一株耐镉肠菌株及吸附镉的方法技术

本发明专利技术公开了一株从矿山土壤分离、纯化、驯化得到的肠杆菌（Enterobactersp.）FM‑1，于2017年12月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号CCTCC M2017825。包括取土、培养土壤，获得初提液，再用LB液体培养基富集培养、用LB固体培养基纯化培养，最后将单菌落接种于含镉的LB平板培养基进一步驯化培养等步骤，获得对镉具有高耐受性的肠杆菌FM‑1。肠杆菌FM‑1对镉具有较好的耐受性和吸附特性，在含4 mmol L

【技术实现步骤摘要】
一株耐镉肠菌株及吸附镉的方法
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种肠杆菌及其吸附镉的方法。
技术介绍
我国土壤重金属污染严重，其中以镉为主要污染物的土地大约占一半左右。镉污染土壤修复的方法主要有物理法，如土壤淋洗法、换土法、电动处理法、玻璃化等。这些方法往往技术要求高、成本大，不适合大面积的污染土壤修复。化学法，如添加沸石、石灰、粉煤灰、生活垃圾等；这些方法往往对环境影响大、去除效果差，系统稳定性差等特点。而生物法因其具有对环境友好，不产生二次污染，且可持续等特点而备受关注。其中，利用微生物改变土壤中镉的形态，改善根际环境，从而促进植物修复土壤中的镉，成为目前研究的热点。如公开号为CN106967657A的专利公开了一种用于强化萎篙修复镉污染土壤的混合促生菌及其制备方法与应用的方法；公开号为CN107603893A的专利公开了一种对镉具有高抗性的紫胞菌及提取方法和应用，其对镉的耐受性只有16mmolL-1。微生物和植物的联合作用往往具有选择性，耐镉微生物种质资源的获得是微生物-植物联合修复中亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种对镉有较好耐受性和吸附特性的肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1，并提供该肠杆菌筛选的方法，以及用该肠杆菌吸附镉的方法。本专利技术所提供的肠杆菌(Enterobactersp)，名称为肠杆菌FM-1(Enterobactersp.FM-1)，已于2017年12月22日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国湖北省武汉市2武昌区八一路珞珈山)，保藏号为CCTCCM2017825。本专利技术所述肠杆菌FM-1是一株筛选自矿山土壤的菌株，从广西壮族自治区贺州宁贺锰矿采矿区表层土壤筛选出来的。筛选方法步骤如下：1、菌株的获得(1)取土：取矿区表层土，自然风干，过1-2mm筛，用于微生物的筛选。(2)菌株初提夜制备：取上述风干、过筛土少量，在无菌操作下加入装有一定量的无菌水的三角瓶中，制得土壤初提液。(3)菌株富集：取适量土壤初提夜，接种于LB液体培养基，在恒温摇床上振荡，然后稀释到不同浓度梯度。富集培养基配制方法为，每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，灭菌，自然pH。(4)菌株纯化：将富集培养物稀释后，取少量样品均匀涂布于LB平板培养基上。然后，将培养皿倒放于20-40℃恒温箱培养3-5d，观察菌株生长情况及统计菌落数；用划线法挑取长势较好的菌株划线分离，在20-40℃下倒置培养，获得纯培养。纯化培养的培养基配制方法为每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，琼脂18-20gL，灭菌，自然pH。培养温度15-45℃，(5)菌株驯化：将上述获得的纯培养，活化6-12h后，接种于含镉(5-30mmolL-1)LB固体培养上，再在20-40℃的培养箱中倒置培养2-3d，获得耐镉菌株。驯化培养基配制方法为每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，琼脂18-20g，镉5-30mmol，灭菌，自然pH。培养温度15-45℃。(6)菌株保存：将驯化后的菌用LB斜面培选择养基保存于冰箱。LB斜面选择培养基的配制方法为每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，琼脂18-20g，镉2.5-25mmol，灭菌，自然pH，琼脂18-22g，灭菌，自然pH。2、菌株的鉴定(1)形态特征鉴定用显微镜进行菌株的形态观察，发现菌落呈圆形，乳白色，不透明，粘稠，表面湿润，边缘光滑整齐。用扫描电镜观察，发现该菌体呈细杆状，长度在0.70-1.26μm之间。(2)分子鉴定对所获得的菌株进行16SrRNA基因序列进行分析。该工作委托中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国湖北省武汉市2武昌区八一路珞珈山)完成。测定的序列结果在https://www.ezbiocloud.net上进行比较分析，用MEGA5.0软件构建系统发育树，菌株与肠杆菌(Enterobactersp.)相似性达98.6％，在系统发育树上比较亲缘关系相近，最终将该菌归属于肠杆菌属，并命名为肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1。