本发明专利技术涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从马齿苋中提取、分离和鉴别出的新生物碱类化合物及其提取分离方法。所述的新化合物，分子式为C9H9NO4，化学名为4,5‑dihydroxyindoline‑1‑carboxylic acid。还提供上述新化合物的提取分离方法，依次采用水煎煮提取、硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、ODS中压柱及Sephadex LH‑20及高效液相色谱仪分离制备，成功的提取分离出一种新的生物碱类化合物。其结构由质谱，碳谱，氢谱及二维核磁波谱解析的方法鉴定为一种新生物碱类化合物。新化合物具有抗肿瘤和神经保护作用，本发明专利技术新化合物及其盐或衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发和药理活性研究的原料，用于制备抗肿瘤和神经保护的药物或保健品。
A Dihydroindole Carboxylic Acid Alkaloid from Portulaca oleracea and Its Extraction, Separation and Application
【技术实现步骤摘要】
马齿苋中一种二氢吲哚羧酸类生物碱及其提取分离方法与用途
本专利技术涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从马齿苋药材中提取、分离和鉴别出的一种生物碱化合物及其提取分离方法，特别是马齿苋中一种二氢吲哚羧酸类生物碱及其提取分离方法。
技术介绍
马齿苋(PortulacaoleraceaL.)，又名长命菜、马苋菜，为马齿苋科植物。马齿苋性喜肥沃土壤，耐旱亦耐涝，生命力强，分布广泛，资源丰富，而以我国东北部的更为常见。马齿苋既可入药，又可食用，是我国卫生部划定的药食同源的野生植物之一。2015版《中华人民共和国药典》中收载马齿苋的干燥地上部分入药，具有清热解毒、凉血止血、止痢等功效，用于热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血、崩漏下血等。现代药理学研究表明，马齿苋具有降血脂、降血糖、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、松弛或兴奋平滑肌及增强免疫力等功效。研究表明马齿苋中所含多种化学成分与其多样的药理作用息息相关，其主要化学成分包括：黄酮类、生物碱类、萜类、香豆素类、有机酸类、挥发油、多糖、氨基酸、各种色素类和矿物质类等。其中生物碱是马齿苋中的一大类活性成分，而酰胺类生物碱又占绝大多数。目前已报道的生物碱类成分有去甲肾上腺素、多巴胺、少量多巴、腺苷、尿嘧啶、腺嘌呤、N，N-二环己基脲、尿囊素、N-反式-阿魏酰基酪胺；还有环二肽生物碱和酰胺类生物碱：马齿苋酰胺A-I、K、L、N-S。目前从马齿苋中分离出的化学成分大多数是已知的，且结构一种性较低，因此，对马齿苋中新化合物的开发和分离是亟待需要的。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供从马齿苋中提取的一种生物碱化合物，经研究发现本专利技术的一种生物碱具有抗肿瘤、神经保护的作用，同时提供一种针对本专利技术一种生物碱化合物的简便、快速、环保、纯度高的提取分离方法。为实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供一种马齿苋中二氢吲哚羧酸类生物碱，分子式分别为C9H9NO4，化学名为4,5-dihydroxyindoline-1-carboxylicacid，化学结构式为。为实现本专利技术的上述目的，本专利技术还提供马齿苋中一种二氢吲哚羧酸类生物碱的提取分离方法，具体步骤为。步骤1、取马齿苋干燥药材，采用水提取(水用量为药材的8～16倍)两次，水提液滤过，合并滤液直接加热浓缩，放凉至室温，得药液备用。步骤2、将步骤1中药液蒸干后上硅胶柱，用乙酸乙酯洗脱，减压回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯提取物；步骤3、将步骤2中乙酸乙酯提取物经聚酰胺柱分离，采用乙醇-水梯度洗脱，水和30％醇部蒸干后上硅胶柱，依次用乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩至干，备用；步骤4、将步骤3中所得物经聚酰胺柱分离，采用乙醇-水梯度洗脱，30％乙醇部蒸干，备用；步骤5、将步骤4中所得物经预处理的ODS柱(Octadecylsilyl，十八烷基硅烷键合硅胶填料)层析分离，用甲醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，将各显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得到浓缩物备用；步骤6、将步骤5中所得物再经预处理的葡聚糖凝胶柱(SephadexLH-20)层析分离，用甲醇洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩至干，备用；步骤7、对步骤6中所得浓缩物进行HPLC(高效液相)分离制备，以乙腈和0.1％甲酸作为流动相，制备得到一种二氢吲哚羧酸类生物碱化合物。所述ODS和SephadexLH-20凝胶的预处理过程为甲醇浸泡过24小时，上柱，用甲醇洗至滴入水中无混浊，再以初始流动相平衡。与现有技术相比本专利技术的有益效果。