抗真菌肽及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种抗真菌肽及其在抑制真菌生长方面的用途。

【技术实现步骤摘要】
抗真菌肽及其用途
本专利技术涉及一种抗真菌肽及其在抑制真菌生长方面的用途。
技术介绍
抗菌肽(antimicrobialpeptides，AMPs)是一类广泛存在于整个生物界的多肽。本领域已知的是，抗菌肽可作为植物、昆虫或哺乳动物免疫系统的一部分，抵抗病原微生物的入侵。抗菌肽具有抗菌谱广、分子量小、热稳定性和水溶性好、不易产生耐药性等特点。在许多致病菌对现有的抗生素产生明显耐药性的情况下，抗菌肽的发现和研究为开发新的抗菌药物提供了可能。虽然近年来抗真菌肽的研究取得了很大的进展。然而，由于真菌与真核细胞结构的相似性，一些抗真菌肽(例如植物防御素)在抑制真菌生长的同时对包括哺乳动物细胞在内的一些真核细胞也会产生毒性。因此，本领域仍存在提供安全有效的抗真菌肽的需求。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人在研究酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)DNA损伤信号的细胞间传递中发现，一个短肽介导凋亡过程中酵母细胞间信号的传递。进而，借助高分辨液质联用质谱分析和生物信息学技术分析发现，该短肽具有如SEQIDNO：1所示的序列。实验证明，该短肽能够杀死真菌或抑制真菌生长，且不影响哺乳动物细胞的正常功能，因此具有作为抗真菌药物的潜力。在第一方面，本专利技术提供了具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的抗真菌肽、其功能片段、功能变体或衍生物。在第二方面，本专利技术提供了一种抗真菌组合物，所述抗真菌组合物包含第一方面所述的抗真菌肽。在第三方面，本专利技术提供了如第一方面所述的抗真菌肽或如第二方面所述的抗真菌组合物在杀死真菌和抑制真菌生长方面的用途；或者，如第一方面所述的抗真菌肽或如第二方面所述的抗真菌组合物在制备用于预防或治疗受试者中的真菌感染的药物方面的用途。在第四方面，本专利技术涉及将如第一方面所述的抗真菌肽或如第二方面所述的抗真菌组合物用于预防和/或治疗真菌感染。附图说明图1为根据实验例1，加入不同浓度的SP肽培养24h后的新生隐球菌培养液的OD600。误差棒表示三个独立样品测试结果的标准差。图2为根据实验例2，利用CK肽(4μM)和SP肽(4μM)对新生隐球菌进行处理后的PI染色的流式细胞术统计结果。误差棒表示三次独立实验结果的标准差。PI染色％为PI阳性细胞的百分比。***表示P<0.001。图3为根据实验例3，经Cytofix/CytopermTM、SP肽或CK肽处理的哺乳动物细胞流式细胞术的分析结果。图4为根据实验例4，溶血度随SP肽浓度变化的结果。图5示出根据实施例3建立的Tdh1和Yca1复合物的结构。其中，CAA89343对应于Tdh1，NP_014840对应于简化的Yca1。图6示出根据实施例3，对全长的Tdh1的生物信息学分析的结果。下划线标记氨基酸为Yca1作用于Tdh1的位点。具体实施方式抗真菌肽本专利技术的抗真菌肽(以下简称为SP肽)具有如下的氨基酸序列：IRIAINGFGRIGRLVLRLALQRKDIEVVA(SEQIDNO：1)。生物信息学分析表明，SP肽的功能片段可具有如下的任一种序列：IRIAINGFGR(SEQIDNO：2)；IRIAINGFGRIGR(SEQIDNO：3)；IRIAINGFGRIGRLVLR(SEQIDNO：4)；IRIAINGFGRIGRLVLRLALQR(SEQIDNO：5)；IRIAINGFGRIGRLVLRLALQRKDIEVV(SEQIDNO：6)。SP肽是位于酿酒酵母p3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)同工酶1(Tdh1p)N端的第1-29位氨基酸。本领域已知的是，在酿酒酵母细胞中，GAPDH是类胱天蛋白酶(metacaspase)的天然底物，在刺激信号(例如高NO水平)下，类胱天蛋白酶靶向并水解GAPDH，诱导细胞凋亡。digestome实验显示，诱导YCA1过表达细胞凋亡后检测到GAPDH同工酶2(Tdh2p)和GAPDH同工酶3(Tdh3p)被类胱天蛋白酶水解的片段，然而并未检测到Tdh1p的片段(Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase(GAPDH)isaspecificsubstrateofyeastmetacaspase，BiochimicaetBiophysicaActa1813(12)：2044-9)。此外，现有技术还未发现水解后的片段具有何种功能，或其是否也参与凋亡通路。