EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌预后诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌预后诊断试剂中的应用。实时定量PCR检测数据表明，EIF5A2在食管鳞癌组织中的表达显著高于相应的非肿瘤组织。免疫组化数据分析结果显示：EIF5A2表达与淋巴结转移，肿瘤浸润深度和肿瘤分期正相关。Kaplan-Meier分析显示EIF5A2过表达的病人总体生存率较差(P<0.001)。多变量分析也证明EIF5A2是独立的预后因子。EIF5A2在食管鳞癌的侵袭和转移中可能发挥重要作用。进一步的实验数据证明，EIF5A2的过表达可由基因扩增和缺氧导致；EIF5A2可以结合到HIF1α的启动子区域，上调HIF1α的表达；EIF5A2可以诱导上皮间质化转换，促进食管鳞癌的血管形成，进而促进食管鳞癌的侵袭与转移。敲除EIF5A2能显著抑制肿瘤细胞迁移，沉默EIF5A2有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌预后诊断试剂中的应用。实时定量PCR检测数据表明，EIF5A2在食管鳞癌组织中的表达显著高于相应的非肿瘤组织。免疫组化数据分析结果显示：EIF5A2表达与淋巴结转移，肿瘤浸润深度和肿瘤分期正相关。Kaplan-Meier分析显示EIF5A2过表达的病人总体生存率较差(P<0.001)。多变量分析也证明EIF5A2是独立的预后因子。EIF5A2在食管鳞癌的侵袭和转移中可能发挥重要作用。进一步的实验数据证明，EIF5A2的过表达可由基因扩增和缺氧导致；EIF5A2可以结合到HIF1α的启动子区域，上调HIF1α的表达；EIF5A2可以诱导上皮间质化转换，促进食管鳞癌的血管形成，进而促进食管鳞癌的侵袭与转移。敲除EIF5A2能显著抑制肿瘤细胞迁移，沉默EIF5A2有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点。【专利说明】EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌预后诊断试剂中的应用
本专利技术涉及EIF5A2的新应用，特别涉及EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌的预后诊断试剂中的应用。
技术介绍
食管鳞状细胞癌是世界上肿瘤发病率排名第七，致死率排名第五的常见恶性肿瘤。食管切除术是早期食管癌患者有力的根治性治疗。然而，大多数患者症状显现时局部肿瘤已进展到晚期，并且20-30%已发生远处转移。转移是食管癌致死的主要原因，因此确定其具体机制显得重要而又迫切。像其他实体肿瘤一样，食管癌的发病机理是一个涉及多基因改变的长期过程。真核细胞翻译起始因子5A2(EIF5A2)是EIF5A家族中高度进化保守的基因之一。EIF5A2作为可能的癌基因在多种人类上皮源性肿瘤内呈高表达，并与肿瘤的分期和/或预后不佳相关。EIF5A2通过多种机制诱导肿瘤发生上皮间质转化进而促进肿瘤侵袭转移。EIF5A-MTA1/C-MYC轴可能是上皮源性肿瘤发生侵袭转移的重要调控通路之一。相关分子机制尚需进一步研究(孟庆彬，于健春，马志强.EIF5A2在肿瘤中的作用研究进展.基础医学与临床，2013，33(001): 123-125.XEIF5A2的过度表达与结直肠癌和肝癌的转移有关，并且提示了卵巢癌、肺癌、膀胱癌的不良预后。在肝细胞癌中，过度表达的EIF5A2可通过介导上皮间质化转换而促进肿瘤的侵袭和转移，这些过度表达的EIF5A2主要在侵犯周围组织的肿瘤细胞中检测到。尽管EIF5A2可以促进肝癌与结直肠癌细胞的运动能力，但是目前关于EIF5A2促进肿瘤转移的确切机制尚进展甚微。现有研究中，EIF5A2与食管鳞状细胞癌预后之后的关系尚未明确。Kim D H，Muto M， Kuwahara Y， et al.Array-based comparative genomic hybridizationof circulating esophageal tumor cells .0ncology reports， 2006， 16(5):1053-1059.中指出，EIF5A2在食管鳞状细胞癌细胞中的表达量的升高有限，不到0.6倍，不适用于作为该肿瘤预后的生物标记物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌的预后诊断试剂中的应用。