DNA片段及其在制备H5N1亚型流感Guassia荧光素酶报告病毒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种DNA片段及其在制备H5N1亚型流感Guassia荧光素酶报告病毒中的应用。所述DNA片段的核苷酸序列由如下序列依次串联组成：H5N1亚型流感病毒NA节段3’端非编码区编码基因序列、H5N1亚型流感病毒NA基因编码区编码序列、PTV-1病毒2A肽编码基因序列、Gaussia荧光素酶编码基因序列、H5N1亚型流感病毒NA节段5’端包装信号编码基因序列和H5N1亚型流感病毒NA节段5’端非编码区的编码序列组成。利用所述DNA片段制备得到的重组H5N1亚型流感报告病毒，可通过细胞上清或动物血清中的荧光素酶活性，快速、准确、客观地对样品中包含的病毒进行定量检测，既节约了时间，也提高了检测结果的准确性和可靠性，从而为抗H5N1亚型流感病毒药物筛选和疫苗评估提供新的便捷、有效的工具。

【技术实现步骤摘要】
DNA片段及其在制备H5N1亚型流感Guassia荧光素酶报告病毒中的应用
本专利技术涉及一种DNA片段及其在制备H5N1亚型流感Guassia荧光素酶报告病毒中的应用。
技术介绍
H5N1亚型流感病毒是甲型流感病毒的一种，主要在禽类传播。近年来，H5N1亚型流感病毒感染人类的报道逐年增多，截至2012年8月，全球已有15个国家和地区报告608人感染，其中359人死亡，死亡率高达59%。感染滴度是病毒相关基础研究以及药物、疫苗研发所需的基础数据。目前，H5N1亚型流感病毒的感染滴度主要依靠测定病毒的半数组织培养感染剂量（TCID50）或空斑形成单位（PFU）来确定，操作复杂且准确程度易受到主观经验影响。Gaussia荧光素酶是新近发现的一种由海洋桡脚类动物产生的荧光素酶，具有分子量小、检测灵敏度高、半衰期短等优点。由于Gaussia荧光素酶自身具有分泌肽,细胞中80%以上的酶分子能分泌至细胞外，可通过检测细胞培养上清或血液中荧光素酶活性指示体内荧光素酶表达情况。例如，Thomas、Chung等成功通过测定血液中Gaussia荧光素酶活性定量评价了体内肿瘤生长过程；Griesenbac本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种DNA片段，其核苷酸序列由如下序列依次串联组成：首端限制性内切酶BsaⅠ的保护碱基及其识别位点、H5N1亚型流感病毒NA节段3’端非编码区序列、不含终止子的H5N1亚型流感病毒NA基因序列、猪捷申病毒2A肽编码序列、Gaussia荧光素酶基因序列、H5N1亚型流感病毒NA基因3’端包装信号、H5N1亚型流感病毒NA节段5’端非编码区以及末端限制性内切酶BsaⅠ的识别位点及其保护碱基。

【技术特征摘要】
1.一种DNA片段，其核苷酸序列为序列表中的序列4。2.含有权利要求1所述DNA片段的重组载体。3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于：是将权利要求1所述DNA片段插入到载体pHW2000的BsaI位点处得到的。4.含有权利要求1所述DNA片段的重组菌。5.含有权利要求1所述DNA片段的重组细胞。6.含有权利要求1所述DNA片段的重组病毒。7.权利要求1所述DNA片段、权利要求2或3所述重组载体、权利要求4所述重组菌、权利要求5所述重组细胞或权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：户义，祝庆余，李靖，吴晓燕，孙伟，韩鹏飞，杨银辉，康晓平，李裕昌，张雨，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11