本发明专利技术公开了3,7‑二对甲苯胺基‑吩噻嗪‑5‑鎓碘化物与超声协同在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。本发明专利技术采用对称合成的方法，以二氯甲烷为反应溶剂，加入适量吩噻嗪和碘，反应得到中间产物吩噻嗪‑5‑鎓四碘化物。再以甲醇为反应溶剂，加入一定量吩噻嗪‑5‑鎓四碘化物和对甲苯胺，用薄层层析随时检测反应是否完全，最终得到3,7‑二对甲苯胺基‑吩噻嗪‑5‑鎓碘化物(PAB)。产物采用硅胶柱梯度洗脱进行纯化，得到PAB纯品。有、无超声情况下，本发明专利技术制备的PAB对K562细胞的平均增殖抑制率分别为55.4％和21.5％，单独超声对K562细胞增殖的抑制率为13.4％，说明PAB与超声可产生协同抑制肿瘤细胞增殖作用。
【技术实现步骤摘要】
3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物与超声协同在抑制肿瘤细胞增殖中的应用
本专利技术涉及抗肿瘤领域，具体的涉及一种亚甲蓝衍生物——3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物协同超声在抑制肿瘤细胞增殖方面的应用。
技术介绍
肿瘤严重危害人类健康，传统的治疗方法存在诸多不足。声动力疗法(Sonodynamictherapy，SDT)作为一种有前景的肿瘤非入侵疗法受到国内外研究者的广泛关注，已有大量学者报道了不同声敏剂介导的SDT对肝癌细胞、肺癌细胞、白血病细胞、肉瘤细胞、黑色素瘤细胞等具有声动力损伤作用，同时探讨了声敏剂协同超声损伤细胞的机制。目前，尽管已有将SDT用于临床治疗肝癌、乳腺癌的案例，但尚未被推广，在我国也只是开展了SDT治疗脑胶质瘤的临床试验。因此，寻找更高活性声敏剂是推动SDT广泛用于抗肿瘤临床的关键因素之一。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物(PAB)与超声协同在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物在制备抑制肿瘤细胞增殖药物中的应用。进一步的，3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物作为声敏剂协同超声在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。更进一步的，所述的超声是：控制温度25℃，超声处理时间为1min，超声功率为200W，超声频率为40KHz。本专利技术中，所述的3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物具有如(Ⅰ)所示结构式：上述的3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物的制备方法，包括如下步骤：1)室温下，将碘的二氯甲烷溶液缓慢滴加到吩噻嗪的二氯甲烷溶液中，搅拌22-24h，抽滤，所得沉淀用二氯甲烷洗涤，得中间产物吩噻嗪-5-鎓四碘化物；2)室温下，将对甲苯胺的甲醇溶液缓慢滴加到吩噻嗪-5-鎓四碘化物的甲醇溶液中，继续搅拌，以薄层色谱法判断反应终点，产物抽滤后，分别用盐酸和蒸馏水洗涤，得3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物粗产物；3)将3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物粗产物用硅胶柱层析洗脱，收集洗脱液，得纯化的3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物。进一步的，步骤1)中，按摩尔比，吩噻嗪:碘＝1:2。进一步的，步骤2)中，按摩尔比，吩噻嗪-5-鎓四碘化物:对甲苯胺＝1:14。进一步的，步骤3)中，将3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物粗产物采用硅胶柱进行梯度洗脱，按体积比，先用甲醇:二氯甲烷＝1:100的洗脱剂进行洗脱，薄层色谱法判断终产物出现时，换甲醇:二氯甲烷＝1:50的洗脱剂继续洗脱，收集该洗脱液，即为3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物纯品。本专利技术的有益效果是：本专利技术，以3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物作为声敏剂被超声激活，借助产生的活性氧等物质引起的声化学反应，证实其可与超声协同，发挥协同抑制肿瘤细胞增殖作用。附图说明图1为不同浓度PAB单独使用对K562细胞增殖的抑制作用。图2为超声前后PAB对K562细胞增殖的抑制作用。具体实施方式下面通过具体实例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1(一)3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物(PAB)制备方法如下1、中间体吩噻嗪-5-鎓四碘化物的合成称取2.0860g(0.010mol)吩噻嗪置于烧杯中，向烧杯中加入100ml二氯甲烷进行搅拌溶解，得到黄绿色吩噻嗪的二氯甲烷溶液，再将其转移至1000ml茄形瓶中。称取8.4056g(0.033mol)碘固体于烧杯中，向烧杯中加入400ml二氯甲烷进行搅拌溶解，得到紫红色碘的二氯甲烷溶液，分次加入滴液漏斗中。