本发明专利技术公开了一种检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的基因芯片和试剂盒。本发明专利技术基因芯片和检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的基因芯片以及 试剂盒
本专利技术涉及一种检测猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒的基因芯片以及试剂盒。
技术介绍
随着集中化养猪的规模日益扩大，猪的腹泻疾病变得日趋严重。而引起仔猪腹泻 疾病的病原研究证实有而且还在不断增加大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、猪流行性腹泻病 毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、温和猪瘟、猪痢疾、猪球虫等。而由猪流行性腹泻病 毒、猪轮状病毒引起的仔猪病毒性腹泻疾病日趋增多，该两类疫病能引起仔猪的高发病率 和高死亡率，且有部分地区已经呈现出混合感染和继发感染的现象，对养猪业造成了极大 的损失。鉴于这两种病毒在生产中对仔猪危害极大，包括我国在内的许多国家和地区为预 防和控制这两种主要的腹泻类疫病，投入了大量的人力、物力、财力，但却收效甚微。 由于该两类腹泻类疫病在临床症状及流行趋势上都极其相似，尚无有效疫苗能将 疫情控制，因此在临床诊断、治疗，以及防治上有极大的难度。临川症状具体表现在：一般 2周龄以内的仔猪感染后12-24小时会出现呕吐，继而出现严重的水样或糊状腹泻，粪便呈 黄色，常夹有未消化的凝乳块，恶臭，体重迅速下降，仔猪明显脱水，发病2-7天死亡，死亡 率达100% ;在2-3周龄的仔猪，死亡率在0-10% ;断乳猪感染后2-4天发病，表现水泻，呈 喷射状，粪便呈灰色或褐色，个别猪呕吐，在5-8天后腹泻停止，极少死亡，但体重下降，常 表现发育不良，成为僵猪；一些耐过猪和呈隐形感染的猪群往往也是带毒猪。 传统的检测这两种疾病的方法如病毒分离鉴定和血清检查，往往耗时过长。最近 国外和国内均建立了 RT-PCR/PCR检测方法，以及多重PCR检测方法，在大规模批量检测中 往往也有一定局限性。为此，有必要建立一种共检芯片技术对猪流行性腹泻、猪轮状病毒进 行鉴别诊断，以实现对这3种病的快速且准确的检测，为尽快采取有效的针对性防治措施， 减少这些疾病对养猪业造成的损失做好铺垫。综上所述，用共检芯片检测技术对猪流行性 腹泻、猪轮状病毒进行别诊断方法是十分必要的。 伴随分子生物学理论和技术的发展，芯片技术在检测方面具有高通量、多样性、微 型化和自动化的优势特点。在对各种病原体的分子检测中，往往针对病原体的基因进行检 测。而芯片技术能对各种病原体的RNA、DNA进行定性和定量的分析，从而帮助诊断者明确 疾病的种类及疾病的感染程度。因此芯片技术在传染性疾病的诊断和病原体的筛查上发挥 着越来越重要的作用。 基因芯片，又称DNA微阵列，其原理是通过将cDNA或寡核苷酸探针密集固定于固 相表面，再与已经标记好的靶基因序列进行杂交反应。经过扫描仪扫描显示图像和软件处 理分析数据，从而获得检测样品中包含的特定分子信息，结合图像和数据判定对应检测样 品的是否含有、含有量的多少。传统的检测技术耗时费力，且难以以多病原共同检测模式进 行相关检测。利用基因芯片技术将多种病原的特异性保守序列片段分别固定在芯片表面， 与要检测的样品经过处理后杂交，便可获得多种病原的检测信息。这种检测方法对大规模 批量检测开辟了一个新的局面，为动物疫病的综合防治提供了有效且快速的诊治平台。 邓俊花等，TGEV-PEDV-PRV基因芯片探针的构建，中国畜牧兽医学会畜牧兽医生 物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集，2008年7月，公开了可 能用于检测猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的探针，但是未公开具体的基因芯片以及检测 试剂盒，也未公开其是否可以特异、灵敏地检测猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种特异性强、灵敏度高的可同时或分别检测 猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的基因芯片和试剂盒。 本专利技术检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的基因芯片，它包括固相载体以 及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO :1或2所示任意一个或者两个寡核 苷酸片段，和/或SEQ ID NO :3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。 基因芯片，是指指通过不同方法将生物分子（寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、 抗体、抗原等）固着于硅片、玻璃片（珠）、塑料片（珠）、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的 生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。 优选地，它还包括定位探针，定位探针是SEQ ID NO: 13所示的基因片段。 