一种茶杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种茶杆菌及其应用。本发明专利技术所提供的茶杆菌T8分离自陈熟普洱茶，保藏号为CGMCC No.13438。依据多相分类学方法，该菌株是芽孢杆菌科的一个新属，依据国际细菌系统分类委员会的命名方法，将其命名为Camelliibacillus theae gen.nov.sp.nov.。本发明专利技术所提供的茶杆菌产芽孢，易培养。该新属新种的发现和利用丰富了我们的可利用微生物资源。本发明专利技术所提供的茶杆菌新菌种具有酯酶及胰凝乳蛋白酶，为酯酶及胰凝乳蛋白酶在在食品、医药和化工等行业应用提供菌种资源。

A Tea Bacterium and Its Application

The invention relates to a tea bacillus and its application. The tea Bacillus T8 provided by the invention is separated from mature Pu'er tea and its storage number is CGMCC No. 13438. According to the multiphase taxonomy, the strain is a new genus of Bacillus family. According to the nomenclature method of the International Committee on Bacteriological Systematic Classification, it is named Camelliibacillus theae Gen. Nov. sp. Nov. The tea Bacillus provided by the invention produces spores and is easy to cultivate. The discovery and utilization of this new genus and species enrich our available microbial resources. The new strain of tea Bacillus provided by the invention has esterase and chymotrypsin, and provides strain resources for the application of esterase and chymotrypsin in food, medicine and chemical industries.

