【技术实现步骤摘要】
一种许氏平鲉精液超低温冷冻保存方法
本专利技术属于鱼类低温生物学
,涉及一种在超低温状态下(-196℃)冷冻保存鱼类配子的方法。
技术介绍
许氏平鲉(Sebastesschlegelii)隶属鲉形目(Scorpaeniformes)、平鲉科(Sebastidae)、平鲉属(Sebastes),是一种营体内受精的卵胎生硬骨鱼类,其肉质鲜美,口感极佳,营养丰富,在国内有“黑石斑”的美称,在海外亦深受欢迎。国内主要见于黄渤海及东海海域,国外常见于朝鲜半岛、日本及鄂霍次克海海域。因海区采捕野生许氏平鲉数量有限,其人工繁殖技术需待进一步的发展,但在繁殖季节,由于其精液量少、粘稠,雌雄性腺发育不同步,交配后,精子储存在卵巢中数月后,才可进行受精等原因,使得同时获得成熟精子和成熟卵子较为困难,为许氏平鲉的人工育种工作带来很多困难,严重阻碍了其人工繁殖、苗种大量培育和养殖推广。超低温冷冻保存技术具有良好的发展前景,越来越受到人们的重视,将其运用到鱼类精液保存上,不仅能保护其遗传多样性,在鱼类的雌核发育、人工繁殖、杂交育种等方面也具有重要的作用。自上世纪50年代Blaxter首次成功冷冻保存太平洋鲱鱼(Clupeaharengus)精巢起,已有近300种鱼类精液被成功冷冻保存,其中有200多种淡水鱼和40多种海水鱼。但主要是针对营卵生繁殖的鱼类,而对于营卵胎生繁殖鱼类精液冷冻保存的研究报道甚少,苏新有等(2007)对淡水观赏玛丽鱼(Poecilialatipinna)精子超低温冷冻保存进行了研究,孙春丽等(2007)对淡水观赏孔雀鱼(Poeciliareticulat ...
【技术保护点】
1.一种许氏平鲉精液超低温冷冻保存方法,其特征在于按照以下步骤进行:1)许氏平鲉精液采集及活力检测:解剖性成熟的许氏平鲉雄鱼获得精巢,用镊子挤压精巢及输精管,沾取精液于激活液中激活后,立即在光学显微镜下观察精子活力,将精子活力达90%以上的精液用于超低温冷冻保存;2)精液稀释液配制:在每升蒸馏水中加入氯化钠3.775g、葡萄糖10g、牛血清蛋白10g、土霉素5g,渗透压约为300mOsmol/kg;pH约为7.7;3)冷冻保护液配制:在精液稀释液中加入10%的二甲基亚砜(DMSO),并放入4℃备用;4)精液与冷冻保护液混合:取精液5μL与冷冻保护液以1:20‑1:25的比例混合装入冻存管中,漩涡震荡混匀;5)平衡和冷冻保存:将装有混合液的冻存管在4℃平衡20min,置液氮面上方10cm,平衡12min,液氮面平衡6min后,投入液氮中冷冻保存;或采用程序降温仪降温冷冻保存:将装有混合液的冻存管在4℃平衡20min,以25℃/min的冷冻速率由4℃降温至‑80℃,在‑80℃平衡5min,以20℃/min的降温速率降至‑180℃,由程序冷冻仪取出后直接投入液氮罐保存;6)解冻及精液活力检测 ...
【技术特征摘要】
1.一种许氏平鲉精液超低温冷冻保存方法,其特征在于按照以下步骤进行:1)许氏平鲉精液采集及活力检测:解剖性成熟的许氏平鲉雄鱼获得精巢,用镊子挤压精巢及输精管,沾取精液于激活液中激活后,立即在光学显微镜下观察精子活力,将精子活力达90%以上的精液用于超低温冷冻保存;2)精液稀释液配制:在每升蒸馏水中加入氯化钠3.775g、葡萄糖10g、牛血清蛋白10g、土霉素5g,渗透压约为300mOsmol/kg;pH约为7.7;3)冷冻保护液配制:在精液稀释液中加入10%的二甲基亚砜(DMSO),并放入4℃备用;4)精液与冷冻保护液混合:取精液5μL与冷冻保护液以1:20-1:25的比例混合装入冻存管中,漩涡震荡混匀;5)平衡和冷冻保存:将装有混合液的冻存管在4℃平衡2...
【专利技术属性】
技术研发人员:齐鑫,李键爽,温海深,李吉方,王孝杰,吕里康,张莹,
申请(专利权)人:中国海洋大学,
类型:发明
国别省市:山东,37
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