利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法技术

本发明专利技术涉及利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法，先分别配置熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液，对对照品溶液进行色谱分析，分别获得各组分的峰面积，以对照品溶液的进样量为横坐标，对照品溶液中各组分的峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线；向山茱萸粉末中加入提取剂，提取得到样品溶液，将样品溶液抽滤，所得滤液为供试液；对供试液进行色谱分析，获得供试液中各被测组分的峰面积，计算得到各组分的含量，完成利用UFLC法同时对山茱萸中5种三萜酸成分的检测。本发明专利技术应用UFLC法，对山茱萸成分进行分析研究，显著减少分析时间，在9min内即可获得很好的分离效果；同时相应减少溶剂、样品消耗。

Simultaneous determination of 5 kinds of three terpene acids in Cornus officinalis by UFLC

The present invention relates to a method for simultaneously detecting 5 three components of triterpene acids in Cornus officinalis by UFLC method, first configuration of ursolic acid and oleanolic acid, hawthorn acid, corosolic acid and betulinic acid standard solution, the chromatographic analysis reference solution respectively each component peak area, with the sample the amount of standard solution as abscissa and peak area of each control solution in the longitudinal coordinates were added to the standard curve; dogwood powder extraction agent, extract the sample solution, the sample solution is filtered, the filtrate as the test solution; chromatographic analysis of the tested liquid, obtained in the test solution the detected peak area points, calculate the content of each component, use UFLC method for simultaneous detection of 5 kinds of three terpene acid composition in Cornus officinalis. The method utilizes UFLC method to analyze and study the components of Cornus officinalis, thereby reducing the analysis time and obtaining good separation effect in 9min, and reducing solvent consumption and sample consumption at the same time.

