海螵蛸在制药中的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种海螵蛸在制药中的用途，海螵蛸可单独作为原料用于制备预防急性胃粘膜损伤的药物，本发明专利技术通过复制急性胃粘膜损伤大鼠模型，对海螵蛸及阳性对照物奥美拉唑对胃粘膜病理形态学、EGF、PGE2、MDA、SOD影响进行观察。结果发现海螵蛸使胃粘膜损伤指数、炎症积分明显降低，并可增加血清EGF、PGE2的表达水平，同时降低组织MDA的表达水平。提示海螵蛸对实验性大鼠急性胃粘膜损伤有较好的预防作用。海螵蛸可以制成药物用于对NSAIDs类药物引起的急性胃黏膜损伤进行有效预防。

Use of cuttlebone in pharmaceuticals

The present invention discloses the use of Octopus cuttlefish in medicine. Octopus cuttlefish can be used as a raw material to prepare drugs for preventing acute gastric mucosal injury. By replicating the rat model of acute gastric mucosal injury, Octopus cuttlefish and the positive control substance omeprazole can influence the pathological morphology, EGF, PGE2, MDA and SOD of gastric mucosa. Look at it. The results showed that Octopus cuttlefish significantly reduced gastric mucosal injury index and inflammatory score, increased the expression of EGF and PGE2 in serum, and decreased the expression of MDA in tissues. It indicates that the cuttlebone has a good preventive effect on acute gastric mucosal lesion in rats. Octopus cuttlefish can be made into drugs to effectively prevent acute gastric mucosal injury caused by NSAIDs.

