物种鉴别试剂盒和物种鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种物种鉴别试剂盒和物种鉴别方法，物种鉴别试剂盒包括一个聚合酶链式反应试剂、一个阳性对照品、一个无菌水以及至少一种物种的专一性引物对；物种鉴别方法采用所述物种鉴别试剂盒，包括的步骤有：(1)将待测细胞与各个物种的专一性引物对进行PCR反应；(2)将PCR反应产物进行跑胶，获得PCR反应产物大小；(3)根据PCR反应产物大小鉴别出待测细胞物种。本发明专利技术相比现有技术具有简单、快速、灵敏、准确地鉴别细胞物种的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，尤其涉及一种物种鉴别试剂盒和物种鉴别方法。
技术介绍
细胞培养，最害怕被污染，不仅是要避免细菌,霉菌的污染，也要避免污染到其他种类的细胞。但是在实验时，常常需要操作不同种类的细胞，即使很熟练的操作人员，还是有可能会有细胞混杂的情况。由于细胞在显微镜下的型态，差别不大，因此细胞培养时，如果发生细胞污染，是没有办法可以区别的。以至于一直到实验结束，都不知道使用的细胞，已经不是原本的细胞了，也导致实验结果不被采信，或是做出错误的结论。因此，如果有一种物种鉴别试剂盒和物种鉴别方法能够简单、快速、灵敏、准确地鉴别出细胞的物种就显得非常具有意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种能够简单、快速、灵敏、准确地鉴别物种的物种鉴别试剂盒，以克服现有技术存在的不足。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下的技术方案：一种物种鉴别试剂盒，其特征在于：包括一个聚合酶链式反应试剂、一个阳性对照品、一个无菌水以及至少一种物种的专一性引物对。在本专利技术的物种鉴别试剂盒，有15种物种的专一性引物对，所述15种物种的专一性引物对分别为兔、马、鸡、狗、绿猴、猪、老鼠、大鼠、猫、人、恒河猴、牛、仓鼠、果蝇、鱼的专一性引物对。在本专利技术中，通过下列步骤来确定物种的专一性引物对：(1)选定待鉴别的物种：依照目前最常见混杂的样品，选定待鉴别的物种。(2)比对基因库：搜寻基因库，比对待鉴别物种的异同，选定各物种专一的检测基因序列作为引物。(3)设计引物：选定检测基因序列作为引物，设计聚合酶链式反应所用引物，需考虑专一性、灵敏度，以及各种反应条件。(4)以细胞株模拟物种进行专一性测试：引物设计完成后，以细胞株进行模拟测试专一性，如专一性不足，则重新设计引物。(5)以阳性对照质粒验证灵敏度：引物专一性达标后，以阳性对照质粒来检测引物灵敏度，目标100颗细胞即可检测，如果灵敏度不足，则重新设计引物。(6)以细胞株模拟物种进行专一性测试：引物专一性与灵敏度皆达标后，以细胞株相互混合，模拟物种混杂，测试引物的鉴别效能。另外，本专利技术还提供一种物种鉴别方法，该鉴别方法采用上述物种鉴别试剂盒，其步骤为：(1)将待测细胞与各个物种的专一性引物对进行PCR反应；(2)将PCR反应产物进行跑胶，获得PCR反应产物大小；(3)根据PCR反应产物大小鉴别出待测细胞物种。采用上述技术方案，本专利技术相比现有技术具有简单、快速、灵敏、准确地鉴别细胞物种的优点，具体体现在：(1)操作简便:只要使用本专利提供的试剂盒，就可以鉴别细胞的物种。(2)判读容易:每个物种的聚合酶链式反应产物大小固定，讯号清晰，容易判读。(3)专一性强:单一物种只会有专一的讯号，不会与其他物种混淆。(4)灵敏度高:100颗细胞就可以正确鉴别物种。(5)用途广泛：不仅能够鉴别出单一物种的细胞物种；而且可以鉴别物种混杂的细胞物种。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行详细说明：图1A、图1B为兔的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图2为马的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图3A、图3B为鸡的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图4为狗的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图5为绿猴的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图6为猪的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