基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法技术

本发明专利技术公开了一种基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法，包括如下步骤：S1、制备MoS2二维纳米类酶；S2、配制0.1mol/L的鲁米诺母液和Tris‑HCl缓冲溶液；S3、将配制所得的鲁米诺母液用Tris‑HCl缓冲溶液稀释至5毫摩尔每升的鲁米诺溶液，然后取40微升所得溶液与40微升不同浓度的过氧化氢溶液在测量杯中混匀，再向其中加入40微升1毫摩尔每升的MoS2纳米类酶，反应30秒后，整个反应体系放入化学发光测定仪，通过化学发光仪收集并记录反应所产生的光信号。本发明专利技术增强了检测过氧化氢时的发光信号的强度，缩短了反应时间。

【技术实现步骤摘要】
基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法
本专利技术涉及一种过氧化氢检测方法，具体涉及一种基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法。
技术介绍
过氧化氢是一种氧化剂，在生命体中是一种常见的代谢产物，对其进行检测、监控可以知道生命代谢是否正常，同时某些疾病病征之一就是过氧化氢含量异常，因此过氧化氢检测可以为监控生命体代谢、诊断疾病提供科学、客观证据，具有非常重要的研发价值。目前公认特异、灵敏的检测过氧化氢手段是生物体的过氧化氢酶，然而过氧化氢酶的生物学本性，其纯化、保存、使用条件苛刻，成本高昂，因此类酶的需求极为紧迫。MoS2二维纳米材料是一种过氧化氢类酶活性较好的纳米类酶，其与四甲基联苯胺底物(TMB)共用在过氧化氢比色检测方法中表现出非常良好的类酶特性。但是MoS2纳米类酶与TMB组成的过氧化氢检测体系是基于TMB底物氧化而变色(比色法检测)，信号弱、反应较慢、检出限高，为此需要更进一步的研究以发展检测性能更好的检测方法。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法，增强了检测过氧化氢时的发光信号的强度，缩短了反应时间。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法，包括如下步骤：S1、制备MoS2二维纳米类酶将50mgMoS2加入含有10mg牛血清蛋白(BSA)的10ml水溶液中，使用枪式超声探头在功率为240W的条件下超声处理6h后，置于高速离心机中以5000r/min的速度离心45min，在通用超声清洗浴中超声重新分散10min，然后以15000r/min速度离心45min，收集上清液，4度下保存备用；S2、配制鲁米诺溶液和Tris-HCl缓冲溶液配制鲁米诺溶液称取7.08mg鲁米诺试剂溶于4ml浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成0.1mol/L的鲁米诺母液，并在4摄氏度下避光保存；配备Tris-HCl缓冲溶液称取1.211mg三羟甲基氨基甲烷，将其溶解于75ml的超纯水中，用1mol/L的盐酸溶液分别调pH至11，加入25mg乙二胺四乙酸，超纯水定容至1000ml，待用；S3、过氧化氢的测定将配制所得的鲁米诺母液用Tris-HCl缓冲溶液稀释至5毫摩尔每升的鲁米诺溶液，然后取40微升所得溶液与40微升不同浓度的过氧化氢溶液在测量杯中混匀，再向其中加入40微升1毫摩尔每升的MoS2纳米类酶，反应30秒后，放入化学发光测定仪，通过化学发光仪收集并记录反应所产生的光信号，由光信号谱上的特征信号频率峰及峰强度定量过氧化氢。上述方案中，使用鲁米诺/MoS2纳米类酶做过氧化氢的检测体系，可以显著提高产生的光信号强度和降低过氧化氢检测限，使可检出过氧化氢浓度进一步降低，为高灵敏微痕过氧化氢检测提供新方法。附图说明图1为本专利技术实施例中超声剥离的MoS2离心后上清液的UV-vis分光光谱图。图2为本专利技术实施例中剥离的二维MoS2纳米片的TEM图。具体实施方式为了使本专利技术的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例S1、制备MoS2二维纳米类酶将50mgMoS2加入含有10mg牛血清蛋白(BSA)的10ml水溶液中，使用枪式超声探头在功率为240W的条件下超声处理6h后，置于高速离心机中以5000r/min的速度离心45min，超声重新分散10min，然后以15000r/min速度离心45min，收集上清液，4度下保存备用；S2、配备鲁米诺溶液和Tris-HCl缓冲溶液配备鲁米诺溶液称取7.08mg鲁米诺试剂溶于4ml浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成0.1mol/L的鲁米诺母液，并在4摄氏度下避光保存；使用时用Tris-HCl缓冲溶液稀释成所需要的浓度。