本专利技术中所述马齿苋中的二氢吲哚羧酸类生物碱的分离和药理活性研究未被现有论文期刊所报道；本专利技术提供来源于马齿苋的新生物碱类化合物及一种针对本专利技术新化合物的提取分离方法，依次采用水煎煮提取、硅胶柱层析、聚酰胺柱、ODS中压柱、SephadexLH-20及高效液相色谱仪进行分离纯化与制备，成功提取分离出新化合物，该方法操作步骤仅为七步，操作方法简便及快速，提取分离过程主要采用水提取及乙酸乙酯洗脱，工艺方法环保，且经该方法分离得到的化合物纯度较高均大于90％，此外经研究表明此化合物具有抗肿瘤、神经保护作用，因此本专利技术新化合物及其盐和衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发和药理活性研究的原料，亦可用于制备抗肿瘤、神经保护的药物。附图说明图1为本专利技术新生物碱化合物的1H-NMR光谱图。图2为本专利技术新生物碱化合物的13C-NMR光谱图。图3为本专利技术新生物碱化合物的核磁共振碳谱(DEPT)光谱图。图4为本专利技术新生物碱化合物的核磁共振1H-1HCOSY光谱图。图5为本专利技术新生物碱化合物的核磁共振HMBC光谱图。图6为本专利技术新生物碱化合物的核磁共振HSQC光谱图。图7为本专利技术新生物碱化合物的核磁共振ROESY光谱图。图8为本专利技术新生物碱化合物的高分辨质谱图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做详细的说明。实施例1。本专利技术提供马齿苋中一种二氢吲哚羧酸类生物碱，分子式为C9H9NO4，化学名为4,5-dihydroxyindoline-1-carboxylicacid，化学结构式为。表1为该一种生物碱化合物的核磁数据：1H-NMR与13C-NMR在氘代DMSO中。表1本专利技术新生物碱化合物的核磁数据本专利技术马齿苋中一种二氢吲哚羧酸类生物碱的结构鉴定与推导。4,5-dihydroxyindoline-1-carboxylicacid：棕褐色粉末状物，易溶于甲醇，不溶、微溶于水。点样于硅胶薄层板后，喷稀碘化铋钾试液斑点显橘黄色，提示该化合物为生物碱成分。HR-ESI(-)-TOF-MS给出m/z:194.0465的[M-H]-的准分子离子峰，分子量为195.0532，结合1H-NMR，13C-NMR以及DEPT数据，推测该化合物可能的分子式为C9H9NO4，不饱和度为6。13C-NMR谱和DEPT谱显示9个碳信号，分别为2个CH2(δ：26.48，39.60)、2个CH(δ：116.63，119.35)、5个季碳(1个羰基碳，δ：170.00；4个烯烃碳，δ：111.18，128.96，144.03，149.78)1H-NMR谱显示化合物具有2个CH2信号分别为δ2.76(2H，t，J＝6.72Hz),δ3.35(2H，td，J＝6.82，2.34Hz)；2个CH信号δ6.52(1H，d，J＝7.92Hz)，δ6.84(1H，d，J＝7.86Hz)。根据1H-1HCOSY谱可知，2个CH2中的δ2.76和δ3.35相耦合，2个CH中δ6.52和δ6.84相耦合；HMBC谱显示芳香质子H-6与烯季碳C-3a，C-4，C-5，C-7a相耦合，芳香质子H-7与烯季碳C-3a，C-4，C-5，C-6，C-7a相耦合，可以确定存在四取代苯环，且C4(δ149.78)，C5(δ144.03)位于低场，以及活泼氢δ8.36，δ8.98的存在，证明C-4，C-5分别与羟基相连。此外，HMBC谱显示H-2与C-2,C-3a，C-7a相耦合，H-3与C-2,C-3,C-3a，C-4，C-7a相耦合，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种从马齿苋药材中分离出的二氢吲哚羧酸类生物碱化合物，其特征在于，分子式为：C9H9NO4，化学名为4,5‑dihydroxyindoline‑1‑carboxylic acid，其化学结构式如下：
【技术特征摘要】
1.一种从马齿苋药材中分离出的二氢吲哚羧酸类生物碱化合物，其特征在于，分子式为：C9H9NO4，化学名为4,5-dihydroxyindoline-1-carboxylicacid，其化学结构式如下：。2.如权利要求1所述生物碱化合物的提取分离方法，其特征在于，具体步骤为：步骤1、取马齿苋干燥药材，采用水煎煮提取，放凉至室温，得药液备用；步骤2、将步骤1中药液蒸干后上硅胶柱，用乙酸乙酯洗脱，减压回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯提取物；步骤3、将步骤2中乙酸乙酯提取物经聚酰胺柱分离，采用乙醇-水梯度洗脱，水和30%醇部蒸干后上硅胶柱，依次用乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩至干，备用；步骤4、将步骤3中所得物经聚酰胺柱分离，采用乙醇-水梯度洗脱，30%乙醇部分蒸干，备用；步骤5、将步骤4中所得物经预处理的ODS柱（Octadecylsilyl，十八烷基硅烷键合硅胶填料）层析分离，用甲醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，将各显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得到浓缩物备用；步骤6、将步骤5中所得物再经预处理的葡聚糖凝胶柱（SephadexLH-20）层析分离，用甲醇洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，...
【专利技术属性】
技术研发人员：英锡相，徐纹，张文洁，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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