本发明专利技术公开了一种日本血吸虫SjELAV‑like 1基因的siRNA，所述siRNA为：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。本发明专利技术还公开了日本血吸虫SjELAV‑like 1基因的siRNA的应用。本发明专利技术日本血吸虫SjELAV‑like 1基因的siRNA，可明显抑制SjELAV‑like 1基因的转录，并能显著降低血吸虫感染小鼠的肝脏荷卵数和虫卵孵化率，对血吸虫体被结构造成了一定的损伤，并造成生殖细胞的形态异常，适用于制备治疗血吸虫病的药物。
【技术实现步骤摘要】
日本血吸虫SjELAV-like1基因的siRNA及其应用
本专利技术涉及分子生物学和生物医药
，尤其涉及一种日本血吸虫SjELAV-like1基因的siRNA及其应用。
技术介绍
血吸虫病(Schistosomiasis)是一种分布广泛、危害严重的人畜共患寄生虫病，呈地方性流行；血吸虫性成熟雌虫产生的大量虫卵在动物肝脏中形成的肉芽肿是导致宿主损伤的根本原因，而大量虫卵排出体外又造成血吸虫病的传播和流行。目前，主要采用药物，例如吡喹酮，对已经感染血吸虫病的人或动物进行治疗，但是这些药物不能够防治血吸虫病的再次感染，因此，有必要寻找新的治疗血吸虫病的药物。此外，抗原伪装和抗原模拟是血吸虫免疫逃避的重要机制，这也是没有一种安全性高、特异性强的疫苗可以广泛应用于控制血吸虫病的原因，故研究有效的抗原靶点对血吸虫疫苗、药物靶标和诊断工具的开发方面具有潜在应用价值。ELAV(embryoniclethalabnormalvision)-like是一类家族基因，该家族成员最早在果蝇体内发现，因其有胚胎期致死及视觉异常表型而得名。该家族基因编码的RNA结合蛋白在基因的转录后调节中通过影响mRNA转运、定位和翻译，控制蛋白的时空表达，并调控RNA与蛋白质的结合及其相互作用，决定基因表达最终产物的类型和表达量，从而发挥不同的生物学功能。ELAV-like1是该家族成员之一，在果蝇神经元中特异性表达，它通过转录后调控限制神经突触的生长发育，对神经系统的发育和维持有重要作用。在人类中与ELAV-like1同源的基因HuR在各种细胞中广泛表达，通过与ARE(AU-richelement)元件的结合调节mRNA的稳定性，它的异常表达会导致生长发育异常、自身免疫和肿瘤等疾病的发生。HuR对胚盘的形态学发生和血管形成以及胎儿的维持有重要作用，它的缺失导致胚胎致死型或胚胎发育异常。果蝇中与ELAV-like同源的RBP9不仅对神经元成熟有重要作用，还与卵母细胞的分化有关，RBP9突变导致卵子缺陷，引起雌性不孕。但是尚没有针对日本血吸虫中ELAV-like1基因的深入研究。RNA干扰（RNAi）是发生在mRNA水平上的一种基因沉寂现象，即将外源性双链RNA（dsRNA）引入细胞后可以引起细胞内与其同源的mRNA特异性降解，使该基因在RNA水平上被关闭而致其不表达，即转录后基因沉寂，从而产生相应的功能表型缺失。该技术目前已经在功能基因组学、基因治疗、微生物学研究和药物研发等领域里取得了令人瞩目的进展。小分子干扰RNA（smallinterferingRNAs，siRNAs），是一种短片段双链RNA分子，通常由20个左右核苷酸组成，能够以同源互补序列mRNA为靶标并将其降解，从而介导特异性RNA干扰途径的进行，使转录后基因沉默。siRNA已经广泛应用于基因表达调控机制研究等领域。
技术实现思路
本专利技术人在分析日本血吸虫由单性感染而来的发育阻遏雌虫与由混合感染而来的正常发育雌虫转录组差异时发现，SjELAV-like1在25d发育阻遏雌虫体内高表达，这可能预示该基因对日本血吸虫的生殖发育有重要的影响，因而促使专利技术人进行进一步的研发，尤其是抑制日本血吸虫的ELAV-like1基因是否能够有效的控制血吸虫病。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:在本专利技术的一个方面，提供了一种日本血吸虫SjELAV-like1基因的siRNA，所述dsRNA为：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；或SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种治疗血吸虫病的药物，所述药物的活性成分为：通过RNA干扰抑制日本血吸虫SjELAV-like1基因表达的dsRNA。所述dsRNA为：SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述日本血吸虫SjELAV-like1基因的dsRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述日本血吸虫SjELAV-like1基因的dsRNA在制备预防血吸虫病的疫苗中的应用。