一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法：具体包括(1)提取茎柔鱼肌肉脂肪酸；(2)利用GC‑MS测定脂肪酸；(3)分析肌肉脂肪酸数据；(4)计算多个地理群体茎柔鱼的n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸判别系数和常量；(5)判别：利用上述步骤(1)‑(3)得到待判别的茎柔鱼肌肉n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸含量百分比，和步骤(4)的判别系数和常量计算多个判别函数值，以最大函数值对应的地理区域表示其所属地理群体。本方法的方法具有快速、准确性高的优点。

A method of using muscle essential fatty acids to distinguish between multiple populations of squid

The invention relates to a method for using muscle essential fatty acids to distinguish between multiple populations of squid: including (1) extracted from squid muscle fatty acid; (2) determination of fatty acid by GC MS; (3) analysis of fatty acids in the muscle of data; (4) calculation of N multiple geographic groups squid 3 and N 6 series of unsaturated fatty acids and discriminant coefficient constant; (5) discrimination: using the above steps (1) (3) to obtain the identification of squid muscle n 3 and N 6 series unsaturated fatty acid content and percentage, step (4) and the discriminant coefficient constant calculation of multiple discriminant function to the maximum value, function value corresponding to the geographical areas said their respective geographical groups. This method has the advantages of fast and high accuracy.

【技术实现步骤摘要】
一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法
本专利技术涉及水产学领域，更具体地说，涉及一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法。
技术介绍
脂肪酸是一种特殊的化合物，主要以三羧酸甘油酯和磷脂的形式存在，其在生物的摄食活动过程中相对稳定不易变化，可用于分析食物来源，是天然生物标志物之一(许强,杨红生.脂肪酸标志物在海洋生态系统营养关系研究中的应用[J].海洋学报,2011,33(1):1-6)。作为生物标志物，脂肪酸有几大优越性：第一，脂肪酸可以通过形成贮存脂，储存在生物体内，从而可反映一段时期内生物的摄食情况，相对于传统的胃含物分析法，减小了判断生物食性的偶然性；第二，在新陈代谢过程中相对稳定，在摄食和同化过程中结构基本保持不变；第三，生物体内三羧酸甘油酯中的脂肪酸主要来自于所摄入的食物(HendersonRJ,SargentJR.Lipidbiosynthesisinrainbowtrout,Salmogairdnerii,feddietsofdifferinglipidcontent[J].ComparativeBiochemistry&PhysiologyPartCComparativePharmacology,1981,69(1):31-37)。海洋生物的脂肪酸分成饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸两类。其中n-3和n-6系列高度不饱和脂肪酸只能从饵料中获取，不能自身合成，因此这些脂肪酸被称为必需脂肪酸(OlsenY.LipidsandEssentialFattyAcidsinAquaticFoodWebs:WhatCanFreshwaterEcologistsLearnfromMariculture？[M]//LipidsinFreshwaterEcosystems.SpringerNewYork,1999:161-202)，这些必需脂肪酸常作为海洋食物关系研究中的脂肪酸标志物(GordonBJ,TocherDR,MacdonaldFM,etal.Effectsofdietsrichinlinoleic(18:2n-6)andα-linolenic(18:3n-3)acidsonthegrowth,lipidclassandfattyacidcompositionsandeicosanoidproductioninjuvenileturbot(ScophthalmusmaximusL.)