本专利技术的专利技术人在实验中发现，SP肽介导了酿酒酵母DNA损伤信号的细胞间传递，导致细胞群体性凋亡。实验证实，SP肽对于其它真菌(例如隐球菌)也具有杀伤作用。在一些实施方式中，本专利技术提供了具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的抗真菌肽、其功能片段、功能变体或衍生物。本文使用的术语“功能部分”或“功能片段”是抗真菌肽的一部分，该部分具有与完整抗真菌肽相同的作用(例如抑制真菌生长或杀死真菌)。在一些实施方式中，SP肽的功能片段包含SEQIDNO：2所示的序列。在优选的实施方式中，SP肽的功能片段具有SEQIDNO：2-6中任一项所示的氨基酸序列。本文使用的术语“变体”涉及序列的改变，而不考虑所述改变是否使所述蛋白的功能发生变化(如，增加、减少、赋予新的功能)，或者所述改变是否对蛋白的功能不产生影响(例如，突变或变异是沉默的)。本文使用的术语“衍生物”是指经化学修饰的蛋白或多肽，例如，通过泛素化、标记、聚乙二醇化(用聚乙二醇进行的衍生化)或其它分子的添加进行。当分子包含通常不是该分子的一部分的附加化学部分时，该分子也是另一分子的“衍生物”。此类部分可改善分子的溶解度、吸收、生物半衰期等。或者，所述部分可降低分子的毒性、或者消除或减弱该分子的不希望的副作用等。能够介导此类效果的部分公开于Remington’sPharmaceuticalSciences(第21版，Tory著，LippincottWilliams&Wilkins，Baltimore，MD，2006年)。当与“衍生物”或“变体”结合使用时，术语“功能”或“功能性”是指一种蛋白分子的衍生物或变体具有与该蛋白分子相似的生物活性。在这样的上下文中，“基本上相似”意味着生物活性(例如，肽的杀菌性)为对照(例如，全长的抗菌肽)活性的至少50％，例如，至少60％、70％、80％、90％、95％、100％或甚至更高(例如，相比于SP肽，变体或衍生物具有更高的活性)，例如，110％、120％以上，包括端值。在一些实施方式中，SP肽的功能变体或衍生物包含SEQIDNO：1-SEQIDNO：6中任一项所示的氨基酸序列，且具有SP肽的功能。在一些实施方式中，SP肽的功能变体或衍生物包含与SEQIDNO：1-SEQIDNO：6中任一项具有80％以上同源性的氨基酸序列，且具有SP肽的功能。不希望被理论所限地，就利用本专利技术的抗真菌肽在对受试者进行治疗的用途而言，考虑到外源肽可能引起免疫反应，可用于本专利技术的抗真菌肽具有的序列选自于由如下氨基酸序列所组成的组：SEQIDNO：1-SEQIDNO：6，或与上述序列至少80％同源性的功能变体。术语“同源性”、“一致性”和“相似性”是指两个肽之间或两个最佳比对的核酸分子之间序列相似的程度。同源性和一致性可通过比对各序列中的位置来确定。本文使用的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗真菌肽，其中，所述抗真菌肽具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种抗真菌肽，其中，所述抗真菌肽具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。2.一种抗真菌肽，所述抗真菌肽为权利要求1所述的抗真菌肽的功能片段，其中，所述功能片段包含SEQIDNO：2所示的氨基酸序列；优选地，所述功能片段具有SEQIDNO：2-SEQIDNO：6所示的氨基酸序列中的任一种的氨基酸序列。3.如权利要求1-4中任一项所述的抗真菌肽，其中，所述抗真菌肽进一步包含表达和纯化的标签序列和/或便于从环境中回收的功能序列；优选地，所述纯化标签选自于由如下标签所组成的组：多组氨酸标签、谷胱甘肽-S-转移酶标签、血凝素标签、FLAG标签、myc标签、麦芽糖结合蛋白标签、几丁质结合蛋白标签和荧光标签；优选地，所述功能序列为链霉亲和素或卵亲和素。4.一种抗真菌组合物，其中，所述抗真菌组合物包含如权利要求1-3中任一项所述的抗真菌肽；优选地，所述抗真菌肽以不低于4μM的浓度包含于所述组合物中；优选地，所述抗真菌组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体；优选地，所述抗真菌组合物进一步包含至少一种选自于由如下的化合物所组成的组中的化合物：5-氟胞嘧啶、两性霉素B、阿尼芬净、联苯苄唑、布康唑、卡泊芬净、氯登妥因、氯苯甘醚、环吡酮胺、克霉唑、依柏康唑、益康唑、氟康唑、氟曲马唑、艾沙康唑、异康唑、伊曲康唑、酮康唑、米卡...

【专利技术属性】
技术研发人员：付钰，连宪强，周利艳，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11