一种检测含有糖链生物分子的试剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种检测含有糖链生物分子的试剂及其制备方法和应用，属于功能化高分子材料技术领域。一种检测含有糖链生物分子的试剂，原料包括以下物质：树枝状聚合物、含有硼酸和

A Reagent for Detecting Biomolecules Containing Sugar Chain and Its Preparation and Application

The invention provides a reagent for detecting biological molecules containing sugar chains, a preparation method and application thereof, belonging to the technical field of functional polymer materials. A reagent for detecting biological molecules containing sugar chains is prepared from dendrimers, boric acid and boric acid.

【技术实现步骤摘要】
一种检测含有糖链生物分子的试剂及其制备方法和应用
本专利技术属于功能化高分子材料
，具体涉及一种检测含有糖链生物分子的试剂及其制备方法和应用。
技术介绍
生物分子广泛存在着糖链修饰，例如，糖类、核苷、核苷酸、糖基化蛋白、糖基化肽段等，它们在细胞信号传导、代谢调节、免疫功能调控等重要的生命过程中扮演着作用，许多含有糖链的生物分子是疾病、甚至癌症的发生、发展的生物标记物或药物治疗靶点，如胚胎抗原、组织特异性抗原等，又如E-钙黏蛋白的表达水平与肿瘤侵袭能力密切相关。因而，发展可对含有糖链的生物分子进行直接检测的方法对于癌症的早期预警、靶向治疗等具有重要意义。硼酸亲和色谱的作用原理是利用硼酸基团与1,2或1,3-邻二羟基化合物的可逆性相互作用。在高pH值下，硼酸基团可以与1,2或1,3-邻二羟基化合物形成环状酯，该酯在低pH值下可以发生可逆的解离。利用这种可逆性相互作用来实现糖类、糖蛋白、糖肽、核苷、核苷酸等具有1,2或1,3-邻二羟基结构的重要生物分子分离分析的功能材料越来越受到了广泛关注。目前，采用上述硼酸亲和色谱的作用原理制备出多种富集材料，例如专利号为201210329785.8、201310096122.0和201410856918.6等专利在磁性载体表面引入树枝状聚合物后再经硼酸功能化得到了树枝状硼酸功能化磁性微球，并用于含有顺式二羟基的生物分子，特别是糖蛋白的富集、纯化和分离。但该树枝状硼酸功能化磁性微球是基于固相的，只能用于基于固液分离的糖链生物分子的捕集，也就是说把溶液中的糖链生物分子从溶液中“抓”到固相载体上，再通过其他方式把“抓”到的糖链生物分子从该固相载体上洗脱下来，这样的方式不能实现糖链生物分子的直接检测。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测含有糖链生物分子的试剂及其制备方法和应用，利用所述试剂，可以对含有糖链的生物分子进行特异性、高灵敏度地定性和定量的检测，并且所述试剂的制备及应用方法简单、易行、省时、重复性好。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种检测含有糖链生物分子的试剂(A-D-B)，原料包括以下组分：树枝状聚合物(D)、含有硼酸和基官能团的化合物(B)以及含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)；其中R可为烷基、羟基、氢、卤素、烷氧基中的一种或多种；所述树枝状聚合物具有2个或2个以上胺基；所述含有硼酸和基官能团的化合物(B)可通过基与树枝状聚合物(D)上的胺基发生化学键合反应进行结合；所述含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)通过基与所述树枝状聚合物(D)上的胺基发生化学键合反应进行结合。优选的，树枝状聚合物(D)为聚酰胺-胺型树枝状聚合物或含聚酰胺-胺型树枝状聚合物的嵌段聚合物。优选的，聚酰胺-胺型树枝状聚合物为第二代到第十代中的一代或几代。优选的，含有基和可直接检测官能团的化合物(A)中所述可直接检测官能团为荧光官能团或发光官能团。优选的，所述荧光官能团含吖啶橙、吖啶黄、4',6-二脒基-2-苯基吲哚、荧光素、AlexaFluor系列染料、花青系列染料、罗丹明、德克萨斯红、邻苯二甲醛、香豆素类染料、尼罗红、俄勒冈绿色染料、碘化丙啶、级联蓝、荧光素酶、绿色荧光蛋白的结构或其衍生物中的一种或多种；所述发光官能团含鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯及吖淀酰胺类、金刚烷的结构或其衍生物中的一种或多种。优选的，含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)中可被间接检测官能团含生物素或亲和素的结构。优选的，所述含有硼酸和基官能团的化合物(B)包括对甲酰基苯硼酸及其衍生物。本专利技术还提供所述的试剂的制备方法，包括以下步骤：1)将树枝状聚合物(D)和含有硼酸和基官能团的化合物(B)通过基进行化学键合反应，得到硼酸功能化树枝状聚合物；2)将所述硼酸功能化的树枝状聚合物通过胺基与含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)的基进行化学键合反应，得到检测含有糖链生物分子的试剂。