一种利用一锅酶法制备Globotriose及其类似物的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用一锅酶法制备Globotriose及其类似物的方法，是以半乳糖或（2-脱氧半乳糖、4-脱氧半乳糖、6-脱氧半乳糖）、乳糖、UTP、ATP、二硫苏糖醇、MgCl2、酵母无机焦磷酸酶、Tris-HCl缓冲液为反应体系，分别加入半乳糖激酶SpGalK、UTP-葡萄糖-1-磷酸尿甙基转化酶SpGalU和α-(1→4)半乳糖基转移酶LgtC三种酶进行反应，之后离心除蛋白，收集含Globotriose的上清液并用活性炭色谱柱和分子筛柱纯化，经冷冻干燥后得到粉末状Globotriose及其类似物。本发明专利技术方法中所用底物主要为半乳糖，其价格便宜，来源广泛；且所用到的酶SpGalK、SpGalU和LgtC具有广泛的底物适应性，为大量快速的生产Globotriose及其类似物提供了可能。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用一锅酶法制备Globotriose及其类似物的方法，步骤是： （1）按终浓度计，以半乳糖5～15mM,乳糖5～25mM,UTP5～15mM,ATP5～15mM,二硫苏糖醇1～10mM,MgCl25～35mM，酵母无机焦磷酸酶0～10U，pH7.0～8.0的Tris‑HCl缓冲液10～300mM为反应体系，加入终浓度均为0.5～1.5mg/L的半乳糖激酶SpGalK、UTP‑葡萄糖‑1‑磷酸尿甙基转化酶SpGalU和α‑(1→4)半乳糖基转移酶LgtC； （2）置30～45℃水浴条件下，反应时间5～50h； （3）将反应后溶液置于沸水中煮3～10分钟使其中的酶沉淀，然后以10000～12000转/分离心5～15分钟，收集含Globotriose的上清液； （4）将步骤（3）获得的上清液过活性炭色谱柱，即：先用5～20倍柱体积的蒸馏水洗去无机杂质，接着用5～25倍柱体积的2%～8%的乙醇洗去反应后余下的乳糖，再用1～16倍柱体积的12%～25%的乙醇洗脱并收集洗脱液，得到初步纯化的Globotriose溶液； （5）将步骤（4）获得的Globotriose溶液浓缩后过分子筛柱，用去离子水洗脱并收集洗脱液，得到二次纯化的Globotriose溶液； （6）将步骤（5）得到的洗脱液冷冻干燥，得到粉末状Globotriose产品； 上述制备方法中，若将终浓度为5～15mM的2‑脱氧半乳糖、4‑脱氧半乳糖或6‑脱氧半乳糖替换步骤（1）中的半乳糖，进行步骤（1）至步骤（5）所述的同样步骤，即可得到其相应的Globotriose的类似物。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏，赵雪尔，王鹏，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37