本专利技术检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的试剂盒，它包括前述的基因芯 片与扩增猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的基因的试剂；其中，扩增猪流行性腹泻病 毒基因的试剂包括SEQ ID NO :5?6和/或SEQ ID NO :7?8所示引物对；扩增猪轮状病 毒基因的试剂包括SEQ ID NO :9?10和/或SEQ ID NO :11?12所示引物对。 优选地，它还包括SEQ ID NO : 14?15所示引物对。 优选地，所述引物对中，SEQ ID NO :5、7、9、11所示上游引物与SEQ ID NO :6、8、10、 12所示下游引物的摩尔比为1:40。 本专利技术提供了 SEQ ID N0:1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，和/或SEQ ID NO :3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，在制备检测猪流行性腹泻病毒和/或 猪轮状病毒的基因芯片中的用途。 优选地，所述基因芯片还包括定位探针，定位探针是SEQ ID NO: 19所示的基因片 段。 本专利技术提供了 SEQ ID NO :5?6和/或SEQ ID NO :7?8所示引物对与SEQ ID NO :1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，和/或SEQ ID NO :9?10和/或SEQ ID N0:11?12所示引物对与SEQ ID NO :3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段在制备检 测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的试剂盒中的用途；其中，引物对为扩增试剂；SEQ ID NO :1?4为检测探针。 优选地，所述试剂盒还包括SEQ ID NO: 14?15所示引物对以及SEQ ID NO: 13所 示定位探针。 优选地，所述引物对中，SEQ ID NO :5、7、9、11所示上游引物与SEQ ID NO :6、8、10、 12所示下游引物的摩尔比为1:40。 本专利技术基因芯片和试剂盒可以分别或同时检测猪流行性腹泻病毒、和猪轮状病 毒，敏感性高，两种病毒的最低检测浓度依次为IO 3Copies/μ L、104copies/μ L，特异性强， 耗时短，检测快速，具有良好的应用前景。 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术权利要 求书记载的内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。 【附图说明】 图1检测微阵列四个重复检测区的分布及矩阵排列情况。 图2正向引物与反向引物按不同比例的不对称PCR扩增凝胶电泳图（1-11分别代 表 1 :1、1 :10、1 :20、1:40、1 :50、1:80、1:160、1:200，阴性对照）本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的基因芯片，其特征在于：它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，和/或SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。
【技术特征摘要】
1. 一种检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的基因芯片，其特征在于：它包括固 相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO :1或2所示任意一个或者 两个寡核苷酸片段，和/或SEQ ID NO :3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。2. 根据权利要求1所述的基因芯片，其特征在于：它还包括定位探针，定位探针是SEQ ID NO :13所示的基因片段。3. -种检测猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的试剂盒，其特征在于：它包括权利 要求1或2所述的基因芯片与扩增猪流行性腹泻病毒和/或猪轮状病毒的基因的试剂；其 中，扩增猪流行性腹泻病毒基因的试剂包括SEQ ID NO :5?6和/或SEQ ID NO :7?8所 示引物对；扩增猪轮状病毒基因的试剂包括SEQ ID NO :9?10和/或SEQ ID NO: 11?12 所示引物对。4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：它还包括SEQ ID NO : 14?15所示引 物对。5. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述引物对中，SEQ ID N0:5、7、9、ll所 示上游引物与SEQ ID NO :6、8、10、12所示下游引物的摩尔比为1:40。 6. SEQ ...
【专利技术属性】
技术研发人员：文心田，黄小波，曹三杰，尹人杰，伍锐，文翼平，邓静，赵松，张仙，常晓霞，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
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