[J].FishPhysiologyandBiochemistry,1994,13(2):105；SmithGI,AthertonP,ReedsDN,etal.Dietaryomega-3fattyacidsupplementationincreasestherateofmuscleproteinsynthesisinolderadults:arandomizedcontrolledtrial[J].AmericanJournalofClinicalNutrition,2011,93(2):402-412)。因此可利用脂肪酸标志物法了解茎柔鱼不同地理种群食性和营养地位。目前利用脂肪酸标志物对茎柔鱼不同地理种群进行摄食生态学研究的文献还未见报道。国内研究主要是对其肌肉和腕足的营养成分分析(杨宪时,王丽丽,李学英等,.秘鲁鱿鱼和日本海鱿鱼营养成分分析与评价[J].现代食品科技,2013,29(9):2247-2251)和食品加工研究(王丽丽.鱿鱼足即食休闲风味食品研究初探[D].大连海洋大学,2014)，国外仅Saito等(SaitoH,SakaiM,WakabayashiT.CharacteristicsofthelipidandfattyacidcompositionsoftheHumboldtsquid,Dosidicusgigas:Thetrophicrelationshipbetweenthesquidanditsprey[J].EuropeanJournalofLipidScienceandTechnology,2014,116(3):360-366)对秘鲁外海茎柔鱼不同组织和胃含物的脂肪酸组成进行了研究。大量研究发现，利用脂肪酸标志物的示踪作用可以较准确地揭示特定类群在单一或不同生境中的食物来源差异以及某一特定复杂生境中同种类群生物的食物来源情况。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法，该方法具有快速、准确性高的优点。为解决上述问题，本专利技术采用如下的技术方案：一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法，其包括如下步骤：(1)提取茎柔鱼肌肉脂肪酸，得到含有茎柔鱼肌肉脂肪酸的溶液；(2)利用GC-MS测定肌肉脂肪酸；(3)分析肌肉脂肪酸数据：a.定量分析肌肉脂肪酸含量，获得样品中n种脂肪酸的最终浓度(a1……an)，根据公式：an×稀释倍数×原始溶液体积，计算n种脂肪酸的含量，其中原始溶液体积为步骤(1)的含有茎柔鱼肌肉脂肪酸的溶液体积；b.各脂肪酸的含量除以总脂肪酸含量，计算出各脂肪酸所占含量百分比；c.筛选出p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比(W1……Wp)作为该样品的必需脂肪酸分析结果；(4)计算多个地理群体茎柔鱼的n-3和n-6系列不饱和脂肪酸判别函数系数和常量：a.以地理群体作为分组变量，n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比作为自变量，对已知来自多个(1……m)地理群体茎柔鱼的p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比进行线性判别分析；b.分析得出多个(1……m)地理群体的p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸的相应判别系数(K1-1……K1-p，K2-1……K2-p，Km-1……Km-p)和m个地理群体的常量(C1……Cm)；其中n，p，m都为整数，(5)判别：利用上述步骤(1)-(3)得到待判别的茎柔鱼肌肉中p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比(W1……Wp)，根据步骤(4)的判别系数和常量计算m个判别函数值(F1……Fm)，其中函数值F1、F2……Fm的计算方法为：F1＝K1-1×W1-1+K1-2×W1-2+……+K1-n×W1-p+C1，F2＝K2-1×W2-1+K2-2×W2-2+…+K2-p×W2-p+C2，……Fm＝Km-1×Wm-1+Km-2×Wm-2+……+Km-p×Wm-p+Cm，计算得到m个函数值F1……Fm，以最大函数值对应的地理群体表示其所属地理群体(也就是说如果F1值最大，则判断该茎柔鱼是第1个地理群体；如果F2值最大，则判断该茎柔鱼是第1个地理群体，……，如果Fm值最大，则判断该茎柔鱼是第m个地理群体。)。在本专利技术的一个优选实施方案中，步骤(1)提取茎柔鱼肌肉脂肪酸包括以下步骤：i.取样：漏斗锁软骨处剪取肌肉，用超纯水清洗样品表面，再去除皮肤，放入离心管中冷冻保存；ii.冷冻干燥：将冷冻后的样品放入冷冻干燥机中，-50℃至-60℃冷冻干燥24-48小时；iii.研磨：干燥后的样品研磨成粉末；iv.