一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体，包括脂质体载体以及亲脂性药物，所述的脂质体载体由下述重量份的原料制成：二棕榈酰磷脂酰胆碱8份、氢化大豆磷脂1~3份、胆固醇‑苯甲酰亚胺‑聚乙二醇0.5~2份、单链磷脂0~1.5份、细胞穿膜肽Stearyl‑R80.01~0.1份、维生素E0~3份。所述脂质体采用聚乙二醇和细胞穿膜肽共同修饰，通过pH响应性实现了触发型主动靶向，兼顾了靶向性和体内长循环需求，同时采用了热敏脂质体作为膜材，可通过局部热疗实现药物的快速释放。

【技术实现步骤摘要】
一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体及其制备方法
本专利技术属于药学领域，涉及靶向制剂，具体为一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体及其制备方法。
技术介绍
目前，脂质体已广泛用作药物载体，如阿霉素脂质体、柔红霉素脂质体、紫杉醇脂质体等多种制剂已上市多年。若用作抗癌药物载体，传统的普通脂质体已无法满足用药需求，需要解决三项关键问题：(1)靶向输送问题：普通脂质体依靠EPR效应在肿瘤部位富集，靶向性不够强且易受复杂生理环境干扰，通常需要进行主动靶向修饰；(2)体内长循环(long-circulating)问题：脂质体易被内皮网状系统(RES)捕获并快速代谢导致药物流失，常用的方法是在脂质体表面修饰聚乙二醇(PEG)制备“隐形脂质体”(stealthliposomes)，但这样也会削弱和靶细胞的作用而损害靶向性；同样，对脂质体靶向修饰的同时也会增大被RES识别的几率而损害体内长循环性能，所以靶向性和体内长循环往往互相矛盾；(3)药物控制释放问题：要求脂质体到达肿瘤之前不释放或少释放药物，以提高药物利用度并减小副作用；脂质体到达肿瘤后则需快速释放药物，使肿瘤细胞内的药物浓度维持较高水平而发挥药效。特别是对于体积较大的肿瘤，由于脂质体一般分布在血管周围10μm的范围内并且游离药物的扩散距离不超过200μm，药物快速释放建立高浓度梯度对扩大药效范围显得尤为重要。鉴于此，本专利技术设计出一种双重环境响应性的靶向脂质体，该脂质体采用穿膜肽和PEG共同修饰，而PEG可在肿瘤部位酸性环境中脱除，很好的解决了靶向性和体内长循环这一对矛盾需求；同时，脂质体具有温敏性，通过局部热疗实现药物在肿瘤部位快速释放，改善药物动力学。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体及其制备方法，由于表面修饰有PEG，给药后作为“隐形脂质体”进入体内长循环；当到达肿瘤部位后，脂质体针对酸性微环境做出响应脱去PEG壳层，同时将细胞穿膜肽暴露而激发与肿瘤细胞的相互作用，实现触发型主动靶向。靶向性和体内长循环这一对矛盾需求通过pH响应“脱壳”行为得到很好解决。当脂质体进入靶向部位后，再通过局部热疗实现药物的快速释放。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体，包括脂质体载体以及亲脂性药物，所述的脂质体载体由下述重量份的原料制成：二棕榈酰磷脂酰胆碱8份、氢化大豆磷脂1～3份、胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇0.5～2份、单链磷脂0～1.5份、细胞穿膜肽Stearyl-R80.01～0.1份、维生素E0～3份。所述的亲脂性药物包括但不限于染料木素、莪术油，莪术醇、吉马酮、β-榄香烯、莪术二酮、姜黄素、去甲氧基姜黄素。一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体的制备方法，包括以下步骤：(1)制备胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇：首先，制备苯甲酰亚胺聚乙二醇(化合物1)，将1摩尔份的聚乙二醇单甲醚溶于二氯甲烷，然后加入1.2摩尔份对醛基苯甲酸、1.3摩尔份二环己基碳二亚胺(DCC)和催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，搅拌反应48小时，在异丙醇中多次沉淀后得到苯甲酰亚胺聚乙二醇(化合物1)；然后，制备氨基改性胆固醇(化合物2)，将丁二酸单胆固醇脂溶于二氯甲烷，加入1.2摩尔份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和0.3摩尔份N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，加入过量的乙二胺盐酸盐(不少于5摩尔份)，搅拌反应24小时后过滤，滤液充分水洗后蒸干得氨基改性胆固醇(化合物2)。最后，将苯甲酰亚胺聚乙二醇(化合物1)和氨基改性胆固醇(化合物2)按1:1的摩尔比例溶于二氯甲烷或四氢呋喃，搅拌反应24小时后蒸干溶剂得胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇(Chol-benzoicimine-PEG)，该化合物现制现用。