一个基因的表达水平，所述细胞样本中基因的表达水平取 决于所述受试者的老化情况， c.使用至少一个对比值对比基因的表达水平，其中对比值是对照样本中各个基因 的表达水平，且其中对照样本的老化情况是已知的。 生物，尤其是动物可能作为其细胞适于提供细胞样本的受试者。优选的受试者是 哺乳动物，优选的受试者是人。 根据本专利技术，"表达水平"指每个细胞具体基因的基因产物的含量。基因产物可以 以RNA形式或蛋白质形式存在。因此表达水平的确定包括确定蛋白质或核酸，尤其是RNA 的含量。 根据本专利技术，"老化情况"优选指受试者出生后的年龄。在来自细胞培养物的细胞 样本中，优选将各个培养物中通路的数量当作老化情况。老化情况也可以是与年龄相关的 疾病的存在或其它与年龄相关的情况。与年龄相关的疾病尤其是癌症，然而，也可以是自 身免疫性疾病，例如大疱皮肤病、红斑狼疮，传染性疾病，例如丹毒、尿路感染、肺炎、带状疱 瘆，新陈代谢疾病，例如新陈代谢综合症，血管疾病，例如慢性静脉功能不全、动脉闭塞性疾 病，神经退行性疾病，例如阿兹海默症、帕金森症，肌肉骨骼疾病，例如骨质疏松症，内脏的 疾病，例如冠心病、COPD，皮肤的前期癌症和肿瘤，例如日光性角化症、基底细胞癌、鳞状细 胞癌、下肢溃疡（腿张开部）。 优选通过确定具有已知老化情况的受试者的细胞样本中表达水平确定根据本发 明的对比值。例如，对比值可以通过检测一组至少2个，优选至少5个和尤其优选至少10个 对比受试者，对于考察的基因或考察的多个基因（对照样本）的表达水平来确定。因此，向 对照受试者进行与待检测的受试者同样的步骤a和b。该结果反馈为对比值且能够相对表 明对于检测受试者的老化情况。因此明显的是，有可能表明相对于几乎任意老化情况。对 照受试者或多个对照受试者作为被检测的受试者分别优选属于相同的物种。 在优选的实施方案中，细胞样本是固定的动物组织，尤其是皮肤样本、唾液样本、 涂片细胞样本、血液样本、尿液样本或粪便样本。在本专利技术的优选的实施方案中，细胞样本 包括至少一种细胞匀浆。在适当的由细胞或组织培养或从活的生物的组织，特别是由皮肤 样本、唾液样本、涂片细胞样本、血液样本、尿液样本或粪便样本的制备后能够获得细胞样 本。 根据本专利技术，具有雌性基因型的细胞和具有雄性基因型的细胞都可以用作细胞样 本。根据本专利技术，皮肤的制备、黏膜的制备、涂片细胞样本、血液样本或尿液样本能够用作细 胞样本。这是特别有益的，因为皮肤、口腔、生殖器和肛门的黏膜、血液、尿液和粪便通常易 于获得样本。与此相关，未暴露到阳光下的皮肤区域尤其可以用作细胞样本，因为老化的发 展很大程度上不取决于外界因素。未暴露到阳光下的皮肤区域通常是上臂的内侧或大腿的 内侧和臀部。 皮肤的老化情况能够对所有经受老化的其他组织的老化情况得出结论。皮肤的老 化情况尤其能够对外胚层来源的其它组织的老化情况得出结论。根据本专利技术的外胚层来源 的组织优选是中枢神经系统、外围神经系统、牙齿、头发和指甲。 皮肤、黏膜、血液、尿液和粪便的老化情况能够对经受老化的受试者的所有其他组 织的老化情况得出结论。 在死亡的生物中，能够使用来自任意组织的细胞样本用于确定老化情况。 基因的表达水平与至少一个对比值的对比，其中对比值是在对照样本中的相应基 因的表达水平，并且其中已知对照样本的老化情况，进行该对比以确定细胞样本中测量的 表达水平和对比值的表达水平的任意匹配或差别。 本专利技术包括一组具有年龄相关改变的表达的基因，且所述基因用于老化和/或年 龄相关情况的生物标记的用途。因此能够使用本领域技术人员已知的方法在RNA或蛋白质 水平上进行表达水平的确定。 优选用于确定表达水平的方法是印记法（Northernblotting)、核糖核酸酶 (RNase)保护法、实时聚合酶链反应（PCR)、大阵列和微阵列、SILAC、无标记绝对定量法、免 疫印记法（Westernblotting)、ELISA、免疫细胞化学法和免疫组织化学法。 对于在RNA水平上表达水平的确定，优选使用经典的电泳方法。特别是是印记法 (Northernblotting)、核糖核酸酶（RNase)保护法，更优选基于聚合酶链反应（PCR)的方 法，例如实时聚合酶链反应（PCR)。再更优选地，可以使用杂交程序例如大阵列和微阵本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于确定受试者老化情况的方法，所述方法包括a.提供受试者的细胞样本，b.确定至少一个基因的表达水平，所述基因的表达水平取决于所述受试者的老化情况，和c.使用至少一个对比值对比基因的表达水平，其中所述对比值是对照样本中各个基因的表达水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤金伲亚·马克林托纳科，克里斯托·C·邹布利斯，詹姆斯·阿贾耶，
申请(专利权)人：尤金伲亚·马克林托纳科，克里斯托·C·邹布利斯，
类型：发明
国别省市：德国;DE