本专利技术的另一个目的在于提供一种治疗食管鳞状细胞癌的制剂。本专利技术所采取的技术方案是: EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌的预后诊断试剂中的应用，EIF5A2高表达表明预后差，EIF5A2高表达的定义为:荧光定量PCR法:癌组织中EIF5A2的表达量超过癌旁非肿瘤组织的2.5倍；免疫组化检测法:肿瘤组织中染色深度X染色面积高于癌旁非肿瘤组织。一种治疗食管鳞状细胞癌的制剂，含有可以减少EIF5A2的表达量的起效因子。优选的，起效因子选自可使EIF5A2表达量下降的shRNA、siRNA。特别的，shRNA的序列为sh2:top strand: 5’-CACCGAGGACGACCATGCAAAATACGAATATTTTGCATGGTCGTCC-3’ (SEQ IDNO:1)；bottom strand:5’-AAAAGGACGACCATGCAAAATATTCGTATTTTGCATGGTCGTCCTC-3’ (SEQ IDNO:2)或 sh4:top strand:5’-CACCGCATTCAAGATGGTTACCTTCGAAAAGGTAACCATCTTGAATG-3’ (SEQ IDNO:3)bottom strand:5’-AAAACATTCAAGATGGTTACCTTTTCGAAGGTAACCATCTTGAATGC-3’ (SEQID NO:4)0本专利技术的有益效果是: 专利技术人通过实时定量PCR检测了 71例食管鳞状细胞癌病例中肿瘤和与相应的非肿瘤组织中EIF5A2的表达差异。EIF5A2在食管鳞癌组织中的表达显著高于相应的非肿瘤组织(P = 0.05)。与相应的非肿瘤组织相比，在31/71 (43.66%)食管鳞癌病例中检查到EIF5A2的过表达。232例资料完整的食管鳞癌病例的免疫组化数据分析结果显示:EIF5A2表达与淋巴结转移(P〈0.001)，肿瘤浸润深度(P=0.037)和肿瘤分期(P=O-OOl)正相关。Kaplan-Meier分析显示EIF5A2过表达的病人总体生存率较差(P〈0.001)。多变量分析也证明EIF5A2是独立的预后因子。这些结果表明:EIF5A2在食管鳞癌的侵袭和转移中可能发挥重要作用。进一步的实验数据证明，EIF5A2的过表达可由基因扩增和缺氧导致；EIF5A2可以可以结合到HIFla的启动子区域，上调HIFl a的表达；EIF5A2可以诱导上皮间质化转换，促进食管鳞癌的血管形成，进而促进食管鳞癌的侵袭与转移。敲除EIF5A2能显著抑制肿瘤细胞迁移，沉默EIF5A2有望成为食管鳞癌治疗的潜在祀点。【专利附图】【附图说明】图1，EIF5A2在食管鳞癌中的过表达情况； 图2，EIF5A2的表达可被缺氧诱导并且EIF5A2可以上调HIFl a ； 图34正5么2可直接调控!1正10的表达； 图4，沉默EIF5A2能降低细胞运动能力； 图5，EIF5A2促进肿瘤转移和血管形成； 图6，敲除EIF5A2具有潜在治疗价值； 图7，细胞角蛋白免疫组化染色结果图。【具体实施方式】材料和方法 原发肿瘤组织，组织芯片与免疫组化 食管鳞癌病例是从林州肿瘤医院外科病理档案室中连续挑选的(河南，中国)。在这项研究中，所有病例都没有接受过术前放化疗。 组织芯片(TMA)是根据现有技术构建。研究用人体组织经过中山大学涉及人体受试者研究的伦理审查委员会审查和批准。免疫组化染色(IHC)使用标准的免疫化学细染色方法进行。原位杂交免疫荧光 EIF5A2基因和3号染色体着丝粒分别用红色和绿色探针标记。原位杂交免疫荧光按照之前描述进行操作9。亚细胞结构分离 根据厂家说明书，使用NucBuster蛋白提取试剂盒分离出胞浆蛋白与胞核蛋白。EIF5A2与HIFl α的相互作用 EIF5A2与HIFla的相互作用机制是通过荧光素酶试验与染色体免疫共沉淀试验研究的。体外迁移试验 将重悬于无血清培养基的细胞种植于内置8微米膜滤器小室中。细胞被含1本文档来自技高网...

【技术保护点】
EIF5A2在制备食管鳞状细胞癌的预后诊断试剂中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：关新元，李焱，
申请(专利权)人：中山大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：