用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒及ALOX15基因作为生物标志物的应用制造技术

本发明专利技术提出一种用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒及ALOX15基因作为生物标志物的应用。其中所述试剂盒包括ALOX15基因的特异性引物。所述ALOX15基因作为生物标志物能够制备用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的产品。本发明专利技术试剂盒，通过蛋白质组学和转录组学方法筛选采用ALOX15基因作为生物标志物，以实现采用试剂盒进行检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的方法，能够快速对鼻息肉亚型进行鉴别，且相比较传统的病理检测方法用时更短，此试剂盒可以同时对样品进行大批量、快速检测，节约了人力成本和就医成本。更重要的是可以全面的反应组织病理学特点。

【技术实现步骤摘要】
用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒及ALOX15基因作为生物标志物的应用
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒及ALOX15基因作为生物标志物的应用。
技术介绍
慢性鼻窦炎伴鼻息肉(Chronicrhinosinusitiswithnasalpolyps，CRSwNP)是鼻窦黏膜的慢性炎症，查体可见鼻腔或中鼻道息肉形成。CRSwNP常见症状为鼻堵、流涕或鼻涕倒流、嗅觉减退、面部闷胀感或压力感，持续时间超过12周。患病率约为0.5-4％，CRSwNP常伴有哮喘和过敏性鼻炎，有报道7％的哮喘患者患有CRSwNP，而26-48％的CRSwNP患有哮喘。CRSwNP发病机制目前还不确定，黏膜上皮细胞破坏、宿主免疫系统失衡和病原微生物入侵可能是其发病的主要原因。CRSwNP主要的治疗方式是手术和药物治疗。但研究表明，即使通过规范的药物或手术治疗，慢性鼻窦炎伴鼻息肉的复发率仍高达56％，严重影响患者生活质量，同时带来高额医疗支出，但临床却缺乏根治性治疗方法，因而成为鼻科学研究领域的重点。依据嗜酸性粒细胞浸润的程度可以将CRSwNP分为嗜酸性粒细胞型(EosinophilicCRSwNP，ECRSwNP)与非嗜酸性粒细胞型(NoneosinophilicCRSwNP，nonECRSwNP)，二者的临床表现、用药和预后均不同，嗜酸性粒细胞型的临床症状较重，以鼻堵和嗅觉减退为主，多合并有哮喘，术后复发率较高。鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞浸润程度与复发关系最为密切，当组织中该细胞百分比超过27％时，复发风险超过90％。嗜酸性粒细胞型息肉对糖皮质激素类药物的敏感度显著高于非嗜酸性粒细胞型。非嗜酸性粒细胞型临床症状一般较轻，且合并哮喘的几率较小，气道炎症较轻，且术后复发率较嗜酸性粒细胞型低，对大环内酯类药物治疗反应好。西方国家以嗜酸性粒细胞型为主，主要表现为TH2炎症反应，而我国的嗜酸性粒细胞型和非嗜酸性粒细胞型比例均约占一半，非嗜酸性粒细胞型主要表现为TH1/TH17炎症反应为主。综上所述，嗜酸性粒细胞型和非嗜酸性粒细胞型在免疫病理类型、临床症状、药物治疗反应和预后存在明显不同。不同慢性鼻窦炎伴鼻息肉的炎症/病理分型治疗策略不同。所以对慢性鼻窦炎伴鼻息肉的病理分型的鉴定显得尤为重要。目前对两种亚型的判断主要依据鼻腔黏膜活检后组织病理标本染色，缺乏无创性生物学标志物用于鉴别诊断。患者在鼻内镜下获得息肉标本后，进行石蜡固定等病理标本的常规处理，然后进行苏木素伊红的染色，接下来通过高倍显微镜观察组织浸润的炎细胞(主要的炎细胞包括嗜酸性粒细胞，中性粒细胞，淋巴细胞，浆细胞)浸润个数，进行细胞分型。鼻腔黏膜病理活检的缺点如下：1.为有创检查：增加了患者的感染风险，不适用于免疫力较低人群如儿童、老年人等；取材时鼻腔出血，往往引起患者恐惧和担忧。2.难以获得疾病的实时动态变化信息：不能在术后对愈合期黏膜进行病理活检。但临床数据表明慢性鼻窦炎伴鼻息肉的病理分类会随药物治疗、手术治疗等转归，用治疗前的病理活检结果无法代表全部疾病时期的特征。3.费时且增加就医成本，从获取组织样本到获取病理结果一般3-4个工作日。由于无法当日或次日获得结果，外地患者就医等产生额外的交通费、住宿费、挂号费，增加了就医成本。4.存在一定的人为误差，不同的病理医生计数的炎细胞数量有可能不同，影响息肉分型的判断。5.组织病理切片较局限，只能反映切片位置的标本炎症状态，不能反映组织的全貌，可能会造成误诊。6.每张片子都需要病理科医生人工计数，难以批量操作。由此可见，提供一种能够不依赖于鼻腔黏膜病理活检且能快速准确大批量检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的方法成为本领域技术人员亟待解决的技术难题。
技术实现思路
