一株可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母制造技术

一株可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母，涉及一株季也蒙毕赤酵母。本发明专利技术提供一株季也蒙毕赤酵母，可以降解聚乙烯，为聚乙烯的生物降解提供了新的菌源。该季也蒙毕赤酵母为季也蒙毕赤酵母Meyerozyma guilliermondii ZJC‑1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCC No：16956。本发明专利技术季也蒙毕赤酵母Meyerozyma guilliermondii ZJC‑1可降解聚乙烯，为生物降解聚乙烯提供了新的菌源。用于降解聚乙烯。

A biodegradable polyethylene yeast Pichia jiyensis

【技术实现步骤摘要】
一株可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母
本专利技术涉及一株季也蒙毕赤酵母。
技术介绍
聚合物塑料的生产是全球工业发展最快的领域之一，其使用历史已有100年。自20世纪50年代以来，塑料制品开始被大规模的生产和消费，全球的塑料生产量呈现明显的指数趋势，1964年以来的五十年，塑料生产规模增加了20倍，全球每年的塑料生产超过3亿吨，2014年全球的塑料产量为3.11亿吨，2015年为3.35亿吨，预计到2050年将达到约18亿吨。聚乙烯是塑料制品的主要原材料之一，其相对分子量大、疏水性较强且表面能很低。聚乙烯通常有3种，分别为高密度聚乙烯、低密度聚乙烯及线性低密度聚乙烯。随着工业发展速度加快，塑料制造量的增加，增加了废弃塑料处理负荷。由于聚乙烯具有耐用性和良好的材料特性，通常难以降解，所以大量、广泛的使用聚乙烯塑料制品对地球的生态环境造成了严重的污染。当前，大部分的废旧聚乙烯塑料主要采用焚烧和填埋的方式进行处理，废旧塑料占垃圾填埋场总废物量的5-25wt％，其中大量塑料废物的填埋导致了管理问题和环境危害，如破坏土壤理化性质、造成土壤硬化，而焚烧会产生CO、HCl、NOx、SO2及二恶英等大量有毒气体进而污染空气，这两种处理方式均对环境造成严重的污染。因此，筛选出能降解聚乙烯的真菌，对于进一步采用绿色环保的处理方法来解决废旧聚乙烯塑料的污染问题具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供一株季也蒙毕赤酵母，可以降解聚乙烯，为聚乙烯的降解提供了新的菌源。本专利技术可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCCNo：16956。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1分离筛选自蜡螟幼虫肠道液中本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1在YPD固体培养基上培养2d后，单菌落直径为2～3mm，呈乳白色，圆形，表面光滑有光泽，质地较为粘稠，不透明。经美兰染色法染色后在油镜下可以观察到该菌为椭球形。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1可在YPD培养基上生长，最适生长温度30℃。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1可降解聚乙烯，为降解聚乙烯提供了新的菌源。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1属于毕赤酵母属(Pichia)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCCNo：16956。附图说明图1为本专利技术菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1的PCR扩增电泳图；图2为本专利技术菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1与GenBank中收录的相近菌株进行同源性比对所构建的系统进化树；图3为菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1降解聚乙烯前后聚乙烯的表面化学结构的红外谱图；图4为菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1降解前后的聚乙烯表面水接触角图。图5为菌株季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1在60天期间降解聚乙烯前后的聚乙烯的失重率。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCCNo：16956。本实施方式季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1由蜡螟幼虫肠道液中筛选得到。筛选按以下步骤进行：准备5龄蜡螟幼虫100只，以麦麸为辅食喂食聚乙烯膜2～3天后做空腹处理，空腹24h后将蜡螟幼虫浸入75％乙醇中灭菌1min，然后用无菌盐水漂洗2次，在超净工作台进行解剖，获取肠道液。将肠道液放入含有40mL生理盐水的离心管中，在涡旋仪上摇动5min，之后用移液器去除多余肠组织等杂质。将获取的蜡螟幼虫肠道液将作为微生物接种物悬浮液在超净工作台中接种到80mL的无碳液体培养液(LCFBM)中，并加入聚乙烯膜片0.2g，在30℃的恒温振荡培养箱120r/min振荡培养60天。60天后，取1mL培养液接种于含有终浓度为30μg/mL的链霉素的马铃薯葡萄糖固体培养基(PDA)中，在30℃、120转的恒温振荡培养箱培养。24h后将生长的不同菌落接种于PDA琼脂培养基上进行划线分离，直到可以获得纯菌株的分离物。无碳培养基(LCFBM)：称取0.7gKH2PO4，0.7gK2HPO4，0.7gMgSO4·7H2O，1.0gNH4NO3，0.005gNaCl，0.002gFeSO4·7H2O，0.002gZnSO4·7H2O和0.001gMnSO4·H2O，补蒸馏水至1000ml(无碳固体培养基需加琼脂15～20g)，121℃高压灭菌15min。PDA培养基(1000mL)由200g马铃薯、20g葡萄糖、1.5gMgSO4·7H2O、3gKH2PO4和余量的蒸馏水组成；PDA固体培养基(1000mL)由200g马铃薯、20g葡萄糖、1.5gMgSO4·7H2O、3gKH2PO4、15g琼脂粉和余量的蒸馏水组成。酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)：胰蛋白胨20g，酵母提取物10g，葡萄糖20g，(固体YPD培养基加琼脂15～20g，融化)，补蒸馏水至1000ml，115℃高压灭菌20min。筛选出的菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1根据《真菌分类学》、《真菌鉴定手册》和《酵母菌特征与鉴定手册》进行形态学鉴定。该菌单菌落呈乳白色，圆形，表面光滑有光泽，质地较为粘稠，不透明，菌体为椭球形。对筛选到的菌株进行分子生物学鉴定：将MeyerozymaguilliermondiiZJC-1接种于YPD液体培养基中，在30℃的恒温振荡培养箱120r/min培养16～24h，取2mL菌液8000rpm离心收集菌体，按照OMEGAHPFungalDNAKit试剂盒提取菌株基因组DNA。以菌株总DNA为模板，使用通用引物NL1:5＇－GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG－3＇和NL4:5＇－GGTCCGTGTTTCAAGACGG－3＇及金唯智PCR试剂盒对菌株26SrDNAD1/D2区进行PCR扩增，PCR扩增条件：94℃预变性2min，94℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸60s，32个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存。采用1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，在紫外凝胶成像系统中对比Marker分析PCR扩增产物大小。PCR扩增体系：50μL反应体系为：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母，其特征在于该季也蒙毕赤酵母Meyerozyma guilliermondiiZJC‑1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCC No：16956。

【技术特征摘要】
1.一株可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母，其特征在于该季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，刘长莉，王滨松，池明眼，张国财，王珊珊，郝孔利，董欣欣，姬彦飞，高超，刘燕，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23