提取脂肪酸：利用三氯甲烷-甲醇(体积比1.5-2.5:1)浸泡上述粉末20-40小时，离心，上清液用0.6-1.5％的氯化钠水溶液洗涤，静置1.5-2.5小本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法，其包括如下步骤：(1)提取茎柔鱼肌肉脂肪酸，得到含有茎柔鱼肌肉脂肪酸的溶液；(2)利用GC‑MS测定肌肉脂肪酸；(3)分析肌肉脂肪酸数据：a.定量分析肌肉脂肪酸含量，获得样品中n种脂肪酸的最终浓度(a1……an)，根据公式：an×稀释倍数×原始溶液体积，计算n种脂肪酸的含量，其中原始溶液体积为步骤(1)的含有茎柔鱼肌肉脂肪酸的溶液体积；b.各脂肪酸的含量除以总脂肪酸含量，计算出各脂肪酸所占含量百分比；c.筛选出p种n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸含量百分比(W1……Wp)作为该样品的必需脂肪酸分析结果；(4)计算多个地理群体茎柔鱼的n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸判别函数系数和常量：a.以地理群体作为分组变量，n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸含量百分比作为自变量，对已知来自多个(1……m)地理群体茎柔鱼的p种n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸含量百分比进行线性判别分析；b.分析得出多个(1……m)地理群体的p种n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸的相应判别系数(K1‑1……K1‑p，K2‑1……K2‑p，Km‑1……Km‑p)和m个地理群体的常量(C1……Cm)；其中n，p，m都为整数，(5)判别：利用上述步骤(1)‑(3)得到待判别的茎柔鱼肌肉中p种n‑3和n‑6系列不饱和脂肪酸含量百分比(W1……Wp)，根据步骤(4)的判别系数和常量计算m个判别函数值(F1、F2……Fm)，其中函数值F1、F2……Fm的计算方法为：F1＝K1‑1×W1‑1+K1‑2×W1‑2+……+K1‑n×W1‑p+C1，F2＝K2‑1×W2‑1+K2‑2×W2‑2+…+K2‑p×W2‑p+C2，……Fm＝Km‑1×Wm‑1+Km‑2×Wm‑2+……+Km‑p×Wm‑p+Cm，计算得到m个函数值F1……Fm，以最大函数值对应的地理群体表示其所属地理群体。...

【技术特征摘要】
1.一种利用肌肉必需脂肪酸组成区分多个地理群体茎柔鱼的方法，其包括如下步骤：(1)提取茎柔鱼肌肉脂肪酸，得到含有茎柔鱼肌肉脂肪酸的溶液；(2)利用GC-MS测定肌肉脂肪酸；(3)分析肌肉脂肪酸数据：a.定量分析肌肉脂肪酸含量，获得样品中n种脂肪酸的最终浓度(a1……an)，根据公式：an×稀释倍数×原始溶液体积，计算n种脂肪酸的含量，其中原始溶液体积为步骤(1)的含有茎柔鱼肌肉脂肪酸的溶液体积；b.各脂肪酸的含量除以总脂肪酸含量，计算出各脂肪酸所占含量百分比；c.筛选出p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比(W1……Wp)作为该样品的必需脂肪酸分析结果；(4)计算多个地理群体茎柔鱼的n-3和n-6系列不饱和脂肪酸判别函数系数和常量：a.以地理群体作为分组变量，n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比作为自变量，对已知来自多个(1……m)地理群体茎柔鱼的p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比进行线性判别分析；b.分析得出多个(1……m)地理群体的p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸的相应判别系数(K1-1……K1-p，K2-1……K2-p，Km-1……Km-p)和m个地理群体的常量(C1……Cm)；其中n，p，m都为整数，(5)判别：利用上述步骤(1)-(3)得到待判别的茎柔鱼肌肉中p种n-3和n-6系列不饱和脂肪酸含量百分比(W1……Wp)，根据步骤(4)的判别系数和常量计算m个判别函数值(F1、F2……Fm)，其中函数值F1、F2……Fm的计算方法为：F1＝K1-1×W1-1+K1-2×W1-2+……+K1-n×W1-p+C1，F2＝K2-1×W2-1+K2-2×W2-2+…+K2-p×W2-p+C2，……Fm＝Km-1×Wm-1+Km-2×Wm-2+……+Km-p×Wm-p+Cm，计算得到m个函数值F1……Fm，以最大函数值对应的地理群体表示其所属地理群体。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)提取茎柔鱼肌肉脂肪酸包括以下步骤：i.取样：漏斗锁软骨处剪取肌肉，清洗样品表面，去除皮肤，放入离心管中冷冻保存；ii.冷冻干燥：将冷冻后的样品放入冷冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：贡艺，陈新军，李云凯，陈玲，高小迪，高春霞，李建华，王少琴，张海亭，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31