本专利技术日本血吸虫SjELAV-like1基因的siRNA，可用于干扰日本血吸虫SjELAV-like1基因转录、表达及血吸虫的生长发育，小鼠的体内RNA干扰实验表明，该siRNA能显著降低感染小鼠肝脏荷卵数和虫卵孵化率，适于制备治疗血吸虫病的药物。附图说明图1是本专利技术实施例1实时定量PCR分析各处理组SjELAV-like1基因的转录结果图；图2是本专利技术实施例2实时定量PCR分析各处理组SjELAV-like1基因的转录结果图；图3是本专利技术实施例2扫描电镜观察各处理组SjELAV-like1基因干扰的结果图，a-d：S2siRNA干扰组；e-f:阴性对照组。a，e：抱雌沟起始部腹侧体壁；b，f：雄虫中段背侧体壁；c，g：雄虫后段体壁；d，h：雌虫中段体壁；图4是本专利技术实施例2透射电镜观察各处理组SjELAV-like1基因干扰的结果图，a-c：S2siRNA干扰组；d-f:阴性对照组。a，b，d，e：雄虫睾丸内精母细胞；c，f：雌虫卵黄腺内卵黄细胞；s：精母细胞；is：细胞间隙；vc：卵黄细胞；vg：卵黄球；vd：卵黄滴；n：细胞核；l：脂滴；cg：皮质颗粒；er：内质网。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译.第3版，北京：科学出版社，2002）中所述的方法进行。实施例1siRNA筛选1.方法步骤1.1siRNA分子和SjELAV-like1基因实时定量PCR引物的准备根据已提交至NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）的SjELAV-like1（MG515727）基因序列，通过分析比较，设计并合成两对dsRNA。同时，合成一对无关对照dsRNA（NCdsRNA）为：sense：5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’（SEQIDNO.5），Anti-sense：5’-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’（SEQIDNO.6）；两对日本血吸虫ELAV-like1基因的dsRNA小分子为：S1dsRNA：sense：5’-GCUAUACCUGUACGUAUUATT-3’（SEQIDNO.1），Anti-sense：5’-UAAUACGUACAGGUAUAGCTT-3’（SEQIDNO.2），该第一对siRNA针对的靶点序列是648-664bp(UAUACCUGUACGUAUUA)；S2dsRNA：sense：5’-GCGACAGUGAAUUUACCUUTT-3’（SEQIDNO.3），Anti-sense：5’-AAGGUAAAUUCACUGUCGCTT-3’（SEQIDNO.4），该第二对siRNA针对的靶点序列是1101-1117bp(GACAGUGAAUUUACCUU)。1.2体内筛选siRNA9只BALB/c小鼠，分为3组，每组3只，40±5条尾蚴以腹部贴片法感染小鼠，于感染后22d，分别于小本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种日本血吸虫SjELAV‑like 1基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA针对选自下述的靶点：靶点序列是是 648‑664bp ，即UAUACCUGUACGUAUUA；或者靶点序列是1101‑1117bp，即GACAGUGAAUUUACCUU。
【技术特征摘要】
1.一种日本血吸虫SjELAV-like1基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA针对选自下述的靶点：靶点序列是是648-664bp，即UAUACCUGUACGUAUUA；或者靶点序列是1101-1117bp，即GACAGUGAAUUUACCUU。2.如权利要求1所述的日本血吸虫SjELAV-like1基因的siRNA，其序列为SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列；或者为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。3.一种用于抑制日本血吸虫S...
【专利技术属性】
技术研发人员：金亚美，许蓉，张媛媛，李肖纯，程桂凤，何川川，李浩，刘金明，古少鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：上海,31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。