配备Tris-HCl缓冲溶液使用电子天平称取1.211mg三羟甲基氨基甲烷1份，分别将其溶解于75ml的超纯水中，用1mol/L的盐酸溶液分别调pH至11，分别向调好的每种缓冲液中加入25mg乙二胺四乙酸，使用超纯水定容至1000ml，待用。配备过氧化氢溶液以浓度为30％的过氧化氢溶液为母液，放置于4摄氏度下避光保存，使用时使用超纯水稀释成所需浓度。S3、过氧化氢的测定将配置所得的鲁米诺母液用Tris-HCl缓冲溶液稀释至5毫摩尔每升的鲁米诺溶液，然后取40微升所述5毫摩尔每升的鲁米诺溶液与40微升不同浓度的过氧化氢溶液(可以由其浓度确定检测限)在测量杯中混匀，再向其中加入40微升1毫摩尔每升的MoS2纳米类酶，反应30秒后，放入化学发光测定仪。通过化学发光仪收集并记录反应所产生的光信号。化学发光仪测量高压设置为-900V，测量检测设置为0.05s，去10s的积分信号记录。结果显示我们的检出限在37纳摩尔每升，比基于TMB的高1个数量级(其在微摩尔每升数量级0.08微摩尔每升-参考文献为“郭欣荣、倪永年基于二硫化钼显色检测过氧化氢”)。图1可以辅助证明MoS2的剥离，显然其在430nm、610nm、670nm波长附近出现了典型单层或少层MoS2特征峰，证明MoS2二维纳米类酶的存在。图2为典型的MoS2二维纳米类酶形貌图，左边是为少层结构，右边为单层结构，其与基底颜色非常相近，表示片层越薄，越接近单层结构。2)荧光测试结果数据没有加入MoS2二维纳米类酶检测过氧化氢时和加入MoS2二维纳米类酶检测过氧化氢时均在在波长为450nm光谱处显示发光峰，意味着MoS2/鲁米诺发光体系确实能检测过氧化氢，同时加入MoS2二维纳米类酶检测过氧化氢时发光峰强度在2000单位处，而没有加入MoS2二维纳米类酶检测过氧化氢时强度仅为500单位，显然加入MoS2二维纳米类酶能极大的增强发光信号强度。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、制备MoS2二维纳米类酶将50mgMoS2加入含有10mg牛血清蛋白(BSA)的10ml水溶液中，使用枪式超声探头在功率为240W的条件下超声处理6h后，置于高速离心机中以5000r/min的速度离心45min，在通用超声清洗浴中超声重新分散10min，然后以15000r/min速度离心45min，收集上清液，4度下保存备用；S2、配制鲁米诺溶液和Tris‑HCl缓冲溶液配制鲁米诺溶液称取7.08mg鲁米诺试剂溶于4ml浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成0.1mol/L的鲁米诺母液，并在4摄氏度下避光保存；配制Tris‑HCl缓冲溶液称取1.211mg三羟甲基氨基甲烷，将其溶解于75ml的超纯水中，用1mol/L的盐酸溶液分别调pH至11，加入25mg乙二胺四乙酸，超纯水定容至1000ml，待用；S3、过氧化氢的测定将配制所得的鲁米诺母液用Tris‑HCl缓冲溶液稀释至5毫摩尔每升的鲁米诺溶液，然后取40微升所得溶液与40微升不同浓度的过氧化氢溶液在测量杯中混匀，再向其中加入40微升1毫摩尔每升的MoS2纳米类酶，反应30秒后，放入化学发光测定仪，通过化学发光仪收集并记录反应所产生的光信号，由光信号谱上的特征信号频率峰及峰强度定量过氧化氢。...

【技术特征摘要】
1.基于MoS2纳米类酶发光体系检测过氧化氢的新方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、制备MoS2二维纳米类酶将50mgMoS2加入含有10mg牛血清蛋白(BSA)的10ml水溶液中，使用枪式超声探头在功率为240W的条件下超声处理6h后，置于高速离心机中以5000r/min的速度离心45min，在通用超声清洗浴中超声重新分散10min，然后以15000r/min速度离心45min，收集上清液，4度下保存备用；S2、配制鲁米诺溶液和Tris-HCl缓冲溶液配制鲁米诺溶液称取7.08mg鲁米诺试剂溶于4ml浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成0.1mol/L的鲁米...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓勇，王新新，熊继军，杜栓丽，贾平岗，梁庭，洪应平，雷程，李晨，
申请(专利权)人：中北大学，
类型：发明
国别省市：山西,14