一种测定杭白芍花粉活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定杭白芍花粉活力的方法，包括：收集杭白芍的花粉；将所述的花粉置于培养基的表面进行离体培养；离体培养结束后统计花粉萌发率；所述培养基的组成为：蔗糖80～150g/L，硼酸15～30mg/L，琼脂8～10g/L；所述离体培养的时间为2.5～3.5h。本发明专利技术对药用杭白芍花粉的离体培养条件进行了探索，为其花粉活力的测定提供了一种简单、快速、可行、可靠的方法，为将药用杭白芍和北方观赏芍药进行杂交，培育出具备浙江特色、适应浙江气候的观赏芍药新品种起到了铺垫和促进作用。

A method for determination of pollen viability of Radix Paeoniae Alba

The invention discloses a method for the determination of Hangzhou White Peony Pollen viability, including: collecting Hangzhou White Peony Pollen; pollen surface will be positioned in the culture medium for in vitro culture; in vitro after statistics of pollen germination rate; the medium composition was: sucrose 80 ~ 150g/L, 15 ~ 30mg/L boric acid agar, 8 ~ 10g/L; the in vitro culture of the time was 2.5 ~ 3.5h. The invention of medicinal white peony root in vitro pollen culture conditions were explored, provides a simple and rapid method, feasible and reliable for the determination of pollen viability, the peony and herbaceous peony Hangzhou northern medicinal hybrid, bred with Zhejiang characteristics, to adapt to the new varieties of ornamental peony to climate in Zhejiang the groundwork and promotion.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物花粉活力测定领域，尤其涉及一种测定杭白芍花粉活力的方法。
技术介绍
芍药是中国传统花卉，栽培历史已近4000年，早在《诗经·郑风》中便有记载：“维士与女，伊其相谑，赠之以勺药”。芍药被誉为“花相”，和“花王”牡丹相齐名，具有很好的观赏价值和药用价值。芍药性喜光照和冷凉，不耐高温和潮湿，故我国华北地区的菏泽、洛阳等地是芍药、牡丹之乡，观赏品种众多，花型、花色、株型丰富多彩，可广泛用于花境、盆栽或切花观赏。浙江省因气候湿热，本土观赏芍药品种培育几乎为零，即使引进北方品种，也多因气候不适及病虫害严重导致观赏效果大打折扣。但浙江省自古便有种植药用芍药的记载，如现今的金华市磐安县等地生产的杭白芍属于著名的中药材“浙八味”之一，其根状茎品质好，具备补血柔肝、平肝止痛、敛阴收汗等功效；杭白芍的花朵为紫红、粉红、粉白或纯白色，也具备很好的观赏价值；同时，杭白芍在浙江本地栽培历史悠久，对浙江省的湿热气候具一定的适应性。传统观赏芍药很多品种的花型极度重瓣，雄蕊多瓣化，无花药，更无花粉；也有部分品种具备花药，但花粉量很少，这些都为利用人工杂交授粉培育新品种带来阻碍。相比较而言，杭白芍在各方面形态特征和生态习性上更接近芍药的野生原种。例如，因其根状茎长期供作药用，花型的筛选多不被重视，多为单瓣型或荷花型，雄蕊和花药清晰，花粉量极大，是很好的父本材料。因此，将药用杭白芍作为父本，北方观赏芍药品种作为母本，有望培育出既具备良好的观赏价值、又能够适应浙江省湿热气候的观赏芍药新品种，从而解决浙江地区观赏芍药品种极度匮乏的窘状。具较高花粉生活力，是选择父本的重要指标。杭白芍的花粉活力不详，有关其测量工作至今未有报道。因此，建立一套有效测定杭白芍花粉活力测定的方法，可为浙江杭白芍和北方观赏芍药的杂交育种工作带来很大的促进效应。目前对于花粉活力的测定主要有3类方法，分别为花粉染色法、田间授粉法、花粉离体萌发法。花粉染色法是使用化学试剂对花粉进行染色，根据染色后花粉颜色的深浅判断活力状况，方法快速、简便，主要有K2-KI染色法、醋酸洋红染色法、TTC染色法等。在《芍药花粉生活力测定与杂交亲本选择初步研究》、《芍药花粉活力测定方法的研究》、《芍药花粉活力和柱头可授性的研究》、《长期储藏芍药花粉生活力测定方法研究》等文献中，便已记载利用染色法来测定不同花型观赏芍药品种的花粉活力。