一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，尤其涉及一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法。该方法将干燥的灵芝菌丝体与水混合，先经高速均质机混合均匀后，再经500～1500bar高压均质分散1～5次后，离心，获得含有多糖的上清液。相比于传统的水提法，可以提高灵芝多糖的收率、缩短灵芝多糖的提取时间、提高灵芝多糖的抗氧化能力和抗炎症效果。

【技术实现步骤摘要】
一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法。
技术介绍
灵芝Ganodermalucidum(Curtis:Fr.)P.Karst.为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，自古以来就是我国名贵药用真菌。它可以治疗多种疾病，滋补强壮、扶正固本，有利于机体保持或恢复稳态的名贵中药。现代医学研究发现：灵芝中主要生理活性成分是灵芝多糖和灵芝酸，它们具有抗肿瘤、降低血液中胆固醇含量、抗炎症等药效。近年来，人们通过一系列研究发现灵芝多糖除了有免疫调节活性外，还具有抗肿瘤、抗衰老、降血糖、降血脂、抗血栓、促进核酸和蛋白质的生物合成的功效。正是由于有这么多的生物活性，灵芝活性多糖正被迅速开发出来作为药物和保健食品。然而野生灵芝资源有限，人工栽培灵芝子实体周期长，无论野生还是栽培灵芝子实体，其多糖含量都较低，仅为其干重的2％左右，而且多糖提取得率低，生产成本高，限制了灵芝多糖的广泛应用。人工栽培周期长(2个月以上)，生产力低下，又受季节限制，从而影响了灵芝多糖的开发生产。传统上多采用人工栽培的子实体进行灵芝多糖的提取，由于其生产周期长、受气候影响大、产量及质量不稳定，并因水、空气及土壤的原因，造成重金属的富集。因此，希望对液体发酵培养获得的灵芝菌丝体进行提取，如此可实现周期短(2～3天)，成本低，产量大的多糖制备，从而大大提高灵芝多糖的生产能力。但是，一方面，液体发酵获得灵芝菌丝体并不容易；另一方面，菌丝体灵芝酸存在于灵芝菌丝体细胞壁内，提取过程中不易溶出，而充分破壁的方法总是难免破坏多糖的活性。因此，研究提取效率高、多糖活性高的提取物方法仍是本领域研究的热点。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法，该方法收率高，且所得多糖的活性较高。本专利技术提供的提取灵芝菌丝体中多糖的方法包括：将干燥的灵芝菌丝体与水混合，经5000rpm高速均质分散5min，然后500～1500bar高压均质分散1～5次，经离心，获得含有多糖的上清液。本专利技术实施例中，所述干燥的灵芝菌丝体与水的质量-体积比为1g：10～30mL。一些实施例中，所述干燥的灵芝菌丝体与水的质量-体积比为1g：30mL。本专利技术实施例中，所述高压均质分散的条件为1000bar分散3～5次，或1500bar分散1～2次。一些具体实施例中，所述高压均质分散的条件为1000bar分散2次。一些具体实施例中，所述高压均质分散的条件为1000bar分散3次。一些具体实施例中，所述高压均质分散的条件为1000bar分散4次。一些具体实施例中，所述高压均质分散的条件为1000bar分散5次。一些具体实施例中，所述高压均质分散的条件为1500bar分散1次。一些具体实施例中，所述高压均质分散的条件为1500bar分散2次。本专利技术实验表明，压力越高，从灵芝菌丝中提取的灵芝多糖的收率越高。在500bar和1000bar条件下循环次数越多，灵芝多糖的收率越高。但是在1500bar条件下，循环两次就可以将灵芝多糖的收率提高到100％，然而之后多次循环，多糖的收率反而下降，这可能是由于在连续高压的作用下，产生大量的热能导致多糖类物质分解。并且，通过高压均质机提取的灵芝菌丝提取液的抗氧化能力要远高于传统热提法获得的灵芝菌丝提取物。随着压力和循环次数的增加，灵芝菌丝提取物的抗氧化能力不断增加，但是1500bar条件下，随着循环次数的增加，抗氧化能力不断下降。可能原因为高压作用下，料体的温度不断上升，导致生物活性物质失活，导致抗氧化能力下降。另外，随着压力和循环次数的增加，灵芝菌丝提取物的抗炎症能力不断增加，但是1500bar条件下，随着循环次数的增加，抗氧化能力不断下降。本专利技术实施例中，所述高速均质分散的速度为5000rpm，每次均质的时间为5min。一些实施例中，所述高压均质分散的温度为常温。