本专利技术针对上述的技术问题，提出一种用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒及ALOX15基因作为生物标志物的应用。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，所述试剂盒包括ALOX15基因的特异性引物。作为优选，所述ALOX15基因的上游引物如SEQIDNO:2所示，所述ALOX15基因的下游引物如SEQIDNO:3所示。作为优选，所述试剂盒进一步还包括内参基因的特异性引物。作为优选，所述内参基因为GAPDH，所述内参基因的上游引物如SEQIDNO:4所示，所述ALOX15基因的下游引物如SEQIDNO:5所示。作为优选，所述试剂盒进一步还包括：从鼻息肉组织或从鼻黏膜脱落细胞中提取RNA的试剂；将总RNA逆转录为cDNA的试剂；采用定量聚合酶链反应将cDNA中的ALOX15基因和内参基因进行实时荧光定量PCR反应的试剂。作为优选，所述将总RNA逆转录为cDNA的试剂包括：逆转录混合液和去RNA酶及去DNA酶的水；更优选的，将总RNA进行逆转录为cDNA的试剂包括：1μL～40μL的逆转录混合液，以及0μL～160μL的去RNA酶及去DNA酶的水。进一步优选的，所述将总RNA逆转录为cDNA的试剂包括：2μL的逆转录混合液，以及0μL～8μL的去RNA酶及去DNA酶的水。作为优选：采用定量聚合酶链反应将cDNA中的ALOX15基因和内参基因进行实时荧光定量PCR反应的试剂包括：PCR预混合液、双蒸水、机器荧光补偿及矫正剂、ALOX15基因的上游引物、ALOX15基因的下游引物、内参基因的上游引物和内参基因的下游引物。更优选的，采用定量聚合酶链反应将cDNA中的ALOX15基因和内参基因进行实时荧光定量PCR反应的试剂包括：1μL～25μL的PCR预混合液，0μL～50μL的双蒸水，0μL～2μL的机器荧光补偿及矫正剂，0.01～100μM的ALOX15基因的上游引物，0.01～100μM的ALOX15基因的下游引物，0.01～100μM的内参基因的上游引物，0.01～100μM的内参基因的下游引物；进一步优选的，采用定量聚合酶链反应将cDNA中的ALOX15基因和内参基因进行实时荧光定量PCR反应的试剂包括：5μL的PCR预混合液，0μL～10μL的双蒸水，根据总体积用水补齐至10μL，0.2μL的机器荧光补偿及矫正剂，1μM的ALOX15基因的上游引物，1μM的ALOX15基因的下游引物，1μM的内参基因的上游引物，1μM的内参基因的下游引物。作为优选，所述从鼻息肉组织中提取RNA的试剂可以选择以下两种试剂，第一种包括：RNA抽提液、氯仿、异丙醇、浓度为65％～90％的乙醇、去RNA酶及去DNA酶的水；其中优选的，包括0.1mL～20mL的RNA抽提液Trizol或RNAisoBlood或RNAisoPlus或其它含有苯酚、异硫氰酸胍、8-羟基喹啉、异硫氰酸胍或β-巯基乙醇的物质，所述Trizol或所述RNAisoBlood或所述RNAisoPlus或所述其它含有苯酚、异硫氰酸胍、8－羟基喹啉、异硫氰酸胍或β-巯基乙醇的物质的体积的0.1～0.5倍的氯仿，所述氯仿体积的0.5～3倍的异丙醇，所述异丙醇体积的0.5～5倍的65％至90％的乙醇，以及0.01mL至5mL的去RNA酶及去DNA酶的水；进一步优选的，针对从鼻息肉组织中提取RNA的试剂可选择以下两种试剂，第一种包括：1mL的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括ALOX15基因的特异性引物。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括ALOX15基因的特异性引物。2.根据权利要求1所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，其特征在于：所述ALOX15基因的上游引物如SEQIDNO:2所示，所述ALOX15基因的下游引物如SEQIDNO:3所示。3.根据权利要求1或2任一项所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒进一步还包括内参基因的特异性引物。4.根据权利要求3所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，其特征在于：所述内参基因为GAPDH，所述GAPDH的上游引物如SEQIDNO:4所示，所述GAPDH的下游引物如SEQIDNO:5所示。5.根据权利要求3所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒进一步还包括：从鼻息肉组织或从鼻黏膜脱落细胞中提取RNA的试剂；将总RNA逆转录为cDNA的试剂；采用定量聚合酶链反应将cDNA中的ALOX15基因和内参基因进行实时荧光定量PCR反应的试剂。6.根据权利要求5所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的试剂盒，其特征在于：所述将总RNA逆转录为cDNA的试剂包括：逆转录混合液和去RNA酶及去DNA酶的水；采用定量聚合酶链反应将cDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：张罗，王成硕，闫冰，王阳，
申请(专利权)人：张罗，王成硕，闫冰，北京市耳鼻咽喉科研究所，首都医科大学附属北京同仁医院，
类型：发明
国别省市：北京,11