但能够被染色的花粉却未必能够萌发，不一定会伸出花粉管，因此能够被染色却又无法生出花粉管的花粉，在杂交授粉后也未必能够受精结实，故染色法测定的花粉活力往往偏高。田间授粉法是直接在田间进行杂交育种实验，待果实成熟后计算结实率。该方法最为原始、直接和可靠，但也最为费时费工，受季节和天气影响较大，难以满足培育新品种的迫切需求。人工给予花粉萌发的条件，让其能够生长花粉管，根据萌发比率来测定花粉活力，是可靠、便捷的方法，这就是花粉的离体萌发法。已多有论文报道利用离体萌发法来测量北方观赏芍药品种的花粉活力，如《长期储藏芍药花粉生活力测定方法研究》、《不同花型芍药的花粉生活力测定和比较研究》、《培养基成分对芍药花粉萌发及花粉管生长的影响》、《三种贮藏温度条件下芍药花粉的储藏特性》、《不同条件下芍药花粉的贮藏寿命》、《芍药花粉超低温保存4年后的生活力检测》、《芍药花粉离体萌发培养基组分的优化》等。这些报道涉及到培养基的固态或液态形式、不同的成分配比等，但研究材料基本都是北方的观赏芍药品种，有关南方地区药用型芍药的花粉活力报道从未出现。申请人通过花粉活力观测的实践发现，杭白芍花粉萌发的培养基成分配比和有效观测时间等，与传统的观赏芍药品种相比具有差异，且花粉在培养过程中存在着较为严重的下陷现象，这在以往的报道中未见到涉及。因此，建立一套适合杭白芍花粉活力测定的科学方法，具显著的理论和实践意义，可更好的推动浙江本土的药用杭白芍与北方观赏芍药品种的杂交育种工作，以求能够早日获得具备自主知识产权和浙江地域特色的观赏芍药新品种。
技术实现思路
本专利技术提供了一种测定杭白芍花粉活力的方法，可以快速、准确地测定杭白芍的花粉活力。一种测定杭白芍花粉活力的方法，包括：收集杭白芍的花粉；将所述的花粉置于培养基的表面进行离体培养；离体培养结束后统计花粉萌发率；所述培养基的组成为：蔗糖80～150g/L，硼酸15～30mg/L，琼脂8～10g/L；所述离体培养的时间为2.5～3.5h。花粉的离体萌发法是测定花粉活力的有效方法，结果可重复性高，一般包括如下步骤：收集花粉，将花粉置于培养基上进行离体培养，在显微镜下观察花粉萌发情况，统计花粉萌发率。花粉的萌发能力是反映花粉活力的指标之一，因花粉只有萌发并长出花粉管，才能穿过花柱，进入子房，完成受精作用。花粉的萌发能力通常以花粉萌发率来表示，通过统计花粉的萌发率可以测定花粉的活力。离体培养的培养基、培养时间是影响测定准确率的主要因素，不同种、品种的植物，其花粉所适宜的培养基的成分往往差异很大，本专利技术培养基为固体培养基，有利于后续显微镜的观察，且由水、蔗糖、硼酸和琼脂组成。其中，蔗糖为花粉萌发的主要营养物质来源，硼酸则能够促进花粉的萌发和花粉管的持续伸长，而蔗糖和硼酸只有在适宜的浓度范围内，才能够使花粉良好的萌发。优选的，所述蔗糖的浓度为100g/L，所述硼酸的浓度为20g/L。其次，本专利技术针对杭白芍的花粉在培养过程中存在的下陷现象，对离体培养的培养基中的琼脂含量以及培养时间进行控制，来提高花粉活力测定的准确性。所述离体培养的时间优选为3h，培养基中，所述琼脂的浓度优选为8g/L。另外，本专利技术的离体培养时间还兼顾了花粉萌发的群体效应，如果培养时间较短，则花粉萌发量少，不能够如实反映花粉活力。在本专利技术的离体培养时间内，杭白芍的花粉萌发率趋于稳定。此外本专利技术所述的杭白芍产自浙江省金华市磐安县。所述收集花粉的方法为：采集杭白芍的花药，置于干燥的器皿中干燥24～48小时，直至花粉完全开裂，然后收集花粉，其中，所述的花药最好取自内层花瓣略绽开、花药隐约可见时的杭白芍的花朵。离体培养时，可将未凝固的培养基加入到凹形载玻片的球形凹面内，为对焦清晰，提高统计的准确性，应尽可能保持培养基的表面平整，待培养基凝固后，再将花粉接种至培养基的表面即可。适宜的培养温度有利于杭白芍花粉快速的萌发，优选的，所述离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定杭白芍花粉活力的方法，包括：收集杭白芍的花粉；将所述的花粉置于培养基的表面进行离体培养；离体培养结束后统计花粉萌发率；其特征在于，所述培养基的组成为：蔗糖80～150g/L，硼酸15～30mg/L，琼脂8～10g/L；所述离体培养的时间为2.5～3.5h。

【技术特征摘要】
1.一种测定杭白芍花粉活力的方法，包括：收集杭白芍的花粉；将
所述的花粉置于培养基的表面进行离体培养；离体培养结束后统计花粉萌
发率；其特征在于，
所述培养基的组成为：蔗糖80～150g/L，硼酸15～30mg/L，琼脂8～10
g/L；
所述离体培养的时间为2.5～3.5h。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的杭白芍产自浙江
省金华市磐安县。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蔗糖的浓度为100g/L。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硼酸的浓度为20
mg/L。
5.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏宜平，张佳平，吴昀，李丹青，王冠群，阮婷立，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33