本专利技术实施例中，所述离心的转速为3000rpm，时间为10分钟。本专利技术实施例中，所述灵芝菌丝体的制备方法为：将经过活化的灵芝菌种按1～3cm2/100mL培养基的接种量接种到麦芽浸粉液体发酵培养基中，于25～30℃下培养3～7天，获得含有灵芝菌丝体的发酵液。所述灵芝菌种为固体培养基培养获得的灵芝菌种。按照表面面积收取菌种。所述麦芽浸粉液体发酵培养基包括：麦芽浸粉1.5w/v％～2.5w/v％，葡萄糖1.5w/v％～2.5w/v％，蛋白胨0.07w/v％～0.13w/v％，酵母膏0.07w/v％～0.13w/v％，溶剂为水。通过液体发酵的方式培养灵芝菌丝体，培养方式简单，培养时间只需要3～7天即可。同时，菌丝体分散较好，细胞壁较薄，易破碎，方便提取。与传统的灵芝子实体培养方法相比，通过液体发酵方法获取灵芝菌丝具有操作简单，培养周期短，方便提取的优点。本专利技术实施例中，所述上清液经干燥获得灵芝多糖，或者经乙醇沉淀、洗涤后获得灵芝多糖。所述乙醇沉淀采用三倍体积的乙醇进行沉淀，所述沉淀的温度为5℃，时间为48小时。所述乙醇沉淀与洗涤之间还包括高速离心后取沉淀的步骤，所述高速离心的转速为3000rpm，时间为10分钟。所述洗涤包括，采用水将离心获得的沉淀以水复溶后，再以三倍水体积的乙醇沉淀，沉淀的温度为5℃，时间为8小时，经3000rpm转离心10分钟后；再次以水复溶，然后以三倍水体积的乙醇沉淀，沉淀的温度为5℃，时间为8小时，经3000rpm转离心10分钟后；沉淀以乙醇清洗后，干燥获得固体的灵芝多糖。本专利技术所述方法制得的灵芝多糖。本专利技术所述方法制得的灵芝多糖在制备化妆品或保健品中的应用。本专利技术实施例中，所述化妆品或保健品具有抗炎和/或抗氧化的功效。本专利技术提供的提取灵芝菌丝体中多糖的方法包括：将干燥的灵芝菌丝体与水混合，经5000rpm高速均质分散5min，然后500～1500bar高压均质分散1～5次，经离心，获得含有多糖的上清液。相比于传统的水提法，可以提高灵芝多糖的收率，传统的热水提取方法的提取效率为88.04％，高压均质提取法1000bar，循环3次的方法提取效率为100.66％；缩短灵芝多糖的提取时间，传统的热水提取方法提取时间至少在2小时以上，而采用高压均质机提取的提取时间可以缩短至几分钟。由于采用高压均质技术，在提取过程中由于受高压，强剪切力，撞击，空洞效应等的作用，造成大分子多糖的分子量的降低，分解成小分子多糖，提高了灵芝多糖的抗氧化能力和抗炎症效果。传统的热水提取方法的提取液的抗氧化能力仅为42.78％，高压均质提取法1000bar，循环3次的方法提取液的抗氧化能力为68.07％；传统的热水提取方法的提取液的抗炎症能力仅为21.1％，高压均质提取法1000bar，循环3次的方法提取液的抗炎症能力为28.4％，该效果经统计学分析，存在显著性差异，p<0.05。附图说明图1示灵芝菌丝内灵芝多糖的总含量；图2示不同压力及不同的循环次数下灵芝多糖的收率；图3示不同压力及不同的循环次数下灵芝多糖的抗氧化能力；图4示不同压力及不同的循环次数下灵芝多糖的抗炎症能力。具体实施方式本专利技术提供了一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法，其特征在于，将干燥的灵芝菌丝体与水混合，经5000rpm高速均质分散5min，然后500～1500bar高压均质分散1～5次，经离心，获得含有多糖的上清液。

【技术特征摘要】
1.一种提取灵芝菌丝体中多糖的方法，其特征在于，将干燥的灵芝菌丝体与水混合，经5000rpm高速均质分散5min，然后500～1500bar高压均质分散1～5次，经离心，获得含有多糖的上清液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干燥的灵芝菌丝体与水的质量-体积比为1g：10～30mL。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高压均质分散的条件为1000bar分散3～5次，或1500bar分散1～2次。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高速均质分散的速度为5000rpm，每次均质的时间为5min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴跃锋，康文术，何广文，颜少慰，
申请(专利权)人：湖南御家化妆品制造有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43