用于治疗恶性实体肿瘤的减毒细菌制造技术

本发明专利技术涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中。

Attenuated bacteria for treatment of malignant solid tumors

The present invention relates to a recombinant attenuated gram-negative bacterial strain used in the treatment of malignant solid tumors in a subject.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗恶性实体肿瘤的减毒细菌
本专利技术涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中。
技术介绍
治疗恶性实体肿瘤的主要问题是将治疗分子以足够的量递送至癌细胞，同时减少对非相关细胞和组织的损伤。最常见的治疗方法——手术、化疗和放射治疗往往不能治愈患者，且副作用很大，如恶心和腹泻。因此，已经开发了几种其他治疗策略，包括血管生成抑制剂和免疫疗法。为了减少对非致癌组织的损害，允许靶向药物递送的方法是非常引人注意的。例如，使用识别肿瘤细胞表面结构，并且在最佳情况下，选择性结合肿瘤细胞的抗体。为了改善这种抗体的机制，可将它们与治疗剂或与包装了药物的脂质囊泡缀合。这种囊泡的难题之一是活性试剂的恰当释放。更加复杂的是治疗性蛋白或肽的递送，特别是当靶向的是细胞内机制时。已经尝试了许多替代方法来解决将治疗性蛋白递送至真核细胞中的问题，其中包括“细胞穿透肽”(CPP)或类似技术，以及各种基于纳米颗粒的方法学。所有这些技术均具有效率低的缺点，并且细胞通过内吞作用摄取的货物(cargo)可能最终在溶酶体中降解。此外，货物-载体在人体内的稳定性需求与靶细胞内不稳定和释放的需求之间的矛盾构成了这种技术的固有问题。当从远端部位施用时，多种细菌均已显示可在恶性实体肿瘤内复制，包括大肠杆菌(Escherichiacoli)，霍乱弧菌(Vibriocholerae)，肠道沙门氏菌(Salmonellaenterica)，单核细胞增生利斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和双歧杆菌(Bifidobacteria)。目前，只有卡介苗(bacillusCalmette-Guérin,BCG，来自牛结核分枝杆菌(Mycobacteriumbovis))用于临床实践。施用BCG以治疗浅表性膀胱癌，而其潜在分子机制仍然大部分未知。用于治疗恶性实体肿瘤的最佳细菌菌株将特异性地在肿瘤部位积聚和增殖，同时在不相关的部位被消灭。从这种意义上说，用于靶向癌症治疗的最佳细菌载体应该在期望的作用部位提供高度积聚，而在非相关部位最少地存在。能够例如将细菌内产生的货物递送至癌细胞内的其作用部位(即细菌外部)以治疗恶性实体肿瘤的细菌菌株的开发，仍然是主要的挑战。
技术实现思路
本专利技术涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中。在一些实施方案中，本专利技术提供了重组减毒革兰氏阴性细菌菌株及其用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的用途，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株允许病毒蛋白，最重要的是功能性真核蛋白的各种III型效应子，以及IV型效应子，易位至恶性实体肿瘤的细胞中。在第一方面，本专利技术涉及用载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，其用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。同样地，本专利技术涉及治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在所述恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用用载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。同样地，本专利技术涉及用载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株的用途，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，其用于制造治疗受试者的恶性实体肿瘤的药物，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚。另一方面，本专利技术涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在对真核细胞有毒力的至少一种细菌效应蛋白的生产方面有缺陷，或者在作为分泌系统装置(machinery)的一部分的至少一种细菌蛋白的生产方面有缺陷，其用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。同样地，本专利技术涉及治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在所述恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在对真核细胞有毒力的至少一种细菌效应蛋白的生产方面有缺陷，或者在作为分泌系统装置一部分的至少一种细菌蛋白的生产方面有缺陷，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。同样地，本专利技术涉及重组减毒革兰氏阴性细菌菌株的用途，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在对真核细胞有毒力的至少一种细菌效应蛋白的生产方面有缺陷，或者在作为分泌系统装置一部分的至少一种细菌蛋白的生产方面有缺陷，其用于制造治疗受试者的恶性实体肿瘤的药物，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚。在另一方面，本专利技术涉及一种药物组合物，其包含用载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以及药学上可接受的载体，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，其用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用所述药物组合物，其中所述药物组合物以足以治疗受试者的量施用。同样地，本专利技术涉及治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在所述恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含用载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株和药学上可接受的载体，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，其中所述药物组合物以足以治疗所述受试者的量施用。同样地，本专利技术涉及包含用载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株的药物组合物的用途，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，其用于制造治疗受试者的恶性实体肿瘤的药物，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚。在另一方面，本专利技术涉及一种药物组合物，其包含重组减毒革兰氏阴性细菌菌株和药学上可接受的载体，其中所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用如下载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.19 EP 15195490.61.用如下载体转化的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，所述载体按5’至3’方向包含：启动子；编码来自细菌效应蛋白的递送信号的第一DNA序列，其可操作地连接至所述启动子；编码异源蛋白的第二DNA序列，其与所述第一DNA序列的3’末端框内融合，所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株用于治疗受试者的恶性实体肿瘤的方法中，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在恶性实体肿瘤中积聚，所述方法包括向受试者施用所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株以足以治疗受试者的量施用。2.根据权利要求1所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株选自由以下组成的组：耶尔森氏菌属(Yersinia)、埃希氏菌属(Escherichia)、沙门氏菌属(Salmonella)和假单胞菌属(Pseudomonas)。3.根据权利要求1或2所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在对真核细胞有毒力的至少一种细菌效应蛋白的生产方面有缺陷。4.根据权利要求1或2所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株在对真核细胞有毒力的所有细菌效应蛋白的生产方面有缺陷。5.根据权利要求1所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述重组减毒革兰氏阴性细菌菌株是突变的耶尔森氏菌菌株，在突变的耶尔森氏菌菌株中，编码对真核细胞有毒力的细菌效应蛋白的所有效应子编码基因均被突变，使得所得耶尔森氏菌不再产生对真核细胞有毒力的任何功能性细菌效应蛋白。6.根据权利要求5所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中突变的耶尔森氏菌菌株是小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica)，并且来自细菌效应蛋白的递送信号是来自细菌T3SS效应蛋白的递送信号，其中来自细菌T3SS效应蛋白的递送信号包含小肠结肠炎耶尔森氏菌YopE效应蛋白的N-末端138个氨基酸。7.根据权利要求1-6中任一项所述的重组减毒革兰氏阴性细菌菌株，其中所述异源蛋白选自由以下组成的组：参与细胞凋亡或细胞凋亡调节的蛋白、细胞周期调节剂、锚蛋白重复蛋白、细胞信号转导蛋白、报道蛋白、转录因子、蛋白酶、小GTP酶、GPCR...

【专利技术属性】
技术研发人员：西蒙·伊泰格，马利斯·阿姆斯特茨，克里斯托夫·卡斯帕，盖伊·R·科内利斯，
申请(专利权)人：巴塞尔大学，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH