本发明专利技术公开了一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法，该方法利用固相萃取法提取有机污染物，对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，分别采用酶偶联速率法法检测、苦味酸法和透射比浊法检测大鼠体内尿素氮、肌酐和免疫球蛋白，以达到快速明显检测大鼠肝脏肝肾功能及免疫功能损伤过程，由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，由于谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)是存在于肝细胞内的酶，当肝细胞膜受损就会被释放入血，血清AST、ALT异常间接提示肝细胞受损，血清中的CHE是由肝脏合成的水解酶，其活性水平是评估肝实质细胞损害的重要手段，也可以作为判断病情程度和预后的一项临床指标。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，该方法利用固相萃取法提取有机污染物，对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，分别采用酶偶联速率法法检测、苦味酸法和透射比浊法检测大鼠体内尿素氮、肌酐和免疫球蛋白，以达到快速明显检测大鼠肝脏肝肾功能及免疫功能损伤过程，由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，由于谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)是存在于肝细胞内的酶，当肝细胞膜受损就会被释放入血，血清AST、ALT异常间接提示肝细胞受损，血清中的CHE是由肝脏合成的水解酶，其活性水平是评估肝实质细胞损害的重要手段，也可以作为判断病情程度和预后的一项临床指标。【专利说明】-种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法
本专利技术涉及，属于卫生 检测
。
技术介绍
随着工农业的迅速发展，含有各种有毒有害有机物水进入天然水体，使我国的水 源水及饮用水受到不同程度的污染，水体污染事件不断发生，如2005年松花江重大水 污染事件，2010年洞庭湖水污染事件等，据国家环境部口统计，我国82%的河流受到不同程 度的污染，大部分河段不适合作饮用水源，导致了严重的饮用水供应危机，受到各国政府和 公众高度重视，成为当今世界重大的公共卫生问题之一，研究表明，水体中有机提取物能够 通过长期积累达到危害人类及其他生物的水平，干扰神经系统、免疫系统、生殖系统等，导 致组织器官的病变，鉴于人类实际接触途径，探讨管网末梢水对人体的健康危害具有重要 的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是；提供一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方 法，能快速检测有机污染物致大鼠肝肾功能及免疫功能，得到准确的测定值，W克服现有技 术的不足。 本专利技术的技术方案 ，该方法利用固相萃取法提 取有机污染物，对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，分别采用酶偶联速率法法检测、苦味酸法 和透射比浊法检测大鼠体内尿素氮、肌酢和免疫球蛋白，W达到快速明显检测大鼠肝脏肝 肾功能及免疫功能损伤过程。 前述的中，大鼠选取40 只，雌雄各半，体重80?lOOg，染毒前适应性饲养1周，自由进食饮水，在染毒期间，清洁级 动物房相对湿度为50%?70%，温度为23 +2°C。 前述的中，采用固相萃 取法富集水中有机污染物，萃取剂为XAD-2树脂，洗脱剂为二氯甲焼和甲醇，水样过柱流速 为4倍柱体积/min,过柱完后依次用3倍柱体积的二氧甲焼和甲醇先后洗柱，流速0. 1倍柱 体积/min,洗脱液经旋转蒸发仪25C减压蒸觸挥干，将已挥干的浓缩提取物用玉米油定容 至50L/ml (母液）-200C冰箱保存备用。 由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，由于谷草转氨酶（AST)和谷丙转氨 酶（ALT)是存在于肝细胞内的酶，当肝细胞膜受损就会被释放入血，血清AST、ALT异常间 接提示肝细胞受损，血清中的CHE是由肝脏合成的水解酶，其活性水平是评估肝实质细胞 损害的重要手段，也可W作为判断病情程度和预后的一项临床指标，实验结果显示；血清中 ALT、AST、C肥水平随着染毒剂量的升高而明显上升，中高剂量组与对照组比较差异具有统 计学意义。 【具体实施方式】 下面对本专利技术进一步的详细说明，但不作为对本专利技术的任何限制。 2材料与方法 2. 