【技术实现步骤摘要】
海螵蛸在制药中的用途
本专利技术涉及海螵蛸的用途，尤其涉及在制药领域中的用途。
技术介绍
海螵蛸为乌贼科海洋动物无针乌贼或金乌贼的干燥内壳，属较常用中药，主要成分为碳酸钙。常与其他中药配合使用用于治疗胃酸过多、胃溃疡以及治疗多种出血等。大量临床研究显示，海螵蛸治疗消化性溃疡有效，但其治疗溃疡的机理研究还不是很明确。NSAIDs作为一种已有百余年使用历史的传统解热镇痛和抗炎药物，因其确定的抗炎、止痛、退热、抗血小板聚集作用，已经被广泛应用于临床各学科。而且随着适应症的不断延伸，其使用量不断上升。但是NSAIDs最重要的胃肠道副反应，如出血糜烂性胃炎、消化性溃疡甚至出血等严重限制了临床应用。本专利技术可充分开发和利用我国丰富的海洋资源，推动民族医药事业的发展。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种海螵蛸的新用途，即在制药中的新应用。为实现上述专利技术目的，采用如下技术方案：海螵蛸单独作为原料用于制备预防急性胃粘膜损伤药物的用途，尤其是可单独用于制备预防NSAIDs类药物所致急性胃黏膜损伤的药物的用途；本专利技术以药效学实验和结果来说明其在制药领域中的新用途。同时，本专利技术还提供了海螵蛸元素测定的方法和结果。附图说明图1各组胃黏膜大体观；A：正常组，胃黏膜光滑，色泽红润，黏膜皱襞纹理清晰；B：模型组，粘膜充血水肿明显，弥漫点线状溃疡病灶；C：奥美拉唑组，少量点状糜烂，黏膜轻度充血；D：海螵蛸高剂量组，少量点状糜烂，黏膜轻度充血；E：海螵蛸中剂量组，充血和点状溃疡病灶；F：海螵蛸低剂量组，充血和点线状溃疡病灶。图2正常对照组大鼠HE染色组织学观察；图3模型组大鼠HE染色组织学观察；图4奥美拉唑组大鼠HE染色组织学观察；图5海螵蛸高剂量组大鼠HE染色组织学观察；图6海螵蛸中剂量组大鼠HE染色组织学观察；图7海螵蛸低剂量组大鼠HE染色组织学观察；图8海螵蛸ICP-MS法元素定性分析结果。具体实施方式一、海螵蛸对预防大鼠急性胃粘膜损伤的药效学作用采用以40mg/kg吲哚美辛溶液灌胃造成急性胃粘膜损伤大鼠模型。对海螵蛸及阳性对照物奥美拉唑对胃粘膜病理形态学、EGF、PGE2、MDA和SOD影响进行观察。结果发现海螵蛸使胃粘膜损伤指数、炎症积分明显降低，并可增加血清EGF、PGE2和组织SOD表达水平，同时降低组织MDA的表达水平。提示海螵蛸对实验性大鼠急性胃粘膜损伤有较好的预防作用。海螵蛸药理机制主要是通过刺激细胞因子EGF的分泌、增加PGE2的合成和分泌及防止脂质过氧化和激活清除自由基的酶有关。二、材料和方法1.实验动物选用清洁级、健康、性成熟SD大鼠60只，雄性，体重150±15g。饲养于浙江大学邵逸夫医院动物实验室，动物质量合格证号：0049039。按照《大鼠SOP/GTZ/076-082》，在全屏障清洁级动物实验房内，采用架式笼养，恒温(18-22)℃，湿度55％-65％，光照、黑暗各12小时交替，在中央空调集中通风9-15次/h条件下饲养(动物试验设施条件合格证：浙实验动物设施条件准字号为SYXK(浙)-2004-0050)。2.实验试剂及饲料吲哚美辛肠溶片：山西云鹏制药有限公司生产，水合氯醛：国药集团化学试剂有限公司生产，奥美拉唑镁肠溶片：阿斯利康制药有限公司生产，海螵蛸：自备饮用水：城市自来水过滤除菌后装入消毒过的饮水瓶内饮用。饲料：浙江省实验动物中心提供的喂饲消毒除菌后的全价营养颗粒饲料。Rat-PGE2ELISAKit：上海拜沃生物科技有限公司；Rat-EGFELISAKit：上海拜沃生物科技有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)WST-1法测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；丙二醛(MDA)试剂盒：南京建成生物工程研究所；BCA法蛋白定量试剂盒：碧云天生物技术研究所；3.实验方法3.1动物模型制备制模前大鼠禁食不禁水24h，用吲哚美辛溶液(吲哚美辛肠溶片片以临床等效剂量40mg/kg溶于蒸馏水)灌胃，建立吲哚美辛致大鼠急性胃粘膜损伤模型。灌胃容量为1ml/100g大鼠体重。3.2动物分组和给药1)正常对照组：10只，禁食24h后给予蒸馏水灌胃。2)模型组：10只，禁食24h后给予蒸馏水灌胃，半小时后再给予吲哚美辛溶液灌胃。吲哚美辛片以临床等效剂量40mg/kg溶于蒸馏水。3)奥美拉唑组：10只，禁食24h后给予奥美拉唑溶液灌胃，半小时后再给予吲哚美辛溶液灌胃。奥美拉唑胶囊以临床等效剂量4mg/kg溶于磷酸缓冲液。4)海螵蛸高剂量组：10只，禁食24h后给予海螵蛸混悬液灌胃，半小时后再给予吲哚美辛溶液灌胃。海螵蛸粉3000mg/kg溶于蒸馏水。5)海螵蛸中剂量组：10只，禁食24h后给予海螵蛸混悬液灌胃，半小时后再给予吲哚美辛溶液灌胃。海螵蛸粉1500mg/kg溶于蒸馏水。6)海螵蛸低剂量组：10只，禁食24h后给予海螵蛸混悬液灌胃，半小时后再给予吲哚美辛溶液灌胃。海螵蛸粉750mg/kg溶于蒸馏水。灌胃容量均为1ml/100g大鼠体重。药物剂量按《药品注册管理办法》(局令第28号)要求设计并依照动物与人体间的等效剂量换算。4.标本制备灌药结束6h后，用4％水合氯醛腹腔注射麻醉后按以下步骤采集和处理血及组织标本。血标本：大鼠股动脉取血4-5ml，3000rpm，离心10min，分离血放冻存管-20℃冰箱保存，待测血PGE2和EGF。组织标本：在距贲门和幽门1.5cm处结扎、离断，取出全胃，沿胃大弯剪开，冰生理盐水冲洗，滤纸吸干后铺开，以游标卡尺测定损伤最大长径及垂直于最大长径的最大宽径计算损伤指数。剪取损伤明显处约1cm×1cm大小胃组织，置于冻存管，-80℃冰箱保存，待测组织PGE2，SOD，MDA。余黏膜标本用10％中性甲醛液固定，次日以平行于胃长轴方向的最长径为中心取材，按常规脱水，石蜡包埋，并以损伤的最长径为中心5μm厚度连续切片，拷至载玻片上后进行苏木素–伊红(HE)染色。5.检测指标和方法5.1损伤指数(LI)：在胃黏膜大体标本上用游标卡尺测量损伤长宽径，损伤长径0-1mm计1分，1-2mm计2分，2-3mm计3分，3-4mm计4分，>4mm则分段计5分。如果宽径>2mm，则评分乘2倍。5.2炎症积分：胃粘膜炎症分级积分参照Rauws分级标准：粘膜固有层炎症细胞、单核细胞、浸润的密度0～2分；粘膜固有层嗜中性多核粒细胞浸润的密度0～3分；粘膜上皮内嗜中性多核粒细胞的密度0～3分；浅表糜烂的程度0～2分。每个参数的打分标准为：0是没有，1是轻度，2是中度，3是重度。应用总分0～10的变化来衡量胃黏膜炎症的程度。5.3血清PGE2浓度的测定：自–20℃低温冰箱取出血清，按试剂盒说明书要求，以酶联免疫法测定血浆PGE2浓度，以pg/ml表示。具体步骤如下：a)加样：将标准品和处理后的待测样本按每孔50ul依次加入，并做好标记。b)加酶：在标准品孔及待测样本孔中分别加入25ul酶联亲和物，充分混匀。c)孵育：将包被微孔板覆膜并在37℃孵育反应60分钟。d)洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，扣干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，扣干。e)显色：每孔依照次序分别加入底物I和II各50ul，充分混匀。在室温下避光反应15分钟。f)终止：每孔加终止液50μl，充分混匀，终本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海螵蛸在制药中的用途，其特征在于，以海螵蛸单独作为原料用于制备预防急性胃粘膜损伤的药物的用途。

【技术特征摘要】
1.一种海螵蛸在制药中的用途，其特征在于，以海螵蛸...

【专利技术属性】
技术研发人员：姒健敏，方燕飞，陈淑洁，王良静，
申请(专利权)人：浙江大学，杭州博通胃肠病诊治技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33