图7A、图7B为老鼠的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图8A、图8B为大鼠的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图9为猫的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图10A、图10B为人的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图11为恒河猴的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图12为牛的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图13为仓鼠的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图14A、图14B为果蝇的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图15A、图15B为鱼的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；图16为兔、马、鸡的专一性引物灵敏度测试结果图；图17为狗、绿猴、猪的专一性引物灵敏度测试结果图；图18为老鼠、大鼠、猫的专一性引物灵敏度测试结果图；图19为人、恒河猴、牛的专一性引物灵敏度测试结果图；图20为仓鼠、果蝇、鱼的专一性引物灵敏度测试结果图；图21为混杂物种鉴别结果图。具体实施方式本专利技术的物种鉴别试剂盒，包括一个聚合酶链式反应试剂、一个阳性对照品、一个无菌水以及至少一种物种的专一性引物对。在本实施例中，有15种物种的专一性引物对，该15种物种的专一性引物对分别为兔、马、鸡、狗、绿猴、猪、老鼠、大鼠、猫、人、恒河猴、牛、仓鼠、果蝇、鱼的专一性引物对，各物种作为引物的基因序列如表1所示：在实施例中，通过下列方法来获得上述15个物种的专一性引物对：(1)选定带鉴别的15个物种：依照目前最常见混杂的样品，选定待鉴别的物种。(2)比对基因库：搜寻基因库，比对待鉴别物种的异同，选定各物种专一的检测基因序列作为引物。(3)设计引物：选定检测基因序列作为引物，设计聚合酶链式反应所用引物，需考虑专一性、灵敏度，以及各种反应条件。(4)以细胞株模拟物种进行专一性测试：引物设计完成后，以细胞株进行模拟测试专一性，如专一性不足，则重新设计引物。(5)以阳性对照质粒验证灵敏度：引物专一性达标后，以阳性对照质粒来检测引物灵敏度，目标100颗细胞即可检测，如果灵敏度不足，则重新设计引物。(6)以细胞株模拟物种进行专一性测试：引物专一性与灵敏度皆达标后，以细胞株相互混合，模拟物种混杂，测试引物的鉴别效能。本专利技术的物种鉴别方法，该鉴别方法采用上述物种鉴别试剂盒，其步骤为：(1)将待测细胞与各个物种的专一性引物对进行PCR反应，反应过程为：步骤1:变性:94℃,10min；步骤2:变性:94℃,30sec；步骤3:退火:60℃,30sec；步骤4:延伸:72℃,30sec；步骤5:循环步骤2-3-4:30个循环；步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种物种鉴别试剂盒，其特征在于：包括一个聚合酶链式反应试剂、一个阳性对照品、一个无菌水以及至少一种物种的专一性引物对。

【技术特征摘要】
1.一种物种鉴别试剂盒，其特征在于：包括一个聚合酶链式反应试剂、
一个阳性对照品、一个无菌水以及至少一种物种的专一性引物对。
2.根据权利要求1所述的物种鉴别试剂盒，其特征在于：有15种物种
的专一性引物对，所述15种物种的专一性引物对分别为兔、马、鸡、狗、
绿猴、猪、老鼠、大鼠、猫、人、恒河猴、牛、仓鼠、果蝇、鱼的专一性
引物对。
3.根据权利要求1或2所述的物种鉴别试剂盒，其特征在于：通过下
列步骤来确定物种的专一性引物对：
(1)选定待鉴别的物种：依照目前最常见混杂的样品，选定待鉴别的
物种。
(2)比对基因库：搜寻基因库，比对待鉴别物种的异同，选定各物种
专一的检测基因序列作为引物。
(3)设计引物：选定检测基因序列作为引物，设计聚合酶链式反应所
用引物，需考虑专...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜学恒，
申请(专利权)人：上海逍鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31