于室温下，向吩噻嗪的二氯甲烷溶液中缓慢滴加碘的二氯甲烷溶液，边滴加边搅拌。滴加完于常温下继续搅拌24h，可观察到黄绿色反应物溶液颜色逐渐发生变化，最终呈深棕色。用薄层板检测反应，展开剂选择甲醇:二氯甲烷＝1:30，出现清晰的绿色斑点即反应完全。反应结束后，对溶液进行抽滤得到深灰色固体。将此深灰色固体加入含100ml二氯甲烷的茄形瓶中，连续搅拌16h进行洗涤。之后进行抽滤，得到银灰色固体，干燥，得中间体吩噻嗪-5-鎓四碘化物，产率82％。2、3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物(PAB)的合成称取2.1945g(0.003mol)中间体吩噻嗪-5-鎓四碘化物于烧杯中，用200ml甲醇使其溶解，得吩噻嗪-5-鎓四碘化物的甲醇溶液。称取0.042mol的对甲苯胺，用30ml甲醇溶解，得对甲苯胺的甲醇溶液。室温下，向吩噻嗪-5-鎓四碘化物的甲醇溶液中缓慢滴加对甲苯胺的甲醇溶液，采用薄层板检测反应是否完全，选择的展开剂是体积比为1:30的甲醇与二氯甲烷，若反应完全可见到清晰蓝色斑点。反应完成后将产物溶液抽滤，滤液旋蒸得到固体物，再用50ml二氯甲烷将此固体物溶解，置于分液漏斗，加入50ml体积分数为5％的稀盐酸溶液洗涤两次，振荡后静置，使其分层，将收集到的下层溶液用适量蒸馏水洗涤两次，并加入无水硫酸钠适量干燥，避光放置24h。最后将其抽滤，滤液旋蒸得到深蓝色PAB粗产物。3、纯化将PAB粗产物采用硅胶柱进行梯度洗脱，按体积比，先用甲醇:二氯甲烷＝1:100的洗脱剂进行洗脱，薄层色谱法判断终产物出现时，换甲醇:二氯甲烷＝1:50的洗脱剂继续洗脱，收集该洗脱液，即为纯化的PAB。所述的PAB的分子式为C26H22N3SI，M＝535.06，深蓝色粉末。1H-NMR(600MHz，CDCl3)；7.36(s，2H)，7.18(d，J＝6.9Hz，4H)，7.02(s，6H)，6.82(s，2H)，5.31(s，2H)，2.37(s，6H)。ESI-MSm/z：409.3[M+H]+。(二)3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物协同超声对K562细胞的增殖抑制效应1、实验溶液的配制1)PBS缓冲液(pH7.2-7.4)的配制：取PBS磷酸盐缓冲剂，加水溶解并稀释至1000ml，即为0.01mol/L的PBS缓冲液(pH7.2-7.4)，高压灭菌后常温保存。2)MTT溶液的配制：称取MTT粉末0.25g加入0.01mol/L的PBS缓冲液(pH7.2-7.4)100ml超声低温溶解，然后用0.22μm微孔滤膜过滤分装，-20℃避光保存。3)PAB溶液配制：称取PAB适量，用少量DMSO溶解后，用无血清RPMI1640培养基稀释至10ml，配制成1000μmol/L的PAB溶液，4℃密封贮存备用。2、实验步骤和仪器测试条件1)细胞培养：将K562细胞株接种于含15％胎牛血清、1％双抗的RPMI1640培养基中，在37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养，实验所用为对数生长期细胞。2)不同浓度PAB对K562细胞增殖的影响方法：取对数生长期的K562细胞，离心(1000rpm，5min)后弃掉上清液，取3mlRPMI1640培养基吹悬细胞。取细胞悬浮液10μl，用血球板计数法进行计数并调整细胞密度为5×104cells/ml。移取细胞悬浮液于96孔板，每孔加细胞悬浮液100μl，然后置于培养箱中孵育24h。进行MTT实验时每孔加药100μl，药物最终浓度分别为50.0、25.0、12.5、6.25和3.125μmol/L，对照组加本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.3,7‑二对甲苯胺基‑吩噻嗪‑5‑鎓碘化物在制备抑制肿瘤细胞增殖药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物在制备抑制肿瘤细胞增殖药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物作为声敏剂协同超声在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的超声是：控制温度25℃，超声处理时间为1min，超声功率为200W，超声频率为40KHz。4.根据权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于，所述的3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物具有如(Ⅰ)所示结构式：5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的3,7-二对甲苯胺基-吩噻嗪-5-鎓碘化物的制备方法，包括如下步骤：1)室温下，将碘的二氯甲烷溶液缓慢滴加到吩噻嗪的二氯甲烷溶液中，搅拌22-24h，抽滤，所得沉淀用二氯甲烷洗涤，得中间产物吩噻嗪-5-鎓四碘化物；2)室温下，将对甲苯胺的甲醇溶液缓慢滴加到吩噻嗪-5-鎓四碘...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘彬，高博，王新，王晓芳，景姣姣，赵洪锐，徐亮，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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