1材料 2. 1. 1实验动物 健康清洁级成年大鼠40只，体重155 +18g，由第H军医大学大坪医院实验动物中也提 供，SCXK(渝）2007-0005。染毒前适应性饲养一周，自由进食饮水。清洁级动物房相对湿度 45%-75%，温度控制在22 ± 3 °C。 2. 1.2主要试剂 葡萄糖测定试剂盒(北京首医临床医学科技中也)、肌酢测定试剂盒(北京九强公司）、 尿素氮试剂盒、谷草转氨酶测定试剂盒、谷氨转氨酶测定试剂盒总蛋白测定试剂盒、白蛋 白测定试剂盒、球蛋白测定试剂盒，均来自厦口英科创科技有限公司，血清总胆红素试剂 盒、间接胆红素试剂测定盒、结合胆红素测定试剂盒、胆碱醋酶试剂测定盒、碱性磯酸酶试 剂盒、胆固醇测定试剂盒、甘油H脂测定试剂盒、免疫球蛋白（IgM、IgA、IgA)试剂盒、补体 (C3、C4)试剂盒，均来自中生北控生物科技股份有限公司。XAD-2大孔树脂（20-60目，美 国Sigma公司，）、甲醇、二氯甲焼，均为分析纯（美国TEDIA公司）、玉米油（美国Sigma公 司）、生理盐水、0. 9%戊己比妥轴（美国Sigma公司）。 2. 1.3主要仪器 1/%。电子天平（中国奧豪斯公司）、索氏提取器（索氏管+冷凝管+l〇〇〇ml烧瓶）、旋转 蒸发仪（RE-3000,上海亚英生化仪器有限公司）、循环水式多用真空粟（S皿-III，郑州长城 科工贸有限公司）、离也机（LD4-2,北京医用离也机厂)、全自动生化分析仪（AU400,0LYMPUS 有限公司） 2. 2方法 2. 2. 1水样采集与处理 采集G市某地管网末梢水水样，采用固相萃取法]富集水中有机物，萃取剂为XAD-2树 月旨，洗脱剂为二氯甲焼和甲醇，水样过柱流速为4倍柱体积/min,过柱完后依次用3倍柱体 积的二氧甲焼和甲醇先后洗柱，流速0. 1倍柱体积/min,洗脱液经旋转蒸发仪25C减压蒸 觸挥干，将已挥干的浓缩提取物用玉米油定容至50L/ml (母液）-200C冰箱保存备用。 2.2.2实验分组、染毒及取材 将40只雄性大鼠按随机区组法分为4组，每组10只，1组为溶剂对照组（予玉米油）， 其余3组为低、中、高剂量染毒组，染毒剂量分别为3L/kg. bw. day、15L/kg. bw. day、75L/ kg. bw. day,灌胃体积为lOml/kg .bw .day,每天灌胃一次，每隔3d称重1次，连续染毒28d， 最后一次染毒结束后，用0. 9%戊己比妥轴麻醉大鼠，剪大鼠股动脉取血，收集血液标本于 非抗凝管中，放置2-3小时，3000 r/min，离也15-20 min,分离血清放入-20°C冰箱待测。 2. 2. 3大鼠肝功能指标的测定 谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶（AST)、胆碱醋酶（CHE)使用酶连续监测法检测，总蛋白 (TP )、球蛋白（GL0)、碱性磯酸酶(ALB)采用漠甲酷绿法检测，胆固醇（CH0)采用酶比色法检 测，血糖（GLU)采用己糖激酶法，直接胆红素值BIL)、总胆红素（TBIL)、间接胆红素（IBIL) 均采用铜酸盐法检测。 2. 2. 4大鼠肾功能指标的测定 尿素氮（BUN)采用酶偶联速率法法检测，肌酢（化）采用苦味酸法检测。 2. 2. 5大鼠免疫能指柄的测定 免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA)、补体（C3、C4)均采用透射比浊法检测。 2. 2. 6统计学处理 实验结果用^ ± S表示，应用SPSS17. 0统计软件，采用单因素方差分析法进行数据统 计与处理，检验水准0=0. 05。 3结果与分析 3.1管网末梢水有污染取物对大鼠肝功能的影响 3. 1. 1对肝细胞血清酶学指标的影响 由表1可见，各染毒组AST、ALT、ALP与对照组比较差异无统计学意义（P〉0. 05) 【权利要求】1. ，其特征在于：该方法利 用固相萃取法提取有机污染物，对大鼠进行经口亚慢性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种有机污染物致大鼠的肝肾功能及免疫功能的检测方法，其特征在于：该方法利用固相萃取法提取有机污染物，对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，分别采用酶偶联速率法法检测、苦味酸法和透射比浊法检测大鼠体内尿素氮、肌酐和免疫球蛋白，以达到快速明显检测大鼠肝脏肝肾功能及免疫功能损伤过程。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：敖云霞，
申请(专利权)人：敖云霞，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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