3、菌株的耐受特性本专利技术所述肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1对镉具有较好的耐受性。将上述1(6)保存的菌株，活化6-12h后，接种于含镉(2.5-60mmolL-1)培养基上，再在20-40℃的培养箱中倒置培养2-3d，测定其耐镉特性。耐镉测试培养基的配制为每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，琼脂18-20g，镉0-60mmol，高压蒸汽灭菌，自然pH，培养温度15-45℃。该菌可耐受40mmolL-1镉。4、菌株对镉的吸附特性及吸附条件优化本专利技术所述肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1对镉具有较好的吸附特性。将上述1(6)保存的菌株，活化6-12h后，接种于LB液体悬浮培养基。培养基配制方法为每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，琼脂18-20g，灭菌，自然pH。控制吸附条件为：培养基pH2-9，镉初始浓度为0-16mmolL-1，培养温度15-45℃。肠杆菌的优化培养条件为：镉初始浓度为4mmolL-1，培养基pH为7，培养温度为30℃。镉的最高吸附率(去除率)达到80.36％，此时吸附量为190.45mgg-1。附图说明图1肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1单菌落形态；图2肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1电镜扫描图片；图3肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1镉耐受性测试生长图。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置3次重复实验，结果取平均值。实施例1第一部分：肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1获得一、肠菌株的获得(1)取土：土壤采自广西壮族自治区贺州宁贺锰矿采矿区表层土。具体步骤如下，采用随机采样法，用土钻采取0-10cm土壤样品20个，带回实验室，风干，混合均匀后过1mm筛，备用。(2)初提夜制备：取上述(1)土壤10g，在无菌操作下加入装有90ml的无菌水的三角瓶中，30℃恒温箱震荡培养箱，震荡培养10min，制得土壤初提液。(3)菌株富集：取上述(2)土壤初提夜1.0ml，接种于50mlLB液体培养基，在30℃，150rmin-1下振荡培养5d获得富集培养物。富集培养基的配制为每升培养基含牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl5g，121℃高压蒸汽灭菌20min，自然pH。(4)菌株纯化：将富集培养物稀释10-4、10-5、10-6、10-7浓度梯度。取稀释富集培养物0.1ml均匀涂布于LB平板培养基上。将培养皿倒放于30℃恒温箱培养4d，观察菌株生长情况及统计菌落数；用划线法挑取长势较好的菌株划线分离，在30℃下倒置培养，获得纯培养。纯化培养的培养基配制方法为每升培养基含牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl5g，琼脂20g，121℃高本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐受镉的肠杆菌(Enterobacter sp.)FM‑1，保藏号CCTCC M2017825。

【技术特征摘要】
1.一种耐受镉的肠杆菌(Enterobactersp.)FM-1，保藏号CCTCCM2017825。2.一种如权利要求1所述肠菌株的获得方法，其特征在于：包括取土、初提、富集、纯化、驯化和保存。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述取土的土壤为矿山表层土壤；所述初提是取少量土壤，无菌操作下加入装有无菌水的容器中，制得土壤初提夜；所述富集是取土壤初提夜，接种到LB液体培养基进行富集培养，得富集物；所述富集培养方法为，每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，灭菌，自然pH，培养温度15-45℃。4.根据权利要求2所述的方法，所述纯化，取富集物稀释后用LB固体培养基进行纯化培养；所述纯化培养方法为每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，琼脂18-20g，灭菌，自然pH，培养温度15-45℃。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述驯化培养方法为每升培养基含牛肉膏4-6g、蛋白胨8-12g、NaCl4-6g，琼脂18-20g，镉5-30mmol，灭菌，自然pH，培养温度15-45℃。6.根据权利要求2所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：于方明，刘可慧，周振明，李艺，陈朝述，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：广西,45