海葵毒素新基因的克隆、表达及生物活性制造技术

本发明专利技术通过构建侧花海葵（Ａｎｔｈｏｐｌｅｕｒａｓｐ）触手ｃＤＮＡ文库和ＤＮＡ测序，并根据海葵神经毒素蛋白的两端保守氨基酸序列，设计简并引物，用ＲＴ－ＰＣＲ的方法，分离出１个新的海葵多肽神经毒素基因，命名为ｓｕ。新基因长度为１４１ｂｐ，编码４７个氨基酸的成熟肽（序列号码１）。所表达的蛋白质等电点为７．９，分子量约为４，８００道尔顿。将ｓｕ克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体ｐＥＴＴＲＸ的ｔｒｘＡ基因３’末端，构建符合读码框的融合基因，该融合蛋白在大肠杆菌中以胞内可溶的形式存在，表达量可达１００～１２０ｍｇ／Ｌ。通过Ｎｉ－Ｃｈｅｌａｔｉｎｇ亲和色谱层析，蛋白酶３Ｃ切割和凝胶过滤，得到纯度在９５％以上成熟的重组海葵神经毒素蛋白，得率为１０～１５ｍｇ／Ｌ。该蛋白对大鼠离体心脏具有强烈地促收缩作用。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种如序列表中序列号码１所示核苷酸序列的ＤＮＡ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐安龙，刘文华，彭文烈，卫剑文，彭立胜，陈琪，
申请(专利权)人：北京博奥环宇生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]