本发明专利技术公开一种与肺腺癌癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用，该标志物为miR‑133a‑3p,miR‑584‑5p,miR‑10b‑5p和miR‑221‑3p中的一种或多种。血清miRNA作为新型的生物标志物，具有稳定性好、微创易获取，灵敏性和特异性高的特点。这类分子标志物的开发利用将为包括肿瘤在内的各种疾病的诊断以及进一步治疗提供新的方向。本研究将更有针对性的得出具有临床诊断潜能的肺腺癌血清miRNA标记物。研究证实了这组miRNA作为诊断肺腺癌的无创标记物的可靠性以及可重复性。
A Serum MicroRNAs Marker Associated with Assisted Diagnosis of Lung Adenocarcinoma and Its Application
The present invention discloses a serum microRNAs marker related to the auxiliary diagnosis of lung adenocarcinoma and its application. The marker is one or more of microRNAs 133a_3p, microRNAs 584_5p, microRNAs 10b_5p and microRNAs 3p. Serum microRNA as a new biomarker has the characteristics of good stability, minimally invasive, easy access, high sensitivity and specificity. The development and utilization of these molecular markers will provide a new direction for the diagnosis and further treatment of various diseases, including tumors. This study will be more targeted to obtain serum microRNA markers with clinical diagnostic potential for lung adenocarcinoma. The reliability and reproducibility of these microRNAs as noninvasive markers for the diagnosis of lung adenocarcinoma were confirmed.
【技术实现步骤摘要】
一种与肺腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用
本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与肺腺癌癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用。
技术介绍
肺癌是世界上死亡率最高的一种恶性肿瘤，非小细胞肺癌(Non-smallcelllungcancer,NSCLC)占到了肺癌总数的80％。非小细胞肺癌根据病理分型又可以分为肺腺癌、肺鳞癌等，且目前肺腺癌发病率已经超过了肺鳞癌，成了最常见的肺癌类型。手术治疗仍是目前治疗非小细胞肺癌的最有效方法。但是绝大部分患者在就诊时已处于中晚期，使得中位生存期始终徘徊在7-11个月，5年生存率只有17％左右。目前针对肺癌的分子和临床特征的研究不断深入，临床筛查和治疗方法也有长足进步，但是，这些方法或者过于依赖检测者经验，或者价格太高无法推广，或者检测灵敏度和特异性还有待加强。因此，迫切需要开发新的可靠的非侵入性早期诊断标记物，促进早期干预和治疗，延长病人的生存期。微小RNA(Microribonucleicacids，miRNAs)的发现是最近这些年来重大发现之一。成熟的miRNA是一类进化保守，长度在18-25个核苷酸的小非编码RNA分子。据研究，miRNA可在转录后水平调控机体1/3以上的基因，从而参与机体的众多生理病理过程。miRNA的表达具有时间特异性以及组织特异性。同时，一些miRNA能够参与特定的生理病理以及特异的疾病过程。因此，某些特异的miRNA可以作为某些生理病理以及某些疾病例如肿瘤等疾病的标志物。2008年，Mitchell在外周血中检测到游离的miRNA，发现其能够稳定存在于外周血，并且能够作为诊断肿瘤的无创标志物。这一研究发现拉开了全球众多研究者开始探索循环miRNA作为无创标志物的大幕。现有研究证实了循环miRNA在包括肺癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌中的潜在诊断价值。最近的临床试验显示，对肺癌进行精确的亚组分型能够使得患者获得最大的治疗益处并避免潜在的治疗副反应。这就是精准医疗思想的体现。但目前针对肺癌的循环miRNA研究，主要都是针对非小细胞肺癌这一含有众多亚型的集合。研究所选取的非小细胞肺癌亚型构成的不同，都可能会引起结果的偏倚。因此，本研究将目光聚焦于肺癌最常见的亚型——肺腺癌，利用ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及基于qRT-PCR的绝对定量法，来寻找具有潜在诊断肺腺癌的血清miRNA。并对这些miRNA在肺癌组织中以及血清外泌体中的表达进行验证，以进一步明确其与肺腺癌的关系。若根据这类miRNA设计针对于肺腺癌的诊断试剂盒，将会推动我国肺腺癌的诊治水平，也为将来对肺癌的进一步研究提供思路。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与肺腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物。本专利技术的另一目的在于提供上述血清miRNA标志物及其引物在制备肺腺癌辅助诊断试剂盒以及在制备治疗肺腺癌的药物中的应用。本专利技术的又一目的在于提供用于肺腺癌辅助诊断和治疗的试剂盒及药物。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种与肺腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物，该标志物为miR-133a-3p(uuugguccccuucaaccagcug),miR-584-5p(uuaugguuugccugggacugag),miR-10b-5p(uacccuguagaaccgaauuugug),和miR-221-3p(agcuacauugucugcuggguuuc)中的一种或多种。该血清miRNA标志物优选为miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中两种或两以上的组合，进一步优选为miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p四种miRNA所组成的组合。上述的血清miRNA标志物在辅助诊断肺腺癌中的应用。上述的血清miRNA标志物在制备肺腺癌辅助诊断试剂盒或制备治疗肺腺癌药物中的应用。一种与肺腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物的引物，该引物包含miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含血清miRNA中miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中两种或两以上miRNA的引物；进一步优选为包含血清miRNA中miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p四种miRNA的引物。上述的引物在辅助诊断肺腺癌或制备肺腺癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种肺腺癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒中含有血清miRNA中miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为含有血清miRNA中miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为含有血清miRNA中miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p四种miRNA的引物。该试剂盒中还包括PCR技术常用的试剂或/和免疫组化技术常用的试剂。该试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术所涉及的与肺腺癌诊断相关的血清miRNA标志物miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中的每种miRNA的序列均已公开，但是将各miRNA标志物进行组合作为肺腺癌辅助诊断标志物需要本领域技术人员付出创造性劳动。各miRNA标志物的扩增引物均可通过市场购买获得，本专利技术实施例中使用的血清miRNA标志物的引物为购自广州锐博公司所合成生产的特异性miRNA茎环RT-PCR引物。具体地说，本专利技术解决问题的技术方案包括：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)血清miRNA差异表达谱分析：分析肺腺癌和正常对照人群中差异表达的血清miRNA，并对差异表达miRNAs进行进一步大样本多阶段验证。(3)通过多阶段的验证，明确这些miRNA诊断肺腺癌的能力。(4)血清miRNA诊断试剂盒的研制：根据肺腺癌与正常人群血清中的差异表达miRNA开发miRNAs诊断试剂盒，实现对肺腺癌患者的无创辅助诊断。(4)分析这些miRNA在肺腺癌组织、动脉血清以及外泌体中的表达情况，揭示这些miRNA与肺腺癌的关系，为将来研制可能与这些miRNA相关的治疗肺腺癌的药物提供依据。本专利技术人以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料、临床资料，并采用了ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及qRT-PCR方法等。具体来说研究的实验方法主要包括以下几个部分：1.研究样本选择：初治、未行手术以及放化疗干预且之后经病理确认为肺腺癌的病人。正常对照为在医院进行体检的正常人群。2.ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片初筛：利用TRIZOL-LS试剂对血清混合样本进本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与肺腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物，其特征在于该标志物为miR‑133a‑3p,miR‑584‑5p,miR‑10b‑5p和miR‑221‑3p中的一种或多种。
【技术特征摘要】
1.一种与肺腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物，其特征在于该标志物为miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的血清miRNA标志物，其特征在于该血清miRNA标志物为miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中两种或两以上的组合，优选为miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p四种miRNA所组成的组合。3.权利要求1或2所述的血清miRNA标志物在辅助诊断肺腺癌中的应用。4.权利要求1或2所述的血清miRNA标志物在制备肺腺癌辅助诊断试剂盒或制备治疗肺腺癌药物中的应用。5.一种与肺腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物的引物，其特征在于该引物包含miR-133a-3p,miR-584-5p,miR-10b-5p和miR-221-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含血清miR-133a-3p,miR...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟，周鑫，邹璇，单霞，闻伟，葛炳辰，张澜，朱军，
申请(专利权)人：朱伟，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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