本专利技术提供了所述试剂或所述方法制备的试剂在含有糖链生物分子的富集、纯化、分离和检测中的应用。优选的，所述含有糖链生物分子为含有戊糖、己糖、甘露糖、半乳糖、山梨糖、岩藻糖、唾液酸糖型结构的生物分子或以上糖型衍生物的生物分子。本专利技术提供了一种检测含有糖链生物分子的试剂(A-D-B)，原料包括以下组分：树枝状聚合物(D)、含有硼酸和基官能团的化合物(B)和含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)；其中R可为烷基、羟基、氢、卤素、烷氧基中的一种或多种；所述树枝状聚合物(D)具有2个或2个以上胺基；所述含有硼酸和基官能团的化合物(B)可通过基与树枝状聚合物上的胺基发生化学键合反应进行结合；所述含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)通过基与所述树枝状聚合物上的胺基发生化学键合反应进行结合。本专利技术将含有硼酸官能团的化合物键合到了可溶的树枝状聚合物上，使本试剂具有了与含有糖链的生物分子结合的特点，同时在树枝状聚合物上键合了检测或被检测基团，实现了对含有糖链的生物分子的同步检测。同时本专利技术所提供的试剂可在100000倍的不含糖链的生物分子干扰下选择性检测含有糖链的生物分子；含有本检测试剂的溶液可反复多次使用，且储存得当的话，可在长达几个月的保存期内保持良好的性能；所述检测试剂制备及应用方法步骤简单、易行、成本低廉、条件温和、便于操作，非常适用于生物化学、食品检测、分析化学、检验化学、临床医药等领域中的推广和普及。附图说明图1为实施例1中检测含有糖链生物分子的试剂的红外表征图；图2为实施例7中检测含有糖链生物分子的试剂在高浓度非糖蛋白的干扰下对标准糖蛋白的选择性检测；图3为实施例8中检测含有糖链生物分子的试剂应用于聚偏氟乙烯(PVDF)膜上糖蛋白的免疫印记(WesternBlotting)检测时的稳定性；图4为实施例8中检测含有糖链生物分子的试剂对糖蛋白的定量准确性；图5为实施例9中检测含有糖链生物分子的试剂应用于微孔板中糖蛋白的检测(ELISA)；图6为实施例10中检测含有糖链生物分子的试剂应用于微孔板中糖蛋白检测时的标准曲线。具体实施方式本专利技术提供了一种检测含有糖链生物分子的试剂(A-D-B)，原料包括以下组分：树枝状聚合物(D)、含有硼酸和基官能团的化合物(B)以及含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)；其中R可为烷基、羟基、氢、卤素、烷氧基中的一种或多种；所述树枝状聚合物(D)具有2个或2个以上胺基；所述含有硼酸和基官能团的化合物(B)可通过基与树枝状聚合物上的胺基发生化学键合反应进行结合；所述含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物(A)通过基与所述树枝状聚合物上的胺基发生化学键合反应进行结合。本专利技术提供的检测含有糖链生物分子的试剂原料包括树枝状聚合物(D)。所述树枝状聚合物(D)含有2个或2个以上胺基。所述树枝状聚合物(D)优选为聚酰胺-胺型树枝状聚合物或含有聚酰胺-胺型树枝状聚合物的嵌段聚合物。所述聚酰胺-胺型树枝状聚合物优选为第二代到第十代中的一代或几代的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测含有糖链生物分子的试剂，原料包括以下物质：树枝状聚合物、含有硼酸和

【技术特征摘要】
1.一种检测含有糖链生物分子的试剂，原料包括以下物质：树枝状聚合物、含有硼酸和基官能团的化合物以及含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物；其中R可为烷基、羟基、氢、卤素、烷氧基中的一种或多种；所述树枝状聚合物具有2个或2个以上胺基；所述含有硼酸和基官能团的化合物通过基与树枝状聚合物上的胺基发生化学键合反应进行结合；所述含有基和可直接检测官能团的化合物或含有基和可被间接检测官能团的化合物通过基与所述树枝状聚合物上的胺基发生化学键合反应进行结合。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述树枝状聚合物为聚酰胺-胺型树枝状聚合物或含聚酰胺-胺型树枝状聚合物的嵌段聚合物。3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述聚酰胺-胺型树枝状聚合物为第二代到第十代中的一代或几代。4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，含有基和可直接检测官能团的化合物中所述可直接检测官能团为荧光官能团或发光官能团。5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述荧光官能团含吖啶橙、吖啶黄、4',6-二脒基-2-苯基吲哚、荧光素、AlexaFluor系列染料、花青系列染料、罗丹明、德克萨斯红、邻苯二甲醛、香豆素...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽媛，马骁驰，李甜甜，于振龙，潘玉鹏，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21