【技术实现步骤摘要】
利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法
本专利技术涉及成分检测领域，具体涉及利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法。
技术介绍
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸(CornusoffcinalisSieb.etZucc)的干燥成熟果肉，味酸、涩，性微温，归肝、肾经，具有补益肝肾、涩精固脱的功效。近年来山茱萸及其提取物已被证明有多种药理活性，如抗炎、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、保肝以及神经保护等作用。山茱萸中主要化学成分有环烯醚萜苷类、鞣质、黄酮、有机酸、多糖、三萜类、挥发性成分等。山茱萸中的三萜酸大部分属于三萜类中的五环三萜酸，目前检测到山茱萸三萜酸成分主要包括熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸、白桦脂酸，参见袁菊丽等.山茱萸的主要化学成分及药理作用[J].化学与生物工程,2011,05:7-9；刘博等.HPLC法测定山茱萸中科罗索酸的含量[J].药物分析杂志,2011,12:2217-2219；刘博,吴和珍.山茱萸药材中三萜类成分的研究[J].湖北中医杂志,2010,12:75-76。已有研究表明山茱萸中的三萜酸可以降低血糖、改善糖尿病并发症如心肌病变、视网膜病变、糖尿病肾病等，因此检测山茱萸中三萜酸成分及其含量对于预防和治疗糖尿病及其并发症具有指导意义。目前关于山茱萸中三萜酸成分都是独立检测，金德庄等运用HPLC的方法分析山茱萸中熊果酸、齐墩果酸含量，刘博等运用HPLC法检测山茱萸中科罗索酸含量，山楂酸和科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸为同分异构体，这5种酸同为山茱萸中三萜酸其结构和性质相似，用高效液相色谱法测定分析时间较长且不易分离，如何快速、准确地同时测定山茱萸中山楂酸、科罗索酸、白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸含量具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法，能够快速检测出山茱萸中5种三萜酸成分含量，且精确度高。为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：包括以下步骤：(1)分别配置熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液，对对照品溶液进行色谱分析，获得熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的峰面积，以对照品溶液的进样量为横坐标，对照品溶液中各组分的峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线；(2)向山茱萸粉末中加入提取剂，提取得到样品溶液，将样品溶液抽滤，所得滤液为供试液；(3)对供试液进行色谱分析，获得供试液中各被测组分的峰面积，以供试液中各被测组分的峰面积为纵坐标代入标准曲线中，得出供试液中各被测组分的进样量，再计算得到供试液中熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的含量，完成利用UFLC法同时对山茱萸中5种三萜酸成分的检测。进一步地，步骤(1)中采用甲醇分别配置熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液。进一步地，步骤(1)中熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液的浓度分别为0.8mg/mL、0.1mg/mL、0.005mg/mL、0.005mg/mL和0.001mg/mL。进一步地，步骤(2)中提取剂为体积分数40～80％乙醇溶液。进一步地，步骤(2)中山茱萸粉末和提取剂之比为1g：(5～25)mL。进一步地，步骤(2)中提取6～15min。进一步地，步骤(2)中在超声微波组合反应系统中提取，其中，微波功率为100～500W，超声功率为120～600W。进一步地，步骤(2)中提取的温度为40～80℃。进一步地，步骤(2)中向所得滤液中加入提取剂，直至所得溶液重量与样品溶液重量相同，得到供试液。进一步地，步骤(1)和步骤(3)的色谱分析条件为：Shim-packXR-ODSIII色谱柱，规格2.0mm×75mm×1.6μm；流动相：体积比为84:16的甲醇-40mmol/L磷酸二氢钾缓冲液；流速0.2mL/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样体积：1μL。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术应用超高效液相色谱(UFLC)法，对山茱萸成分进行分析研究，具有超强的分离能力及超高灵敏度，其在峰容量、分析效率、灵敏度和分辨率方面均优于常规HPLC，可在极短的时间内达到柱平衡或重新平衡，显著减少分析时间，在9.0min内即可获得很好的分离效果；同时会减少溶剂、样品消耗，该方法精密度高、重现性好、操作简便，测定结果准确可靠，是一种高效、环保、可行的质量评价技术。该法快速、简便、分离效果好，准确度好，可用于山茱萸药材有效成分分析及质量控制。进一步地，本专利技术通过调节料液比、提取时间、微波功率和超声功率等条件，提高提取率。【附图说明】图1是对照品的色谱图。图2是山茱萸样品的色谱图。图3是不同料液比对总三萜酸提取率结果比较曲线图。图4是不同提取时间对总三萜酸提取率结果比较曲线图。图5是不同提取温度对总三萜酸提取率结果比较曲线图。图6是不同乙醇浓度对总三萜酸提取率结果曲线比较图。图7是不同微波功率对总三萜酸提取率结果比较曲线图。图8是不同超声功率对总三萜酸提取率结果比较曲线图。其中：1.山楂酸2.科罗索酸3.白桦脂酸4.齐墩果酸5.熊果酸。【具体实施方式】下面结合附图和具体实施方式对本专利技术做进一步详细说明。1.仪器与材料NexeraUHPLCLC-30A(日本SHIMADZU)：LC-30AD二元泵系统，SIL-30AC自动进样器，SPD-20AUFLC紫外可见检测器，CTO-30A柱温箱；超纯水仪(美国Milipore公司)；精密微量移液器(德国Eppendorf公司)；AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；超声波微波组合反应系统(南京先欧仪器制造有限公司)；SYFM-8Ⅱ型微粉机(济南松岳机器)。熊果酸对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-15082905)，齐墩果酸对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-15030105)，山楂酸对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-16072803)，科罗索酸对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-16052204)，白桦脂酸对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-16032403)。甲醇、磷酸二氢钾为色谱纯，水为超纯水。山茱萸采自陕西省丹凤县，经陕西师范大学生命科学学院肖娅萍教授鉴定为山茱萸(CornusoffcinalisSieb.etZucc.)的干燥成熟果肉。将以上药材干燥，粉碎，干燥保存，备用。2.方法与结果2.1混合对照品溶液的制备分别精密称取熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸对照品各0.7mg，白桦脂酸对照品1.4mg，甲醇溶解，1mL容量瓶定容。分别精密量取上述5种对照品溶液各200μL置于1mL容量瓶中，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，将续滤液混合即得混合对照品溶液。2.2供试品溶液的制备精密称取山茱萸粉末1.00g，置于XO-200型专用玻璃反应瓶中，加体积分数为60～90％的乙醇溶液5～25mL密封，称重质量为A，连接好回流装置，于XO-200超声微波组合反应系统中提取6～15min，其中，微波功率100～500W，超声功率120～600W，温度40～80℃，取出，抽滤，所得滤液再本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)分别配置熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液，对对照品溶液进行色谱分析，获得熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的峰面积，以对照品溶液的进样量为横坐标，对照品溶液中各组分的峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线；(2)向山茱萸粉末中加入提取剂，提取得到样品溶液，将样品溶液抽滤，所得滤液为供试液；(3)对供试液进行色谱分析，获得供试液中各被测组分的峰面积，以供试液中各被测组分的峰面积为纵坐标代入标准曲线中，得出供试液中各被测组分的进样量，再计算得到供试液中熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的含量，完成利用UFLC法同时对山茱萸中5种三萜酸成分的检测。

【技术特征摘要】
1.利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)分别配置熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液，对对照品溶液进行色谱分析，获得熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的峰面积，以对照品溶液的进样量为横坐标，对照品溶液中各组分的峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线；(2)向山茱萸粉末中加入提取剂，提取得到样品溶液，将样品溶液抽滤，所得滤液为供试液；(3)对供试液进行色谱分析，获得供试液中各被测组分的峰面积，以供试液中各被测组分的峰面积为纵坐标代入标准曲线中，得出供试液中各被测组分的进样量，再计算得到供试液中熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的含量，完成利用UFLC法同时对山茱萸中5种三萜酸成分的检测。2.根据权利要求1所述的利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法，其特征在于：步骤(1)中采用甲醇分别配置熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液。3.根据权利要求1所述的利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分的方法，其特征在于：步骤(1)中熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的对照品溶液的浓度分别为0.8mg/mL、0.1mg/mL、0.005mg/mL、0.005mg/mL和0.001mg/mL。4.根据权利要求1所述的利用UFLC法同时检测山茱萸中5种三萜酸成分...

【专利技术属性】
技术研发人员：康杰芳，王艳珍，蒋罗曼，张秋生，王福兴，王喆之，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61