kan/neoR抗性报告基因突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了kan/neoR抗性报告基因突变体，其中，kan/neoR抗性基因起始密码子ATG后与其后第一个氨基酸密码子ATT之间插入一定长度的异源靶序列核苷酸片段；所述一定长度的异源核苷酸片段是指大于等于1bp碱基且小于100bp碱基的3整数倍或者非3整数倍的异源靶序列核苷酸片段。本方法通过对kan/neoR抗性报告基因插入突变，观察在不同抗性上的菌落的有无或细胞的生存与死亡进行核酸酶活性与脱靶效应的评估。该方法与现有检测技术相比具有快速、准确、方法简单、成本低的优点；尤为突出的是，这一新方法的敏感性远远高于现有技术。

【技术实现步骤摘要】
kan/neoR抗性报告基因突变体及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学诊断和生物技术，具体的是通过对卡那霉素/G418抗性报告基因进行缺失突变和插入突变，以获得可同时用于原核体系和真核体系的既可定性也可定量的核酸酶活性检测技术细胞筛查技术。
技术介绍
锋指核酸酶(Zinc finger nuclease),归巢核酸酶(meganuclease),反因子核酸酶(TAL nuclease)和CRISPR-Cas核酸酶，都是可以进行基因工程设计的新酶类，在基因剪辑中具有十分重要的作用，可用于物种基因的改造、动物模型的制备、细胞株的制备，以及基因治疗研究和临床应用。在上述基因工程酶中，锌指核酸酶历史较长，由于操作复杂和脱靶效应较高，应用受到一定限制。而CRISPR-Cas核酸酶结构简单，易于操作，但同样存在高的脱靶效应。反因子核酸酶则具有较低的脱靶效应。转录激活样效应因子(Transcriptionactivator - like effectors)TALE为近年发现的一类可识别碱基的氨基酸序列高度重复蛋白质，来源于一种革兰氏阴性细菌，每一重复单元大多由33-35个氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
kan/neoR抗性报告基因突变体，其中，kan/neoR抗性基因起始密码子ATG后与其后第一个氨基酸密码子ATT之间插入一定长度的异源靶序列核苷酸片段。

【技术特征摘要】
1.kan/neoR抗性报告基因突变体，其中，kan/neoR抗性基因起始密码子ATG后与其后第一个氨基酸密码子ATT之间插入一定长度的异源靶序列核苷酸片段。2.根据权利要求1所述的kan/neoR抗性报告基因突变体，其中，所述一定长度的异源核苷酸片段是指大于等于Ibp碱基且小于IOObp碱基的非3整数倍的异源靶序列核苷酸片段；优选为16，31bp碱基。3.根据权利要求1所述的kan/neoR抗性报告基因突变体，其中，所述一定长度的异源核苷酸片段是指大于等于Ibp碱基且小于IOObp碱基的含有或者不含有终止密码子3的整数倍的异源靶序列核苷酸片段，优选为15，39bp碱基。4.一种载体，其含有权利要求1-3任一项的kan/neoR抗性报告基因突变体；所述载体为质粒。5.权利要求1-3任一项的kan/neoR抗性报告基因突变体或权利要求4所述的载体用于核酸酶活性的检测。6.根据权利要求5所述的用途，其中，kan/neoR抗性报告基因突变体的起始密码子ATG后与其后ATT之间插入Ibp碱基且小于IOObp碱基的非3整数倍的异源...

【专利技术属性】
技术研发人员：李凯，孙爱娟，潘韵芝，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32