【技术实现步骤摘要】
一种茶杆菌及其应用
本专利技术涉及一种茶杆菌及其应用。
技术介绍
多相分类的概念最初由Colwell于1970年提出，是指利用微生物多种不同的信息，包括表型的、基因型的和系统发育的信息，综合起来研究微生物分类和系统进化的过程。产芽孢的细菌包含很多有特殊功能的菌株，在工业、农业和医学等领域中成为人们极为关注的一个微生物类群。采用现代分类手段对产芽孢细菌进行分类研究并对其生理生化特性进行探索，可获得一些生产应用或者潜在应用价值的菌株。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种茶杆菌，该芽孢杆菌为SEQIDNO.1所示的碱基序列。本专利技术的目的之二在于提供该茶杆菌在液体发酵生产酯酶和胰凝乳蛋白酶中的应用。为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种茶杆菌，于2017年3月1日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13438。上述的茶杆菌的形态为：圆形菌落，边缘粗糙，表面光滑湿润，半透明，中间凸起，乳白色，属革兰氏阳性菌，该菌体的形态为产芽孢的短杆。上述的茶杆菌的16SrDNA为SEQIDNO.1所示的碱基序列。一种上述的茶杆菌在液体发酵生产酯酶及胰凝乳蛋白酶中的应用。上述的茶杆菌的培养方法为：将茶杆菌T8CGMCCNo.13438接种于培养基中，在20～60℃，pH6.5～8.0的条件下进行培养。上述最适培养温度为37-45℃。上述最适pH为7.0～7.5。上述的培养的培养基中还包括质量百分比浓度不超过3％的NaCl。上述的培养在需氧条件下进行。本专利技术所述的培养可以是各种微生物的培养方式，比如液体培养、固体培养、半固体培养等，可以是摇床培养，也可以是发酵罐深层发酵，优选的摇床培养。本专利技术所述的培养的接种量为常规，所述百分比为体积百分比。本专利技术所述的培养基为常规培养基，优选是TSB培养基。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术提供了一个新的分类单元，茶杆菌新属的一个新种，依照国际细菌系统分类委员会的命名方法，欲将该种命名为Camelliibacillustheaegen.nov.sp.nov.。该新种的发现和利用丰富了我们的可利用微生物资源。本专利技术的茶杆菌T8，可提取酯及胰凝乳蛋白酶，在食品、医药和化工等行业具有广泛应用。生物材料保藏信息：本专利技术的茶杆菌T8，已于2017年3月1日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。该菌株的保藏编号为：CGMCCNo.13438。该菌株的分类命名是芽孢杆菌Bacillussp.，名称为T8。附图说明图1显示本专利技术茶杆菌新菌株T8的16SrRNA系统发育进化树。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。本专利技术中所述的室温是指进行试验的操作间的温度，一般为25℃。实施例1、本专利技术新菌株T8的分离制备取普洱熟茶浸出液，将其稀释涂布于LB固体培养基中，30℃培养2天，挑取单菌落，然后划线纯化得到。将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其保藏编号为CGMCCNo.13438。实施例2、本专利技术新菌株T8的表观特征1.菌落特征取菌株T8的单菌落，转接到TSA固体培养基上，于37℃恒温培养箱中培养48h，观察其菌落的大小、颜色、边缘、凸起、光滑度、粘性、透明度等特点。结果显示，菌株T8在TSA固体培养基上形成边缘粗糙，表面光滑湿润，半透明，中间凸起，乳白色的圆形菌落，直径约1mm。2.细胞形态学特征细胞为短杆状；革兰氏染色阳性；周生鞭毛，产芽孢，细胞菌体大小为0.5-0.7μm×1.7-2.5μm，单生。实施例3、本专利技术新菌株T8的生长特性挑取在TSA固体培养基上培养12h的新鲜培养物，接种到LB液体培养基，37℃摇床培养12h，作为种子。液体TSB培养基的组成(/L)：胰蛋白胨15g，NaCl5g，大豆蛋白胨5g，蒸馏水定容至1000ml。1.生长温度：将所培养的T8种子按2.5％(v/v)接种量转接新鲜的TSB液体培养基中，混匀。分别置于10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃和60℃的水浴培养，每个温度梯度做三个平行，每12h测定其生长情况。得知菌株T8-1生长温度范围为20～60℃，最适温度37～45℃。2.生长NaCl耐受性所培养的T8-1种子按2.5％(v/v)接种量转接氯化钠浓度分别为0.0％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％和6.0％的TYB培养基，37℃培养，分别于24h和48h的生长状态做记录。结果显示菌株T8的NaCl生长浓度为1％-3％。3.生长pH范围在最适生长盐浓度条件下，使用缓冲液分别将灭好菌的培养基调至pH值分别为3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0，其中pH3.5-6.0使用的是0.2mol/L的Na2HPO4和0.1mol/L的柠檬酸；pH6.5-8.0使用的是1/15mol/L的Na2HPO4和1/15mol/L的KH2PO4；pH8.5-10.0使用的是0.1mol/L的Na2CO3和0.1mol/L的NaHCO3。每个pH梯度的培养基为：20mL的pH缓冲液、0.1g胰蛋白胨、0.1g大豆蛋白胨、0.1g酵母粉；分装于5支试管，每支4mL。灭菌后分别接种2.0％的新鲜菌液于37℃摇床培养24小时观察其生长状态，确定菌株T8的生长pH范围为6.5～8.0，最适生长pH为7.0～7.5。实施例4、本专利技术新菌株T8的生理生化特性利用APIZYM和API20E鉴定系统(生产厂商：bioMe′rieux)及常规的生理生化测定方法(东秀珠，蔡妙英等，2001)对菌株T8及相关的同属菌株进行生理生化特征鉴定。其中APIZYM是一个半定量的微量方法系统，专为研究酶活所设计的。该技术对各种标本(组织、细胞、生物体液、洗涤水、土、油，等)都适用。它可系统和快速地研究19种酶的活性。用样量极少。实验步骤如下：1)样品准备：在最小体积稀释标本：可用2ml无菌蒸馏水或其它如普通的生理盐水不需要缓冲液。制备一个菌悬液，其混浊度在McFarlandNo5和No6之间。从斜面或离心肉汤培养物的纯菌种都能用来制备菌悬液。2)试验条的准备：准备一个培养盘和盖子。记标本号于盘的侧面。可使用一个塑料洗瓶，分装约5ml蒸馏水于培养盘内，为了培养时能保持一定的湿度。从密封的包装中取出APIZYM试验条，置培养盘内。3)试验条的接种：用吸管接种，于试验条的每个杯中接入2滴标本(65μl)。4)试验条培养：接种后，托盘上放塑料盖子，37℃培养4小时。所有的测定条件(时间、温度、培养基、悬液浓度)要保持一致。接种的试验条避光保存。5)试验条的结果观察：培养后，加1滴ZYMA试剂和1滴ZYMB试剂。5分钟后生色，如果是阳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种茶杆菌，于2017年3月1日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13438。

【技术特征摘要】
1.一种茶杆菌，于2017年3月1日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13438。2.根据权利要求1所述的茶杆菌，其特征在于该茶杆菌的形态为：圆形菌落，边缘粗糙，表面光滑湿润，半透...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛莉莉，张娟，王美文，蒋呈燕，向阳泉，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：上海,31