(2)按比例称取二棕榈酰磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂、胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇、单链磷脂、细胞穿膜肽Stearyl-R8、维生素E，并采用乙醇注入法或薄膜分散法制备载药脂质体。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：本专利技术所制备的功能性载药靶向脂质体是一种兼顾触发型主动靶向和热敏释放功能的新型脂质体。通过pH响应性实现了触发型主动靶向，很好的兼顾了药物载体的靶向性和体内长循环要求；同时采用了热敏脂质体作为膜材，可通过局部热疗实现药物的快速释放。与现有技术相比，功能性大大增强，有利于提高药物利用度，改善药物动力学，增强治疗效果。附图说明图1靶向脂质体的表征图：A、脂质体透射电镜照片；B、脂质体透射电镜照片局部放大图；C、脂质体透射电镜照片局部放大图；D、脂质体粒径分布图谱(动态光散射表征)图2靶向脂质体在不同温度下的释放度图3靶向脂质体在不同pH下的尺寸变化具体实施方式下面结合附图和实施例来进一步说明本专利技术，其中部分制备条件仅是作为典型情况的说明，并非是对本专利技术的限定。实施例1具有pH和温度双重响应性的染料木素脂质体的制备方法步骤一：合成胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇(Chol-benzoicimine-PEG)1)制备苯甲酰亚胺聚乙二醇(化合物1)：将1摩尔份聚乙二醇单甲醚(mPEG2000)溶于25mL二氯甲烷，然后加入1.2摩尔份对醛基苯甲酸、1.3摩尔份二环己基碳二亚胺(DCC)和催化量(0.1g)的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，在氮气保护下避光磁力搅拌反应48小时，减压蒸去大部分溶剂，浓缩液逐滴加到100ml异丙醇中，搅拌沉淀，0℃静置过夜后抽滤，用冷异丙醇洗涤三次。滤饼再次溶于8ml二氯甲烷，再一次在异丙醇中沉淀后抽滤得到苯甲酰亚胺聚乙二醇(化合物1)。2)制备氨基改性胆固醇(化合物2)：将1摩尔份丁二酸单胆固醇脂溶于二氯甲烷，加入1.2摩尔份EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和0.3摩尔份N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，加入5摩尔份乙二胺盐酸盐，在氮气保护下避光磁力搅拌反应24小时后过滤，滤液用饱和食盐水充分洗涤，经无水硫酸钠干燥后蒸干得氨基改性胆固醇(化合物2)。3)将苯甲酰亚胺聚乙二醇(化合物1)和氨基改性胆固醇(化合物2)按1:1的摩尔比例溶于四氢呋喃，在氮气保护下避光磁力搅拌反应24小时后蒸干溶剂得胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇(Chol-benzoicimine-PEG)。将其溶于蒸馏水中，加入缓冲盐将pH调节至7.4，滤去不溶物，作为配制脂质体的水相(浓度1％)。步骤二：制备脂质体取二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)、细胞穿膜肽Stearyl-R8作为膜材，将染料木素和上述脂质一起溶解在无水乙醇中，在磁力搅拌情况下将乙醇相注入含有胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇的水相，保证二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)：氢化大豆磷脂(HSPC)：胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇：细胞穿膜肽Stearyl-R8：染料木素的质量比为8：3：2：0.1：1，60℃搅拌2h挥去乙醇，超声减小粒径，即得染料木素脂质体，脂质体粒径在115.39纳米，多分散系数(PDI)为0.134，如图1所示。实施例2具有pH和温度双重响应性的染料木素脂质体的制备方法与实施例1不同的是，在膜材中添加单链磷脂(MSPC)，其中二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体，其特征在于，包括脂质体载体以及亲脂性药物，所述的脂质体载体由下述重量份的原料制成：二棕榈酰磷脂酰胆碱8份、氢化大豆磷脂1～3份、胆固醇‑苯甲酰亚胺‑聚乙二醇0.5～2份、单链磷脂0～1.5份、细胞穿膜肽Stearyl‑R8 0.01～0.1份、维生素E 0～3份。

【技术特征摘要】
1.一种具有pH和温度双重响应性的靶向脂质体，其特征在于，包括脂质体载体以及亲脂性药物，所述的脂质体载体由下述重量份的原料制成：二棕榈酰磷脂酰胆碱8份、氢化大豆磷脂1～3份、胆固醇-苯甲酰亚胺-聚乙二醇0.5～2份、单链磷脂0～1.5份、细胞穿膜肽Stearyl-R80.01～0.1份、维生素E0～3份。2.根据权利要求1所述的靶向脂质体，其特征在于，所述的亲脂性药物为染...

【专利技术属性】
技术研发人员：范伟伟，彭佩，李强，杨洋，
申请(专利权)人：荆楚理工学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42